發(fā)布時間：2018-03-26 18:23

  本文選題：白細胞介素-4　切入點：LDH-A　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景和目的:前列腺癌是老年男性常見惡性腫瘤之一。據(jù)估計,2017年,美國大約有161360例新發(fā)前列腺癌,有26730例死亡病例。我國前列腺癌發(fā)病率近年顯著升高,在男性泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中達第三位。研究表明,腫瘤的發(fā)生和轉移與其所處的內(nèi)外環(huán)境關系密切。腫瘤微環(huán)境不僅包括腫瘤所在組織的結構和代謝,亦與腫瘤細胞自身的內(nèi)在環(huán)境有關。腫瘤細胞周圍的免疫細胞以及細胞因子之間的相互作用都會影響腫瘤的生長、進展。白細胞介素-4(IL-4)在炎癥免疫中是一類重要的細胞因子,由T helper(Th)細胞分泌,促進嗜酸性粒細胞及肥大細胞發(fā)育。研究表明IL-4對多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預后有著重要影響,其中包含前列腺癌。同時,腫瘤細胞的生長、增殖、轉移都需要通過糖代謝途徑獲得能量。LDH-A是糖代謝途徑的關鍵酶之一,在糖酵解中起重要作用。目前,尚無明確報道炎癥免疫與腫瘤糖代謝關聯(lián)的研究。在前期研究中,我們發(fā)現(xiàn)IL-4能影響前列腺癌細胞的LDH-A表達。因此,本研究從IL-4對LDH-A的影響進行探究,闡述IL-4對前列腺癌細胞糖代謝和細胞增殖的作用。實驗材料:1、前列腺癌細胞株PC3;2、臨床樣本:廣州市第一人民醫(yī)院泌尿外科手術切除的前列腺癌或增生組織;3、兔抗人LDH-A抗體,兔抗人p-LDH-A抗體;4、人重組蛋白 IL-4。實驗方法:1、RT-QPCR:(1)提取細胞mRNA;(2)反轉錄;(3)引物設計;(4)實時熒光定量PCR。2、蛋白印跡實驗:(1)蛋白提取;(2)濃度測定;(3)上樣;(4)跑膠;(5)切膠;(6)轉膜;(7)封閉;(8)一抗;(9)洗膜;(10)二抗;(11)洗膜;(12)曝光。3.細胞增殖測定實驗:(1)細胞計數(shù);(2)鋪板;(3)加藥;(4)測吸光度。統(tǒng)計學處理:實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示,當P值小于0.05時差異具有統(tǒng)計學意義。測定數(shù)值通過統(tǒng)計分析軟件SPSS 13.0分析。結果:1、良性前列腺和前列腺癌組織中LDH-A蛋白表達水平檢測應用蛋白質(zhì)印跡檢測臨床手術切除的前列腺組織LDH-A的蛋白表達量。結果顯示LDH-A在前列腺腫瘤中呈現(xiàn)高表達,而在良性前列腺組織中表達相對較低。2、IL-4對前列腺腫瘤細胞PC3增殖能力的影響人重組蛋白IL-4(50ng/ml)與PC3細胞共培養(yǎng)24h、48h、72h后,加入CCK-8檢測上清OD值,72h對照組與IL-4處理組OD值分別為0.92±0.13和1.4±0.14,其差異具有統(tǒng)計學意義(p0.01),結果顯示IL-4能促進PC3細胞增殖。。3、IL-4處理PC3細胞后檢測LDH-A和p-LDH-A表達量變化50ng/ml IL-4處理PC3細胞,6h后收集細胞檢測LDH-A mRNA表達量。結果顯示經(jīng)IL-4處理后,LDH-A mRNA的表達上調(diào)1.32±0.14倍,差異存在統(tǒng)計學意義(p0.05)。同時,50ng/ml IL-4處理PC3細胞,24h后收集細胞檢測LDH-A和磷酸化LDH-A蛋白表達變化。結果顯示IL-4刺激后,LDH-A、p-LDH-A蛋白表達升高。4、檢測IL-4對PC3細胞乳酸產(chǎn)量的影響臨床乳酸檢測儀器檢測50ng/ml IL-4處理24h后的PC3細胞上清液中乳酸。結果顯示IL-4處理后,上清液中乳酸的濃度顯著升高。結論:1、LDH-A在前列腺腫瘤中呈現(xiàn)高表達,而在良性前列腺組織中表達相對較低。2、白細胞介素-4能促進前列腺癌PC3細胞的增殖。3、白細胞介素-4能誘導PC3的LDH-A mRNA表達上調(diào),LDH-A和p-LDH-A蛋白表達上調(diào)。4、白細胞介素-4能上調(diào)PC3乳酸產(chǎn)量。
[Abstract]:This study has shown that IL - 4 plays an important role in the development and prognosis of prostate cancer cells . The study shows that IL - 4 plays an important role in the development and prognosis of prostate cancer cells . The study shows that IL - 4 plays an important role in the development and prognosis of prostate cancer cells . Results : The expression level of LDH - A protein in benign prostatic and prostate cancer was detected by SPSS 13.0 . The results showed that the expression level of LDH - A in benign prostatic and prostate cancer was significantly lower than that of PC3 cells . The levels of LDH - A and p - LDH - A were detected by IL - 4 treatment . The results showed that the expression of LDH - A mRNA was up - regulated by 1.32 鹵 0.14 fold after treatment with IL - 4 . The results showed that the expression of LDH - A and p - LDH - A was significantly increased after IL - 4 treatment . The results showed that IL - 4 increased the expression of LDH - A and p - LDH - A .

【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 葉定偉;朱耀;;中國前列腺癌的流行病學概述和啟示[J];中華外科雜志;2015年04期

2 李鳴;那彥群;;不同水平前列腺特異抗原的前列腺癌診斷率[J];中華醫(yī)學雜志;2008年01期

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本文編號：1669026