【摘要】：目的觀察結(jié)締組織生長因子(CTGF)對腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞上組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(tTG)和Ⅲ型膠原蛋白的影響,并探討其相關(guān)的調(diào)控機(jī)制。方法以大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞(NRK-49F細(xì)胞)為研究對象,給予CTGF刺激(不同劑量或不同時間),檢測tTG的蛋白相對表達(dá)量和mRNA水平。觀察CTGF對絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)1/2和磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活作用和不同信號通路阻斷對CTGF調(diào)節(jié)tTG和Ⅲ型膠原蛋白作用的影響。結(jié)果以25、50、100、200 ng/mL的CTGF刺激NRK-49F細(xì)胞24 h后的tTG蛋白相對表達(dá)量逐漸遞增(P0.05),且均顯著高于對照組(P值均0.05)。以100 ng/mL的CTGF刺激NRK-49F細(xì)胞6、12、24 h的tTG蛋白相對表達(dá)量逐漸遞增(P0.05),刺激12、24、48 h時的tTG蛋白相對表達(dá)量均顯著高于對照組(P值均0.05)。以100 ng/mL的CTGF刺激NRK-49F細(xì)胞6、12、24 h后tTG mRNA水平逐漸遞增(P0.05),且均顯著高于對照組(P值均0.05)。以100 ng/mL的CTGF刺激NRK-49F細(xì)胞5 rmin時ERK和Akt通路迅速磷酸化,刺激30 rmin后又恢復(fù)至基礎(chǔ)水平。p38和c-Jun氨基末端激酶信號通路未檢測到激活。單獨(dú)以100.g/mL的CTGF刺激NRK-49F細(xì)胞24 h后的tTG蛋白相對表達(dá)量顯著高于對照組(P0.05);以100ng/mL的CTGF和20μmol/L的LY294002,以及單獨(dú)以20μmol/L的LY294002刺激NRK-49F細(xì)胞24 h后的tTG蛋白相對表達(dá)量與對照組的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。使用LY294002阻斷P13K/Akt通路后,CTGF對tTG蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)作用被抑制。單獨(dú)以100 ng/mL的CTGF,以及100 ng/mL的CTGF和20μmol/L的PD98059刺激NRK-49F細(xì)胞24 h后的tTG蛋白相對表達(dá)量均顯著高于對照組(P值均0.05);而單獨(dú)以20μmol/L的PD98059刺激NRK-49F細(xì)胞24 h后的tTG蛋白相對表達(dá)量與對照組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。使用PD98059阻斷ERK1/2 MAPK通路后,CTGF對tTG蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)作用并未受到影響。單獨(dú)以100 ng/mL的CTGF刺激NRK-49F細(xì)胞24 h后的細(xì)胞內(nèi)Ⅲ型膠原蛋白和分泌的Ⅲ型膠原蛋白的相對表達(dá)量均顯著高于對照組(P值均0.05);以100 ng/mL的CTGF和20μmol/L的LY294002刺激NRK-49F細(xì)胞24 h后的細(xì)胞內(nèi)Ⅲ型膠原蛋白和分泌的Ⅲ型膠原蛋白的相對表達(dá)量均顯著低于單獨(dú)以100 ng/mL的CTGF刺激24 h后(P值均0.05);單獨(dú)以20μmol/L的LY294002刺激NRK-49F細(xì)胞24 h后的細(xì)胞內(nèi)Ⅲ型膠原蛋白和分泌的Ⅲ型膠原蛋白的相對表達(dá)量與對照組的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。使用LY294002阻斷PI3K/Akt通路后,CIGF對Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)作用也被抑制,但LY294002本身并不影響tTG的表達(dá)。結(jié)論 CTGF可以通過PI3K/Akt途徑上調(diào)腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞中tTG和Ⅲ型膠原蛋白相對表達(dá)量,在腎間質(zhì)纖維化中起重要作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of connective tissue growth factor (CTGF) on tissue transglutaminase (tTG) and collagen 鈪，

本文編號：2418281