【摘要】：目的 miR-1236為新發(fā)現(xiàn)的具有腫瘤抑制作用的RNA。本研究旨在探討外源性miR-1236轉(zhuǎn)染對(duì)前列腺癌細(xì)胞p21基因的激活作用及對(duì)其生長(zhǎng)的影響。方法根據(jù)對(duì)前列腺癌細(xì)胞的不同處理分為陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染dsControl)和實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染miR-1236)2組。qRT-PCR檢測(cè)p21、細(xì)胞周期依賴性激酶CDK4和CDK6mRNA的表達(dá)變化。蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)p21、CDK4和CDK6蛋白的表達(dá)變化。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布。MTS法檢測(cè)細(xì)胞活力,集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。結(jié)果與dsControl組相比,轉(zhuǎn)染miR-1236后2種細(xì)胞中p21mRNA表達(dá)分別上調(diào)2.16(t=12.67,P0.01)和2.26倍(t=10.93,P0.01);CDK4mRNA的表達(dá)分別下調(diào)0.56(t=6.617,P0.01)和0.43倍(t=5.698,P0.01);CDK6mRNA的表達(dá)分別下調(diào)0.78(t=3.101,P0.05)和0.71倍(t=3.841,P0.01)。蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)結(jié)果與qRT-PCR結(jié)果相符。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染miR-1236后,位于S期和G2/M期的細(xì)胞比例明顯下降,位于G0/G1期的細(xì)胞比例明顯增大。MTS法顯示,與dsControl組相比,轉(zhuǎn)染miR-1236 2種細(xì)胞活力明顯下降。dsControl組DU145和PC-3細(xì)胞形成的集落數(shù)分別為241±37.64和254.33±38.18;miR-1236組DU145和PC-3細(xì)胞形成的集落數(shù)明顯減少,分別為99.67±34.2(t=3.939,P0.05)和81±35.55(t=4.354,P0.05),提示細(xì)胞增殖能力降低。結(jié)論外源性miR-1236能通過激活前列腺癌細(xì)胞中p21蛋白的表達(dá)并顯著抑制其生長(zhǎng),可能成為前列腺癌基因靶向治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of exogenous microRNAs-1236 transfection on p21 gene activation and growth in prostate cancer cells. Methods According to the different treatment of prostate cancer cells, microRNAs-1236 were divided into two groups: negative control group (transfected with dsControl) and experimental group (transfected with microRNAs-1236). The expression of p21, CDK4 and CDK6 mRNA was detected by CR. The expression of p21, CDK4 and CDK6 proteins was detected by Western blot. Cell cycle distribution was detected by flow cytometry. Cell viability was detected by MTS, and cell proliferation was detected by colony forming assay. Results Compared with dsControl group, p21mR was detected in the two kinds of cells after transfection of Mi-1236. The expression of NA was up-regulated by 2.16 (t = 12.67, P 0.01) and 2.26 times (t = 10.93, P 0.01), the expression of CDK4 mRNA was down-regulated by 0.56 (t = 6.617, P 0.01) and 0.43 times (t = 5.698, P 0.01), the expression of CDK6 mRNA was down-regulated by 0.78 (t = 3.101, P 0.05) and 0.71 times (t = 3.841, P 0.01), respectively. After R-1236, the proportion of cells in S phase and G2/M phase decreased significantly, and the proportion of cells in G0/G1 phase increased significantly. MTS assay showed that the viability of the transfected microarray-1236 cells decreased significantly compared with the dsControl group. The number of colonies formed by DU145 and PC-3 cells in dsControl group were 241 (+ 37.64) and 254.33 (+ 38.18), DU145 and PC-3 cells in microarray-1236 were formed, respectively. The number of colonies in prostate cancer cells decreased significantly, which were 99.67 (+ 34.2) (t = 3.939, P 0.05) and 81 (+ 35.55) (t = 4.354, P 0.05), suggesting that the proliferation of prostate cancer cells was decreased.
【作者單位】： 鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院(湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院)泌尿外科腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【分類號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：2249023