本文選題：腎透明細胞癌　切入點：長鏈非編碼RNA　出處：《重慶醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：背景與目的:腎細胞癌簡稱腎癌,為我國泌尿生殖系統(tǒng)最為常見的癌癥之一,占成人惡性腫瘤的3%左右,是嚴重威脅人民健康安全的重要疾病。由于起病隱匿,約20%~30%的患者初次就診時就已存在遠處轉移,然而該疾病對化療和放射治療不敏感,因此該類患者預后往往很差。上皮間質(zhì)轉化(EMT)是指具有上皮表型的細胞在多種因素的刺激下,上皮組織基本結構消失,轉化為間質(zhì)表型細胞的過程。上述的這些變化可以降低癌癥細胞間的相互黏附力,并促進其遷移運動能力,最終讓癌癥細胞更加傾向于向遠處侵襲轉移。研究表明長鏈非編碼RNA可通過類似抑癌基因和癌基因的作用參與多種癌癥的臨床發(fā)生及進展。目前已經(jīng)陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多種LncRNA可以調(diào)控EMT的進程,因此探究腎癌EMT的潛在分子機制,可能為抑制腎癌進展以及改善腎癌患者臨床預后具有重要意義。本研究運用LncRNA芯片篩選典型腎臟透明細胞癌及癌旁正常腎組織標本中差異表達的lncRNAs;通過生物信息學等方法挑選部分候選IncRNA,包括HEIRCC;然后進一步在擴大的臨床樣本及腎癌細胞系中進行驗證,并分析其與臨床病理學特點間的相關性;最后,運用rna干擾技術敲低腎癌細胞株內(nèi)heircc的表達,然后研究轉染前后腎癌細胞生物學功能及emt相關分子標記物的變化。方法:(1)我們使用長鏈非編碼rna芯片技術獲取腎癌及癌旁組織的incrnas表達譜;(2)運用生物信息學等方法挑選相關的候選incrnas;(3)在擴大的60例腎癌組織與癌旁正常腎臟組織樣本中進行實時熒光定量pcr的驗證,并分析候選incrna-heircc與腎癌患者臨床病理學特征間的關系。(4)采用rna干擾的方法減少腎癌細胞株內(nèi)heircc的表達,然后通過cck8細胞增殖實驗、細胞凋亡實驗、細胞劃痕及transwell等實驗評估其對腎癌細胞生物學的影響。(5)再此基礎上運用western-blot方法檢測轉染前后腎癌細胞內(nèi)e-cadherin、n-cadherin、vimentin、zeb-1、slug、snail的蛋白表達變化。結果:在腎癌組織中差異表達的incrna共2840個其中共有1151個lncrna上調(diào),1689個lncrna下調(diào)(差異倍數(shù)大于2,且p0.05);綜合篩選條件,選擇tcons_00006756作為后續(xù)研究對象,并命名為heircc。qrt-pcr驗證了其在擴大臨床樣本及腎癌細胞株中的高表達。在60對腎癌標本中發(fā)現(xiàn)高表達的heircc與腎癌患者的腫瘤分化程度(p=0.037)、tnm分期(p=0.047)、淋巴結轉移(p=0.036)及遠處轉移(p=0.039)有關,而與患者年齡及性別無關(p0.05)。經(jīng)過rna干擾后,隨著heircc表達的降低,腎癌細胞a498、achn的增殖、遷移及侵襲能力顯著下降,而細胞的凋亡率顯著增加。同時,相對陰性對照組,實驗組中n-cadherin、vimentin蛋白均降低,e-cadherin的蛋白表達升高,且差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05);Slug、Snail的蛋白表達無顯著變化,ZEB-1蛋白顯著下降(p0.05)。結論:腎癌中存在大量顯著差異表達的長鏈非編碼RNA,說明Lnc RNA與腎癌存在著關聯(lián);HEIRCC在腎癌組織及腎癌細胞株中呈高表達,且與腫瘤的分化程度、TNM分期、淋巴結轉移及遠處轉移有關;明確了HEIRCC在腎癌中起到促進細胞增殖、侵襲、遷移并抑制細胞凋亡的作用;揭示了其通過影響ZEB-1蛋白的表達調(diào)控EMT的進程從而導致腎癌的進展。
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【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.11

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1 熊晶;LncRNA-HEIRCC通過調(diào)控上皮間質(zhì)轉化進程促進腎癌進展的相關機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2017年

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本文編號：1703292