發(fā)布時間：2018-03-23 01:36

  本文選題：miR-377-3p　切入點：糖尿病腎病　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的糖尿病(diabetesmellitus,DM)導(dǎo)致的高死亡率在我國僅次于心血管疾病和腫瘤。而糖尿病腎病也被公認為是導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要原因之一,已經(jīng)嚴(yán)重威脅人類健康。微小RNA(miRNA)通過對靶基因的表達調(diào)控參與多種生理和病理過程,如細胞的生長、凋亡及腫瘤發(fā)生發(fā)展等。已有研究表明miRNA同樣參與糖尿病腎病的病理進程。本項研究的目的是篩選發(fā)現(xiàn)在糖尿病腎病中發(fā)揮明顯調(diào)控作用的miRNA,以及miRNA的作用機制,進一步闡明miRNA與已知的糖尿病腎病相關(guān)信號通路之間的關(guān)系,以期為糖尿病腎病的診療提供新的依據(jù)。研究方法我們用miRNA芯片技術(shù)對細胞中的miRNA進行了篩選,通過分析miRNA的表達差異,結(jié)合其生物學(xué)功能選擇miR-377-3p作為下一步的研究對象。q RT-PCR檢測了miR-377-3p在不同濃度葡萄糖處理后HK-2細胞中的表達水平,及其在30位糖尿病腎病患者和30位體檢健康者中的表達水平。同時我們構(gòu)建了小鼠糖尿病腎病模型,用于之后miR-377-3p的體內(nèi)功能研究。下一步,MTT法檢測了miR-377-3p對HK-2細胞活性的影響,流式細胞術(shù)及western blot檢測了miR-377-3p對HK-2細胞凋亡的影響。接下來的動物實驗中,用Tunel和免疫組化的方法驗證了miR-377-3p對腎小管上皮細胞增殖及凋亡的影響。為了尋找miR-377-3p下游作用的靶基因,我們用生物信息學(xué)方法進行了預(yù)測,同時用熒光報告載體實驗證實了miR-377-3p與預(yù)測靶基因的直接作用,定量PCR和western blot進一步驗證了miR-377-3p對靶基因表達的影響。最后,與miR-377-3p相同,我們用類似的方法對靶基因的功能進行了研究。結(jié)果miRNA芯片和q RT-PCR結(jié)果均表明miR-377-3p在高糖處理的HK-2細胞中明顯高表達。而miR-377-3p在臨床糖尿病腎病患者血清中低表達。小鼠糖尿病腎病模型構(gòu)建成功,可用于后續(xù)功能研究。miR-377-3p能降低高糖誘導(dǎo)下HK-2細胞的細胞活性。miR-377-3p能通過上調(diào)促凋亡基因Bax和下調(diào)抑凋亡基因Bcl-2表達,促進高糖誘導(dǎo)下HK-2細胞的凋亡。糖尿病腎病小鼠體內(nèi)進行實驗,發(fā)現(xiàn)miR-377-3p能抑制小鼠腎小管上皮細胞的增殖,并通過上調(diào)促凋亡基因和下調(diào)抑凋亡基因表達,促進糖尿病腎病小鼠的腎小管上皮細胞的凋亡。生物信息學(xué)預(yù)測出SGK3 m RNA 3’UTR含有與miR-377-3p種子序列的結(jié)合位點,定量PCR和western blot熒光報告載體實驗證實了兩者的靶定關(guān)系。SGK3能挽救miR-377-3p對細胞活性的抑制作用,通過下調(diào)促凋亡基因和上調(diào)抑凋亡基因表達,抑制高糖誘導(dǎo)下HK-2細胞的凋亡。SGK3能促進糖尿病腎病小鼠的腎小管上皮細胞的增殖,抑制細胞凋亡。miR-377-3p還影響PI3K/AKT信號通路相關(guān)蛋白的表達。結(jié)論miR-377-3p在高糖處理的HK-2細胞中高表達,而在糖尿病腎病患者血清中低表達。miR-377-3p通過抑制細胞生長和促進細胞凋亡的方式破壞腎小管上皮細胞,加速糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。miR-377-3p靶定并負調(diào)控SGK3。SGK3通過促進細胞增殖和抑制細胞凋亡的方式,發(fā)揮與miR-377-3p相反的作用。miR-377-3p參與PI3K/AKT信號通路介導(dǎo)的糖尿病腎病的發(fā)生。綜上所述,我們研究發(fā)現(xiàn)了miR-377-3p/SGK3這一與糖尿病腎病相關(guān)的調(diào)控通路,為臨床理解糖尿病腎病的發(fā)病機制提供了新思路,為其治療提供了可能的干預(yù)靶點。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2;R692.9

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Epithelial to mesenchymal transition in the progression of tubulointerstitial fibrosis[J];Chinese Medical Journal;2007年21期

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本文編號：1651349