本文選題：Capn4腎透明細(xì)胞癌 + 侵襲　； 參考：《蘇州大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：腎細(xì)胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，大約有70%的腎細(xì)胞癌是透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC），轉(zhuǎn)移是腎細(xì)胞癌導(dǎo)致死亡的主要原因，而腎癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不清楚。μ-型鈣蛋白酶（μ-calpains）在哺乳動物各組織中廣泛表達(dá)，它是一種由催化亞基和調(diào)節(jié)亞基組成的異源二聚體，其中小的調(diào)節(jié)亞基為鈣蛋白酶小亞基-1（Calpain small subunit1，Capn4）。研究發(fā)現(xiàn)Capn4在促進(jìn)細(xì)胞的遷移、增殖和分化中發(fā)揮重要作用，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其在肝癌、膽管癌及乳腺癌的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。本研究應(yīng)用人腎透明細(xì)胞癌組織標(biāo)本及細(xì)胞模型，檢測Capn4在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平，并分析Capn4表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性；研究Capn4對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞趨化運(yùn)動及遷移、侵襲能力的影響，并初步探討可能的作用機(jī)制，以期找到腎透明細(xì)胞癌新的預(yù)后標(biāo)志物和有效的治療靶點(diǎn)。 第一部分Capn4在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義 目的：研究腎透明細(xì)胞癌組織及癌旁組織中Capn4的表達(dá)，分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系，探討其與ccRCC患者臨床預(yù)后的關(guān)系。 方法：采用實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction，qRT PCR)、Western blotting及免疫組化檢測75例ccRCC組織和癌旁正常腎組織的Capn4的基因及蛋白表達(dá)情況，并對其進(jìn)行比較和相關(guān)分析。 結(jié)果: qRT-PCR、Western blotting結(jié)果顯示：ccRCC組織與正常腎組織中均有Capn4的基因和蛋白表達(dá)，在ccRCC組織中Capn4的表達(dá)明顯高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。免疫組化檢測結(jié)果顯示Capn4的表達(dá)與ccRCC的分期、分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及局部侵潤有關(guān)，Capn4與ccRCC患者生存期之間Kaplan-Meier生存曲線分析提示，Capn4高表達(dá)組的ccRCC患者的生存率低于Capn4低表達(dá)組患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：人ccRCC中Capn4高表達(dá)，，其表達(dá)水平與腎癌的分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)；Capn4高表達(dá)患者預(yù)后較差，生存期較短，提示Capn4高表達(dá)在腎透明細(xì)胞癌中可能具有重要意義。 第二部分Capn4在腎透明細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制探討 目的：通過檢測Capn4對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖、運(yùn)動、粘附及遷移侵襲能力的影響，初步探討Capn4在腎透明細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制，以期找到腎透明細(xì)胞癌新的預(yù)后標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)。 方法： 1.qRT PCR方法檢測786-0、ACHN、Caki-1、Caki-2四種不同轉(zhuǎn)移潛能的腎癌細(xì)胞系中Capn4的表達(dá)水平。 2.應(yīng)用合成的小干擾RNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染786-0腎癌細(xì)胞，建立Capn4穩(wěn)定降表達(dá)細(xì)胞系，用qRT PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率。 3.采用CCK-8檢測Capn4降表達(dá)對786-0腎癌細(xì)胞增殖能力的影響。 4.“傷口愈合”實(shí)驗(yàn)檢測Capn4降表達(dá)對786-0腎癌細(xì)胞運(yùn)動能力的影響。 5.用粘附實(shí)驗(yàn)檢測Capn4降表達(dá)對786-0腎癌細(xì)胞間，細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間粘附能力的影響。 6.Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測Capn4降表達(dá)對786-0腎癌細(xì)胞侵襲能力的影響。 7.用Western blotting方法檢測Capn4降表達(dá)對ERK1/2、p-ERK1/2、MMP-2及MMP-9表達(dá)的影響，初步探討Capn4影響腎癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移浸潤的機(jī)制。 結(jié)果：qRT PCR檢測發(fā)現(xiàn)Capn4在786-0、ACHN、Caki-1、Caki-2四種不同轉(zhuǎn)移潛能的腎癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，且在786-0中表達(dá)最高。小干擾RNA技術(shù)轉(zhuǎn)染786-0腎癌細(xì)胞后，建立Capn4穩(wěn)定降表達(dá)細(xì)胞系，qRT PCR檢測Capn4表達(dá)明顯下降。Capn4降表達(dá)明顯抑制786-0腎癌細(xì)胞增殖，且Capn4降表達(dá)的786-0腎癌細(xì)胞與對照組相比，其運(yùn)動、粘附及侵襲能力均減弱。Capn4降表達(dá)減弱了ERK1/2磷酸化水平，降低了基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2及MMP-9的表達(dá)。 結(jié)論：Capn4降表達(dá)后786-0腎癌細(xì)胞增殖、運(yùn)動、遷移、粘附及侵襲能力均受到顯著抑制，顯示Capn4參與對腎癌細(xì)胞的趨化運(yùn)動和轉(zhuǎn)移能力的調(diào)控。Capn4可能是通過持續(xù)激活ERK1/2，而使MMP-2和MMP-9的表達(dá)顯著增加，增強(qiáng)人786-0腎癌細(xì)胞系細(xì)胞的侵襲能力。Capn4有望成為判斷腎透明細(xì)胞癌預(yù)后的重要標(biāo)志物及新的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Renal cell carcinoma ( RCC ) is one of the most common malignant tumors in urinary system . About 70 % of renal cell carcinoma is clear cell renal cell carcinoma ( ccRCC ) , and metastasis is the main cause of death due to renal cell carcinoma . It was found that Cap4n4 plays an important role in promoting cell migration , proliferation and differentiation . It has been found that it plays an important role in the metastasis of liver cancer , cholangiocarcinoma and breast cancer .
To investigate the effects of Capn4 on the chemoattractant movement , migration and invasion ability of renal clear cell carcinoma cells , and to explore possible mechanism of action , with a view to finding new prognostic markers and effective treatment targets for renal clear cell carcinoma .

Expression and clinical significance of first part Capn4 in renal clear cell carcinoma

Objective : To study the expression of Cap3n4 in renal clear cell carcinoma ( RCC ) and adjacent tissues , and to analyze its relationship with clinicopathological features and to investigate the relationship between them and the clinical prognosis of ccRCC .

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本文編號：1840825