本文選題：microRNA-99a　切入點：腎細胞癌　出處：《蘇州大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：腎細胞癌(renal cell carcinoma,RCC)在泌尿系統(tǒng)中是最為常見的惡性腫瘤之一,它的生物學(xué)活動極其復(fù)雜多變,發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的分子機制至今仍不明確。近年來的研究發(fā)現(xiàn)微小RNA-99a(mi R-99a)在舌鱗狀細胞癌、漿膜卵巢癌、肝癌、鱗狀細胞肺癌、前列腺癌、膀胱癌及兒童腎上腺皮質(zhì)腫瘤等多種腫瘤中的表達水平均下調(diào),并且對這些腫瘤的生長有明顯的抑制作用,預(yù)示著mi R-99a可能作為潛在的腫瘤抑制因子用于腫瘤的診斷與治療。基于目前尚未有mi R-99a在腎癌中的研究報道,本研究在腎癌組織標(biāo)本及腎癌細胞中檢測mi R-99a的表達水平,分析mi R-99a表達與預(yù)后的相關(guān)性,通過體外及體內(nèi)實驗研究mi R-99a對腎癌細胞功能及腫瘤進展的影響,檢測相關(guān)信號通路,進一步探討可能的作用機制,以期給腎癌的診斷和治療帶來新的思路。第一部分mi R-99a在腎癌中的表達及臨床意義目的:探討腎癌細胞系、腎癌組織及相應(yīng)癌旁組織中mi R-99a的表達,并分析與臨床特征的關(guān)系,探討腎細胞癌患者的臨床預(yù)后的關(guān)系。方法:采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT PCR)檢測腎小管上皮細胞株HK-2、腎癌細胞株786-0、腎癌細胞株OS-RC-2以及40例腎癌組織和相應(yīng)癌旁組織的mi R-99a的表達水平,并對其進行比較和相關(guān)分析。結(jié)果:q RT-PCR結(jié)果顯示786-0及OS-RC-2中mi R-99a表達明顯低于HK-2,相對于癌旁組織,腎癌標(biāo)本中mi R-99a表達明顯下調(diào)。Kaplan-Meier分析顯示,mi R-99a表達水平降低的患者生存期顯著縮短。結(jié)論:mi R-99a在腎癌組織和細胞中明顯低表達,mi R-99a表達水平下降的患者生存期明顯縮短,提示mi R-99a可能成為腎癌診斷及預(yù)后的新標(biāo)志物。第二部分mi R-99a對腎癌細胞功能及腫瘤進展的影響目的:通過細胞功能實驗及裸鼠成瘤模型研究mi R-99a對腎癌細胞功能及腫瘤進展的影響。方法:應(yīng)用合成的mi R-99a模擬物轉(zhuǎn)染786-0及OS-RC-2,采用細胞增值檢測、克隆形成檢測、遷移檢測、侵襲檢測、流式細胞檢測,觀察上調(diào)mi R-99a表達對腎癌細胞功能及細胞周期的影響。裸鼠皮下注射786-0成瘤后再次注射mi R-99a模擬物,mi R-99a結(jié)果:細胞功能實驗表明轉(zhuǎn)染mi R-99a模擬物可對腎癌細胞的增殖、存活、遷移、侵襲起到抑制作用,并誘導(dǎo)細胞周期G1期的阻滯,動物實驗顯示注射mi R-99a模擬物后腫瘤生長明顯受抑制。結(jié)論:mi R-99a高表達可明顯抑制腎癌細胞功能及腫瘤進展,提示mi R-99a可能成為治療腎癌的有效調(diào)節(jié)靶點。第三部分mi R-99a調(diào)控腎癌進展相關(guān)信號通路的機制研究目的:檢測哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)及其通路下游相關(guān)因子在腎細胞癌中受到mi R-99a調(diào)控后的表達情況,進一步探討mi R-99a通過m TOR信號通路抑制腫瘤進展的機制。方法:通過生物信息搜索mi R-99a的靶基因。在HK-2、786-0及OS-RC-2中檢測m TOR的表達情況。mi R-99a模擬物轉(zhuǎn)染786-0及OS-RC-2,檢測m TOR的表達水平變化。裸鼠皮下注射786-0成瘤后再次注射mi R-99a模擬物,檢測腫瘤組織中m TOR的表達水平變化。mi R-99a的靶基因通過熒光素酶活性實驗驗證。mi R-99a模擬物轉(zhuǎn)染786-0,檢測m TOR信號通路相關(guān)因子及下調(diào)細胞周期相關(guān)蛋白的表達水平變化。m TOR-si RNA轉(zhuǎn)染786-0,采用細胞增值檢測、克隆形成檢測、遷移檢測、侵襲檢測、流式細胞檢測,觀察下調(diào)m TOR對腎癌細胞功能及細胞周期的影響。結(jié)果:生物信息搜索提示m TOR是mi R-99a的靶基因,m TOR在腎癌細胞中的表達明顯高于HK-2,腎癌細胞及動物模型中上調(diào)mi R-99a后m TOR表達明顯下調(diào),熒光素酶活性實驗證實m TOR是mi R-99a的靶基因。mi R-99a模擬物轉(zhuǎn)染786-0后m TOR信號通路相關(guān)因子及細胞周期相關(guān)蛋白均表達下調(diào),m TOR-si RNA轉(zhuǎn)染786-0可抑制腎癌細胞增殖、存活,并阻滯細胞周期G1期,而細胞遷移及侵襲不受抑制。結(jié)論:m TOR是mi R-99a的靶基因,mi R-99a可直接通過m TOR信號通路來誘導(dǎo)細胞周期G1期的阻滯,下調(diào)m TOR可部分擬表型腎癌細胞中上調(diào)mi R-99a的功能改變,提示mi R-99a可能并非完全通過m TOR信號通路抑制腎癌進展。
[Abstract]:鑲劇粏鑳?yōu)鐧?renal cell carcinoma,RCC)鍦ㄦ硨灝跨郴緇熶腑鏄渶涓哄父瑙佺殑鎭舵，

本文編號：1674784