發(fā)布時(shí)間：2018-03-25 02:08

  本文選題：糖尿病腎病　切入點(diǎn)：金屬硫蛋白　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：本課題擬建立1型糖尿病大鼠模型，測(cè)定大鼠腎組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)丙二醛（MDA）含量及總抗氧化能力（T-AOC）活性，應(yīng)用免疫組織化學(xué)、反轉(zhuǎn)錄PCR等方法檢測(cè)腎組織的Nrf2、Trx表達(dá)情況，并給予金屬硫蛋白（metallothionein,MT)干預(yù)，探討糖尿病大鼠腎臟是否存在氧化應(yīng)激狀態(tài)及金屬硫蛋白的干預(yù)效果，以其延緩腎損傷的發(fā)生發(fā)展。為人類糖尿病腎臟損傷的防治提供試驗(yàn)性的理論依據(jù)。 糖尿病時(shí)機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，其脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物增多，細(xì)胞抗氧化能力下降。Nrf2-ARE通路是機(jī)體最重要的抗氧化應(yīng)激通路之一。核因子EF-E2相關(guān)因子（Nrf2）在受到活性氧(ROS)的刺激時(shí)通過(guò)與ARE作用元件相結(jié)合，啟動(dòng)下游保護(hù)性基因蛋白轉(zhuǎn)錄，其中包括硫氧還蛋白（Trx）、醌氧化還原酶（NQO1）、血紅素氧合酶1(heine oxygen ase1，HO-1)等，提高機(jī)體抗氧化能力，減少氧化應(yīng)激損傷。 方法：選擇SPF級(jí)雄性大鼠48只，體重約180~220g，（購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心），先適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，空腹12小時(shí)，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組，n=12)、糖尿病模型組(DM組，n=12)、糖尿病金屬硫蛋白高劑量治療組(MTH組，n=12)、糖尿病金屬硫蛋白低劑量治療組(MTL組，n=12)。其中DM組、MTH組、MTL組大鼠給予腹腔注射鏈脲佐菌素(65mg/k g)制備糖尿病大鼠模型, NC組則給予等量的檸檬酸緩沖液。72h后檢測(cè)血糖，血糖≥16.7mmol/L視為糖尿病模型制備成功。MTH組大鼠給予0.5mg／k g MT灌胃，MTL組大鼠給予0.1mg／k g MT灌胃，NC組、DM組每天給予等量的生理鹽水灌胃。分別于造模成功后6周、12周末，每組任取6只大鼠，測(cè)定24h尿蛋白(24hUP)、血肌酐、尿素氮。并收集腎組織標(biāo)本，制作組織切片，在顯微鏡下觀察蘇木素伊紅（HE）染色及糖原染色（PAS）的大鼠腎組織病理變化，檢測(cè)腎臟丙二醛(MDA)含量、T-AOC活性，免疫組化方法檢測(cè)Nrf2、Trx的表達(dá)，RT-PCR法檢測(cè)Nrf2、TrxmRNA表達(dá)。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，不滿足正態(tài)性和方差齊性的數(shù)據(jù)資料采用非參數(shù)檢驗(yàn)，以p0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1一般狀況：DM組、MT組大鼠在注射STZ后逐漸出現(xiàn)多飲、多食、多尿，反應(yīng)遲緩，且體重逐漸下降，毛發(fā)失去光澤，其中DM組癥狀明顯重于MT組，而NC組大鼠生長(zhǎng)發(fā)育良好，反應(yīng)靈敏，飲食正常。 2生化指標(biāo) 2.124小時(shí)尿蛋白定量：6周末，與NC相比，DM組大鼠24小時(shí)尿蛋白水平升高（p0.05）；與DM組相比，MTH組24小時(shí)尿蛋白下降（P 0.05），MTL組無(wú)明顯差異（p＞0.05）。給藥12周末，與NC相比，DM組大鼠24小時(shí)尿蛋白水平升高（P 0.05）；與DM組相比，各給藥組均能降低大鼠24小時(shí)尿蛋白水平（p 0.05）。 2.2血肌酐、尿素氮：6周末，與NC相比，DM組大鼠血肌酐、尿素水平升高（p 0.01）；與DM組相比，各給藥組血肌酐、尿素水平下降（p 0.05）。給藥12周末，，與NC相比，DM組大鼠血肌酐、尿素水平升高（p 0.01）；與DM組相比，各給藥組均能顯著降低大鼠血肌酐水平以及尿素水平（p0.01）。 3氧化應(yīng)激指標(biāo) 3.1MDA的比較：6周末，與NC組相比，DM組大鼠腎組織內(nèi)的MDA水平顯著升高（p 0.05）；與DM組相比，各給藥組的MDA水平均有不同程度的下降。12周末，與NC組相比，DM組大鼠腎組織內(nèi)的MDA水平明顯升高（p0.05）；與DM組相比，各給藥組均能顯著降低大鼠腎組織內(nèi)的MDA水平（p 0.05）。 