本文選題：前列腺癌 + LNCaP��； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：第一部分 轉(zhuǎn)移性前列腺癌的轉(zhuǎn)移能力差異篩選目的：在前列腺癌細(xì)胞株中篩選出侵襲和轉(zhuǎn)移能力最強(qiáng)的細(xì)胞株,為進(jìn)一步尋找與前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的腫瘤標(biāo)記物提供依據(jù)。材料與方法：體外培養(yǎng)LNCaP,22RV1, PC-3和DU145細(xì)胞株,通過(guò)細(xì)胞劃痕試驗(yàn),Transwell侵襲試驗(yàn)和Transwell遷移試驗(yàn)觀(guān)測(cè)細(xì)胞株之間侵襲和轉(zhuǎn)移能力的差異,并通過(guò)明膠酶譜試驗(yàn)監(jiān)測(cè)細(xì)胞MMPs的分泌情況。結(jié)果：通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)篩選,我們得到侵襲和轉(zhuǎn)移能力差異最大的兩株細(xì)胞LNCa P和PC-3。劃痕試驗(yàn)證實(shí)PC-3較LNCaP的遷移速率高7.31倍(p0.05),侵襲試驗(yàn)中PC-3較LNCaP侵襲細(xì)胞數(shù)高3.38倍(p0.05)。兩株細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力均有明顯差異,通過(guò)進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),兩株細(xì)胞的MMPs水平差異十分顯著。結(jié)論：在體外PC-3較LNCaP具有更強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力,且分泌更多的基質(zhì)金屬蛋白酶。第二部分 受甲基化調(diào)控差異表達(dá)基因的高通量篩選與驗(yàn)證目的：通過(guò)比較LNCaP和PC-3細(xì)胞基因組DNA甲基化與mRNA表達(dá)水平的差異,篩選受甲基化調(diào)控的基因并進(jìn)行驗(yàn)證。材料與方法：通過(guò)甲基化譜測(cè)序(MBD-seq)檢測(cè)前列腺癌細(xì)胞系PC-3和LNCaP全基因組DNA甲基化修飾情況,并通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的方法(RNA-seq)檢測(cè)PC-3和LNCaP全轉(zhuǎn)錄組表達(dá)。利用生物信息學(xué)的方法分析在兩種細(xì)胞中受甲基化調(diào)控的基因。結(jié)果：通過(guò)高通量測(cè)序與篩選,我們發(fā)現(xiàn)了(CAV1, CAV2, MET, PPARG, COL6A1, ALDH6A1, ALDH2, SMAD3, ITGA6, ITGB8, MCCC1, CAPN2, JAK1, LAMB1) 14個(gè)受甲基化調(diào)控,可能影響前列腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力差異的基因。并對(duì)其中7個(gè)基因的甲基化改變進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)論：通過(guò)高通量測(cè)序分析DNA甲基化譜改變與mRNA表達(dá)水平改變可以快速有效地分析出受甲基化調(diào)控的基因。第三部分 候選基因COL6A1的體外功能驗(yàn)證目的：在功能上驗(yàn)證受甲基化調(diào)控的COL6A1基因在體外是否具有促進(jìn)侵襲轉(zhuǎn)移的作用。材料與方法：構(gòu)建表達(dá)針對(duì)COL6A1的shRNA與過(guò)表達(dá)COL6A1的載體并包裝慢病毒,改變?cè)屑?xì)胞系COL6A1的表達(dá)情況,通過(guò)侵襲和劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞系的功能改變。并對(duì)下游信號(hào)通路分析進(jìn)行進(jìn)一步分析。結(jié)果：在本底表達(dá)低的細(xì)胞系LNCaP中過(guò)表達(dá)COL6A1,遷移速率較對(duì)照組提高50%(p0.05),侵襲細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組提高78.1%(p0.05),MMP9和CXCR4的表達(dá)顯著提高。在本底表達(dá)COL6A1較高的PC-3中沉默COL6A1的表達(dá),遷移速率較空載對(duì)照組降低59.4%(p0.05),侵襲細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組減少66.2%(p0.05)結(jié)論：在體外實(shí)驗(yàn)中COL6A1具有促進(jìn)PC-3和LNCaP侵襲遷移能力的作用。第四部分 候選基因COL6A1的臨床價(jià)值研究目的：在臨床樣本中檢測(cè)COL6A1是否對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移具有預(yù)測(cè)價(jià)值。材料與方法：選取于2007-2011年在我院診治的223例確診為前列腺腺癌患者與40例非前列腺腺癌對(duì)照的前列腺組織切片,回顧性的收集患者臨床資料。通過(guò)免疫組化染色比較隊(duì)列中COL6A1的表達(dá)水平,并分析與臨床轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。結(jié)果：在多因素回歸中,Gleason評(píng)分(OR=.204,95%CI:1.360 to 12.999,p=0.013),T分期(OR=43.912,95%CI=12.340 to 156.263,p0.01)與COL6A1表達(dá)水平 (OR=2.096,95%CI=1.344 to 3.187,p0.01)是預(yù)測(cè)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)后因子,高表達(dá)COL6A1的患者具有更短的總生存時(shí)間與更多的骨轉(zhuǎn)移灶。結(jié)論：COL6A1表達(dá)增加可能提高患者骨轉(zhuǎn)移發(fā)生的機(jī)會(huì),預(yù)示著疾病預(yù)后不良,可能作為標(biāo)記物用于今后的臨床實(shí)踐。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of methylation of PC - 3 and PC - 3 on the expression of MMP - 3 and PC - 3 in prostate cancer cell line . 鍦ㄦ湰搴曡〃杈句綆鐨勭粏鑳?yōu)绯籐NCaP涓繃琛ㄨ揪COL6A1,榪佺Щ閫熺巼杈冨鐓х粍鎻愰珮50%(p0.05),渚佃緇嗚優(yōu)鏁拌緝瀵圭収緇勬彁楂，

本文編號(hào)：1744899