本文選題：硬脂酰輔酶A去飽和酶I + 蛋白激酶B　； 參考：《上海交通大學》2014年博士論文

【摘要】：腎細胞癌(RCC,renal cell carcinoma)是最為常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一,目前該腫瘤發(fā)病率的增長速度為2%。25%的腎癌患者在就診時腫瘤已經(jīng)出現(xiàn)局部淋巴結轉移或者遠處轉移。而發(fā)生轉移的患者死亡率及術后腫瘤的復發(fā)率均明顯高于早期發(fā)現(xiàn)腎癌的患者。腎臟透明細胞癌(cc RCC,clear cell renal cell carcinoma)是腎癌中最為常見的病理類型,約占腎細胞癌總數(shù)的80%。腎透明細胞癌快速生長需要有很強的有氧糖酵解、脂肪合成代謝等一系列物質合成過程與之相配合,為腫瘤的快速增殖、侵襲性生長提供物質基礎。特別是cc RCC細胞中富含脂滴的病理特點決定了它具備非常強勁的脂肪合成能力。單純的食物來源已經(jīng)遠遠不能滿足腫瘤細胞對脂類物質的需求,cc RCC細胞則主要通過從頭脂肪酸合成途徑來合成獲得所需的脂類物質。目前的研究發(fā)現(xiàn)cc RCC細胞中脂肪從頭合成途徑所需的一系列酶表達異常活躍。我的研究課題研究核心是脂肪酸從頭合成途徑的一個重要的限速酶——硬脂酰輔酶A去飽和酶1(SCD-1),它是催化飽和脂肪酸向單不飽和脂肪酸轉化的限速酶,可以催化棕櫚酰輔酶A和硬脂酰輔酶A形成棕櫚油酰輔酶A和油酰輔酶A。棕櫚油酰輔酶A和油酰輔酶A是膜磷脂、三酰甘油酰、膽固醇酯等多種物質生物合成的主要底物。SCD-1是一種定位于內質網(wǎng)上的跨膜蛋白,它對于維持細胞內飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的正常比例有著重要的作用。近來的研究證明SCD-1參與了多種惡性腫瘤的脂質合成代謝,對于腫瘤的生存,增殖和細胞內的信號轉導都有重要的作用。目前的研究證實膜受體酪氨酸激酶(RTK)-PI3K-AKT-m TOR通路中包含有多個原癌基因,在惡性腫瘤細胞中,這一通路上的基因表達異常尤為常見。圍繞SCD-1表達異常對腎透明細胞癌細胞的PI3K-AKT-m TOR信號通路的影響這一核心問題,課題具體聚焦三個方面:1)腎透明細胞癌組織中和透明細胞細胞系中SCD-1的表達情況及與腫瘤分期分級的相關性;2)抑制SCD-1的表達對于PI3K-AKT-m TOR信號通路的影響;3)靶向m TOR抑制劑對于干擾SCD-1表達的穩(wěn)轉株細胞的影響作用。并根據(jù)研究內容展開了三部分的研究工作。第一部分腎透明細胞癌中SCD-1的表達目的:研究SCD-1在腎透明細胞癌細胞株中及腫瘤組織中的表達情況,分析SCD-1的表達與腎透明細胞癌臨床分期及細胞分級的相關性。方法:采用Western蛋白印跡方法進行檢測透明細胞癌組織和癌膀正常組織中SCD-1的表達及四種透明細胞癌細胞株中SCD-1的表達情況。同時采用免疫組化的方法檢測50例腎透明細胞癌石蠟切片中SCD-1蛋白表達情況,并結合患者的臨床分期和細胞分級進行分析。結果:SCD-1在腎透明細胞癌組織中的表達量均明顯高于癌旁正常組織中的表達量(P0.05)。SCD-1在四種腎透明細胞癌細胞系中的表達量增高,但不同的細胞株SCD-1的表達量也有所差別。免疫組化結果示:腫瘤組織中SCD-1的表達量也隨之增加(P0.05)。SCD-1的表達率也隨著腫瘤細胞分級和淋巴結轉移的增加而增加,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.01)。