本文選題：脂肪酸合成 + 前列腺癌�。� 參考：《吉林大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：研究表明，前列腺癌表現(xiàn)出對脂肪酸從頭合成的強烈需求。通常情況下在正常組織中處于抑制狀態(tài)的脂肪酸從頭合成途徑，在前列腺癌細胞中高度激活，并合成大量脂肪酸，促進腫瘤細胞的生存和發(fā)展。因此，脂肪酸代謝途徑已成為前列腺癌治療研究的一個新熱點。脂肪酸合酶（FASN），是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶，在正常細胞（除肝臟和脂肪組織）中表達水平較低，而在許多癌癥，特別是前列腺癌中呈高表達，，并且提示預(yù)后不良。然而，F(xiàn)ASN在前列腺癌的調(diào)控機制尚不完全清楚。p300是一種轉(zhuǎn)錄共激活因子，并具有乙酰轉(zhuǎn)移酶活性，是前列腺癌的一個十分重要的促癌基因。但在前列腺癌中，p300是否參與FASN和脂肪酸合成調(diào)控還不清楚。 目的：研究FASN和p300的關(guān)系，及p300對FASN的表達和脂肪酸合成的調(diào)控機制；進一步研究p300-FASN通路在前列腺癌中的生物學(xué)功能。方法：我們分析了p300的染色質(zhì)免疫共沉淀測序（CHIP-Seq）的結(jié)果，并使用CHIP技術(shù)驗證p300與FASN的結(jié)合情況，及組蛋白乙�；降淖兓�。我們應(yīng)用RNAi技術(shù)敲除p300或使用不同濃度的p300酶抑制劑處理細胞，在不同的前列腺癌細胞系中降調(diào)p300的表達，再應(yīng)用RT-PCR或western blot技術(shù)檢測FASN的表達。我們應(yīng)用油紅染色檢測細胞或新鮮冷凍組織中脂質(zhì)水平，應(yīng)用MTS技術(shù)鑒定細胞的生存力，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測在人體組織中p300和FASN蛋白質(zhì)的表達水平。傳代雜交產(chǎn)生p300基因敲除小鼠，并監(jiān)測此小鼠前列腺組織中的FASN表達水平及脂質(zhì)水平變化。為了檢測p300-FASN通路的生物學(xué)功能，我們建立和培養(yǎng)低表達p300或FASN或同時低表達兩者的前列腺癌穩(wěn)定細胞系。以腫瘤細胞皮下注射建立小鼠異種移植模型，記錄移植瘤生長曲線，收獲的腫瘤移植物用于制備冷凍和石蠟切片等。結(jié)果：（1）在前列腺癌細胞中p300結(jié)合于FASN啟動子，上調(diào)組蛋白乙�；�。（2）p300調(diào)節(jié)FASN mRNA和蛋白表達水平。（3）在人類前列腺癌組織中，p300與FASN的表達呈正相關(guān)。（4）無論在體外或在體內(nèi)，p300均會影響前列腺癌細胞中脂肪酸的合成。（5）p300通過FASN這一通路調(diào)節(jié)前列腺癌細胞增殖和腫瘤生長。結(jié)論：我們的研究確定了，p300作為前列腺癌的一個重要的促癌因子，與FASN呈正相關(guān)。它在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)節(jié)FASN表達，并影響前列腺癌的脂肪酸合成，進一步通過FASN這一通路影響前列腺癌細胞的增殖生長。它在以脂肪酸代謝為靶向的前列腺癌的治療中具有重要的意義。
[Abstract]:Studies have shown that prostate cancer has shown a strong demand for fatty acid ab initio synthesis. Normally, fatty acids in normal tissues, which are inhibited by ab initio synthesis, are highly activated in prostate cancer cells, and a large amount of fatty acids are synthesized to promote the survival and development of tumor cells. Therefore, fatty acid metabolism pathway has become a new research hotspot in prostate cancer treatment. Fatty acid synthase (FASN), a key enzyme in fatty acid synthesis, has a low expression level in normal cells (except liver and adipose tissue), but is highly expressed in many cancers, especially prostate cancer, indicating poor prognosis. However, the regulatory mechanism of FASN in prostate cancer is not fully understood. P300 is a transcriptional co-activator with acetyltransferase activity, which is a very important oncopromoting gene in prostate cancer. However, it is not clear whether the p300 is involved in the regulation of FASN and fatty acid synthesis in prostate cancer. Aim: to study the relationship between FASN and p300, the regulation mechanism of p300 on FASN expression and fatty acid synthesis, and to study the biological function of p300-FASN pathway in prostate cancer. Methods: we analyzed the results of chromatin immunoprecipitation sequencing (CHIP-Seq) of p300 and used CHIP technique to verify the binding of p300 to FASN and the change of histone acetylation level. We used RNAi to knockout p300 or treated cells with different concentrations of p300 enzyme inhibitors, and then down-regulated the expression of p300 in different prostate cancer cell lines, and then detected the expression of FASN by RT-PCR or western blot. Oil red staining was used to detect lipid levels in cells or fresh frozen tissues, MTS technique was used to determine the viability of cells, and immunohistochemical staining was used to detect the expression of p300 and FASN proteins in human tissues. The p300 gene knockout mice were produced by subculture hybridization, and the expression level of FASN and the changes of lipid level in the prostate tissues of the mice were monitored. In order to investigate the biological function of p300-FASN pathway, we established and cultured prostate cancer stable cell lines with low expression of p300 or FASN or both. The xenotransplantation model of mice was established by subcutaneous injection of tumor cells, the growth curve of transplanted tumor was recorded, and the harvested tumor grafts were used to prepare frozen and paraffin sections. Results: 1) p300 binds to FASN promoter in prostate cancer cells. Upregulation of histone acetylation level. P300 regulates FASN mRNA and protein expression. P300 is positively correlated with FASN expression in human prostate cancer tissues.) both in vitro and in vivo, p300 affects fatty acid syntheses in prostate cancer cells. The FASN pathway regulates the proliferation and tumor growth of prostate cancer cells. Conclusion: our study confirmed that p300 is an important tumor promoter in prostate cancer, which is positively correlated with FASN. It regulates the expression of FASN at the transcriptional level and affects the synthesis of fatty acids in prostate cancer. It further affects the proliferation and growth of prostate cancer cells through the FASN pathway. It plays an important role in the treatment of prostate cancer targeting fatty acid metabolism.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25

【共引文獻】

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本文編號：1807174