本文選題：肝再生增強因子 + 上皮細胞-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化��； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2014年博士論文

【摘要】：第一部分ALR對腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的影響及機制 目的：肝再生增強因子（ALR）在缺血再灌注大鼠中表現(xiàn)出明顯的腎臟保護作用，但其是否參與腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化（EMT）病理過程，目前尚不清楚。本研究擬通過建立腎小管EMT細胞模型，觀察ALR是否參與EMT的病理過程，并探討外源性給予重組人ALR（rhALR）對腎小管EMT的影響及其機制。 方法：建立轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導的腎小管EMT細胞模型，先檢測細胞內(nèi)源性ALR蛋白及mRNA表達，再將細胞分為五組：①正常對照組；②單純rhALR處理組；③單純TGF-β1刺激組；④TGF-β1+20μg/ml rhALR處理組；⑤TGF-β1+80μg/ml rhALR處理組。酶聯(lián)免疫法（ELISA）法檢測培養(yǎng)上清液和胞質(zhì)中的TGF-β1含量；蛋白免疫印跡和免疫熒光激光共聚焦檢測上皮標記物E-鈣粘蛋白及（�。┏衫w維細胞標記物α平滑肌肌動蛋白和波形蛋白的表達，實時熒光定量PCR檢測細胞E-鈣粘蛋白和波形蛋白mRNA水平；蛋白免疫印跡檢測TGF-β1受體Ⅰ(TβRⅠ)、TGF-β1受體Ⅱ(TβRⅡ)及其下游Smads蛋白（Smad2、Smad4、Smad6、Smad7及磷酸化Smad2）、轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和磷酸化NF-κB表達。 結(jié)果：蛋白免疫印跡檢測和實時熒光定量PCR檢測顯示，與正常對照組比較，TGF-β1刺激組NRK-52E細胞內(nèi)源性ALR蛋白及mRNA表達顯著增加（P＜0.05）；ELISA檢測顯示，與正常對照組比較，單純ALR處理組NRK-52E細胞培養(yǎng)上清液和胞漿中TGF-β1的含量無顯著差異（P＞0.05）；蛋白免疫印跡檢測顯示，與正常對照組比較，TGF-β1刺激組NRK-52E細胞E-鈣粘蛋白表達顯著下降，而波形蛋白、α-平滑肌肌動蛋白表達顯著上升，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與TGF-β1刺激組比較，TGF-β1+rhALR處理組E-鈣粘蛋白表達上升，而波形蛋白、α-平滑肌肌動蛋白表達下降，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）；蛋白免疫印跡檢測顯示，與正常對照組比較，單純rhALR處理組NRK-52E細胞TβRⅡ受體表達顯著下降（P＜0.05），而TβR-Ⅰ受體、Smad2、Smad4、Smad6、Smad7蛋白及磷酸化Smad2、核因子NF-κB無顯著差異（P＞0.05）；與單純TGF-β1刺激組比較，TGF-β1+rhALR處理組細胞磷酸化Smad2和磷酸化NF-κB水平顯著下降（P＜0.05）。 結(jié)論：ALR參與了腎小管EMT病理過程，rhALR可通過下調(diào)腎小管上皮細胞TβRⅡ受體表達、影響Smad2磷酸化水平及核因子NF-κB轉(zhuǎn)錄，從而抑制TGF-β1誘導的腎小管EMT。 目的：我們的細胞實驗結(jié)果表明，rhALR有抑制腎小管EMT的作用，那么，其是否在體內(nèi)對腎間質(zhì)纖維化存在影響呢？目前尚未知。本部分，擬通過建立腎間質(zhì)纖維化動物模型，觀察rhALR對腎間質(zhì)纖維化的影響，并探討其作用機制。 方法：建立大鼠單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)模型，60只SPF級SD大鼠隨機分為四組：①假手術(shù)組(n=15)；②UUO模型組(n=15)；③UUO+低劑量rhALR（100μg/kg.d）處理組(n=15)；④UUO+高劑量rhALR（200μg/kg.d）處理組(n=15)。四組大鼠分別于術(shù)后第3、7、14天分批處死，留取手術(shù)側(cè)腎臟組織。分別采用HE和Masson染色觀察各實驗組大鼠梗阻側(cè)腎臟組織形態(tài)學改變；蛋白免疫印跡及免疫熒光激光共聚焦檢測腎臟內(nèi)源性ALR蛋白表達；蛋白免疫印跡檢測腎臟組織E-鈣粘蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌動蛋白、纖連蛋白、膠原Ⅰ蛋白表達；實時熒光定量PCR檢測腎臟組織波形蛋白、α-平滑肌肌動蛋白、纖連蛋白、膠原Ⅰ蛋白mRNA表達；蛋白免疫印跡檢測腎臟組織TGF-β1、Smad-2、Smad-3及磷酸化Smad-2、-3蛋白表達。 結(jié)果：蛋白免疫印跡及免疫熒光激光共聚焦檢測顯示，，與假手術(shù)組比較，UUO模型組梗阻3天、7天大鼠腎臟內(nèi)源性ALR表達顯著增加（P＜0.05），與梗阻7天比較，梗阻14天大鼠腎臟內(nèi)源性ALR表達顯著下降（P＜0.05）；與UUO模型組比較，rhALR處理組大鼠梗阻側(cè)腎臟Masson染色纖維化評分顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）；蛋白免疫印跡檢測顯示，與UUO模型組比較，rhALR處理組大鼠梗阻腎臟E-鈣粘蛋白表達上升，而纖連蛋白、膠原Ⅰ蛋白表達下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與UUO模型組比較，rhALR處理組大鼠梗阻腎臟TGF-β1表達顯著下降，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；實時熒光定量PCR檢測顯示，與UUO模型組比較，rhALR處理組大鼠梗阻腎臟波形蛋白、α-平滑肌肌動蛋白、纖連蛋白、膠原Ⅰ蛋白mRNA表達顯著下調(diào)（P＜0.05）。蛋白免疫印跡顯示，與假手術(shù)組比較，UUO模型組大鼠梗阻側(cè)腎臟磷酸化Smad-2和磷酸化Smad-3表達顯著升高（P＜0.05）；與UUO模型組比較，rhALR處理組大鼠梗阻腎臟磷酸化Smad-2和磷酸化Smad-3表達顯著減少（P＜0.05）。 結(jié)論：隨著梗阻時間延長，梗阻腎臟ALR的表達呈先增加后下降的動態(tài)變化，而rhALR可通過抑制TGF-β1表達及下游信號蛋白Smad-2和Smad-3的磷酸化而顯著減輕UUO大鼠梗阻腎臟間質(zhì)纖維化，推測ALR可能在腎間質(zhì)纖維化的病理過程中起一定作用。
[Abstract]:The Effect and Mechanism of the First Part on the Transdifferentiation of Renal Tubular Epithelial Cells

Objective : To observe the pathological process of renal tubular epithelial cell transdifferentiation ( EMT ) in renal tubular epithelial cells ( EMT ) , but it is not clear whether it is involved in the pathological process of EMT in renal tubular epithelial cells ( EMT ) .

Methods : The EMT cell model of renal tubular EMT induced by transforming growth factor - 尾1 ( TGF - 尾1 ) was established . The expression of endogenous alr protein and mRNA was first detected , then the cells were divided into five groups : 鈶

本文編號：1952854