結論:SCD-1在腎透明細胞癌組織中的表達量明顯高于鄰近的正常組織。SCD-1在786-O、769-P和CAKI腎透明細胞癌細胞株中表達量較高,而在A498細胞株中表達量相對較低。SCD-1的表達量與腎透明細胞癌的分級和臨床分期呈正相關關系。SCD-1的表達量與腫瘤的惡性程度有關,組織中的SCD-1表達量可以作為預測腎透明細胞癌惡性程度的一個重要指標。第二部分SCD-1的表達與AKT信號通路的關系目的:研究干擾腎透明細胞癌細胞株SCD-1表達后對PI3K-AKT-mTOR信號轉導系統(tǒng)的影響。方法:通過含有SCD-1干擾質粒的病毒干擾786-O和769-P細胞,建立SCD-1穩(wěn)定干擾細胞株,然后檢測PI3K-AKT-m TOR信號通路上重要分子的表達改變。用劃痕實驗檢驗SCD-1干擾后對細胞遷移性的影響。結果:SCD-1穩(wěn)定干擾株細胞AKT的磷酸化水平明顯下調,且細胞的侵襲轉移能力較未干擾的細胞有明顯下降(P0.05)。穩(wěn)定干擾SCD-1表達后,細胞內P-AKT(Ser473)和P-AKT(Thr308)兩個位點的活化均有下降,Ser473位點的活性降低較Thr308位點的降低更為明顯。ERK本底的表達未見明顯改變,而P-ERK激活出現(xiàn)明顯的下調。AKT的上游的PI3K和PDK1分子的表達并沒有發(fā)生相應的改變。4E-BP1和P-P70S6K1也出現(xiàn)表達下調的現(xiàn)象。結論:SCD-1穩(wěn)定干擾細胞株中AKT Ser473磷酸化活化水平明顯下降。而Thr308位點磷酸化水平并未受到明顯的抑制。SCD-1穩(wěn)定干擾細胞株中m TOR1下游分子p70S6K1和4E-BP1的表達明顯下降,提示腫瘤細胞的蛋白質合成受到抑制SCD-1穩(wěn)定干擾細胞株中AKT上游分子PDK1和PI3K的活性并未受到影響。AKT對ERK的激活能力受到抑制,ERK的磷酸化激活更依賴于Ser473位點的激活,而非Thr308位點。SCD-1穩(wěn)定干擾細胞株細胞侵襲能力明顯下降。第三部分靶向藥物治療腎透明細胞癌的治療策略目的:研究PI3K-AKT-m TOR靶向抑制劑對于SCD-1干擾細胞株的抑制效應,探討增強新的靶向聯(lián)合治療方案以提高腎癌的治療效果。方法:通過應用PI3K/m TOR抑制劑-PI103,AKT抑制劑MK2206,m TOR抑制劑:Rapamycin,AZD8055,RAD001作用于786-O和769-P細胞及其對應的SCD-1穩(wěn)轉株細胞,觀察藥物對腫瘤生長、增殖及遷移的抑制作用。結果:AZD8055和PI-103兩種抑制劑可以增強對786-O和769-P SCD-1穩(wěn)定干擾細胞株的增殖抑制效應,兩種細胞半數(shù)抑制濃度均有明顯的下降。AZD8055和PI-103兩種抑制劑可以進一步抑制786-O和769-P SCD-1穩(wěn)定干擾細胞株的遷移能力。AZD8055和PI-103可以明顯增強對AKT-m TOR通路的抑制作用。結論:mTORC1和mTORC2抑制劑可以有效的增強對SCD-1干擾細胞株的增殖抑制效應,這種抑制效應是通過抑制AKT-m TOR通路產生的。多靶點的m TOR抑制劑和SCD-1的抑制劑的聯(lián)合應用可以作為一種新的靶向聯(lián)合治療策略。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.11

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本文編號：1746265