3.2T-AOC的比較：6周末，與NC組相比，DM組大鼠腎組織內(nèi)的T-AOC活性顯著降低（p 0.05）；與DM組相比，各給藥組的T-AOC活性顯著增高（p 0.05）。12周末，與NC組相比，DM組大鼠腎組織內(nèi)的T-AOC活性顯著降低（p 0.05）；與DM組相比，MTL組腎組織內(nèi)的T-AOC活性升高（P 0.05），MTH組升高（p 0.05）。 4組織化學(xué)變化：光鏡顯示, NC組大鼠的腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰，未見(jiàn)明顯的病理改變。12周末時(shí)，與同期正常組的腎組織相比, DM組腎小球體積增大，腎小球系膜基質(zhì)彌漫增多,系膜細(xì)胞增多，基底膜增厚。同期MT組腎臟的病理結(jié)構(gòu)得到改善。 5免疫組織化學(xué)結(jié)果：糖尿病大鼠腎臟組織于6周、12周末，DM組與NC組比較腎組織中Nrf2的表達(dá)增多，MTL組高于DM組，MTH組高于MTL組（p＜0.05）；6周末DM組較NC組Trx表達(dá)升高，但低于同期MTL組、MTH組(p＜0.05)；12周末DM組Trx較NC組減少，MTL組高于DM組，MTH組高于DM組（p＜0.05）。 6Reverse Transcription-PCR (RT-PCR)結(jié)果：DM組、MTH、MTL組與NC組比較大鼠腎組織中Nrf2的表達(dá)增多，其中12周末增多更為顯著（p＜0.05）；6周末DM組較NC組Trx表達(dá)升高，且低于同期MTL組、MTH組(p＜0.05)；12周末DM組Trx較NC組減少，MTL組高于DM組，MTH組高于DM組（p＜0.05）。 結(jié)論： 1糖尿病大鼠腎組織MDA含量增多，T-AOC活性下降，且糖尿病腎組織Nrf2、Trx表達(dá)較正常組明顯增多，顯示存在明顯的氧化應(yīng)激狀態(tài)，Nrf2通路被激活。 2金屬硫蛋白可以減少糖尿病大鼠蛋白尿的產(chǎn)生及減輕腎臟病理形態(tài)學(xué)改變，且降低腎組織MDA含量，提高T-AOC的活性，其機(jī)制可能與上調(diào)Nrf2蛋白及其下游抗氧化蛋白Trx的表達(dá)有關(guān)，從而減輕氧化應(yīng)激，起到保護(hù)腎臟的作用。
[Abstract]:Objective: This study intends to establish a rat model of type 1 diabetes mellitus, indicators of oxidative stress in renal tissues of rats in the determination of malondialdehyde (MDA) content and total antioxidant capacity (T-AOC) activity, immunohistochemistry, reverse transcription PCR of renal tissue detection methods such as Nrf2, Trx expression, and metallothionein (metallothionein MT) intervention, intervention effect on kidney of diabetic rats whether oxidative stress and metallothionein, which delay the occurrence and development of renal injury. For the prevention and treatment of diabetic kidney damage human provide experimental theory basis.
Diabetes and oxidative stress in the body, the lipid peroxidation increased, antioxidant capacity decreased the cell.Nrf2-ARE pathway is one of the most important antioxidant pathway. The nuclear factor EF-E2 related factor (Nrf2) by reactive oxygen species (ROS) stimulation by combining with ARE elements, activate the downstream protective gene transcription, including thioredoxin (Trx), quinone oxidoreductase (NQO1), heme oxygenase 1 (HO-1 Heine, oxygen ase1, etc.), improve the antioxidant capacity, reduce oxidative stress injury.
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本文編號(hào)：1661055