本文選題：哺乳動物雷帕霉素靶蛋白　切入點：對比劑急性腎損傷　出處：《天津醫(yī)科大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的本研究旨在探討碘普羅胺(優(yōu)維顯)對哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)信號通路的影響以及雷帕霉素(Rapamycin,RAP)和溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)能否通過此信號通路調(diào)節(jié)碘普羅胺造成的細胞凋亡,進而為臨床治療對比劑急性腎損傷(Contrast induced acute kidney injury,CIAKI)提供新思路,為相關信號通路靶點藥物的研發(fā)提供理論基礎。方法1.將人源腎小管上皮細胞(HK-2)分為六組,即正常對照組(C組)、碘普羅胺對照組(M組)、雷帕霉素高劑量組(R1組)、雷帕霉素低劑量組(R2組)、溶血磷脂酸高劑量組(L1組)和溶血磷脂酸低劑量組(L2組)。C組加入無血清的細胞培養(yǎng)液;M組加入含碘普羅胺的無血清培養(yǎng)液;R1組加入含碘普羅胺的無血清培養(yǎng)液和高劑量的雷帕霉素;R2組加入含碘普羅胺的無血清培養(yǎng)液和低劑量的雷帕霉素;L1組加入含碘普羅胺的無血清培養(yǎng)液和高劑量的溶血磷脂酸;L2組加入含碘普羅胺的無血清培養(yǎng)液和低劑量的溶血磷脂酸。應用Western blotting法測定碘普羅胺對mTOR下游信號通路相關蛋白及磷酸化蛋白表達的影響;在碘普羅胺刺激的基礎上,應用不同濃度的雷帕霉素和溶血磷脂酸分別作用24h和48h,測定這兩種藥物對mTOR下游信號通路相關蛋白及磷酸化蛋白表達的影響。2.將人源腎小管上皮細胞(HK-2)分為四組,即正常對照組(C組)、碘普羅胺對照組(M組)、雷帕霉素組(R組)和溶血磷脂酸組(L組)。C組加入無血清的細胞培養(yǎng)液;M組加入含碘普羅胺的無血清培養(yǎng)液;R組加入含碘普羅胺的無血清的細胞培養(yǎng)液和雷帕霉素;L組加入含碘普羅胺的無血清的細胞培養(yǎng)液和溶血磷脂酸。用流式細胞儀測定不同時間點的碘普羅胺對HK-2細胞凋亡的影響以及雷帕霉素和溶血磷脂酸對碘普羅胺誘導的細胞凋亡的干預作用。結果應用Western blotting法檢測結果顯示,各組的24h Total-mTOR含量表達無明顯改變(P0.05),但是碘普羅胺組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達比正常對照組低(P0.05);雷帕霉素組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達比碘普羅胺組少(P0.05),但雷帕霉素高低劑量組間各蛋白含量表達無明顯差異(P0.05);溶血磷脂酸組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達比碘普羅胺組多(P0.05),但溶血磷脂酸高低劑量組間各蛋白含量表達無明顯差異(P0.05)。各蛋白及磷酸化蛋白在48h的表達趨勢和24h的變化趨勢大致相同,且碘普羅胺組和雷帕霉素組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達呈時間依賴性減少(P0.05),而溶血磷脂酸組的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表達呈時間依賴性增多(P0.05)。應用流式細胞儀檢測結果顯示,碘普羅胺組比正常細胞組的細胞凋亡率明顯升高(P0.05),且碘普羅胺組48h的細胞凋亡率比24h的細胞凋亡率高(P0.05)。雷帕霉素組和溶血磷脂酸組的細胞凋亡率均比碘普羅胺組的細胞凋亡率低(P0.05);R組24h的細胞凋亡率高于L組24h的細胞凋亡率(P0.05),R組48h的細胞凋亡率低于L組48h的細胞凋亡率(P0.05);雷帕霉素組48h的細胞凋亡率低于24h的細胞凋亡率(P0.05);溶血磷脂酸組48h的細胞凋亡率較24h的細胞凋亡率無統(tǒng)計差異(P0.05)。結論1.mTOR信號通路參與了碘普羅胺誘導的人源腎小管上皮細胞的凋亡。2.碘普羅胺下調(diào)細胞內(nèi)的mTOR信號通路相關蛋白mTOR、P70S6K以及4EBP1的磷酸化活化水平,誘導細胞凋亡。3.溶血磷脂酸通過激活mTOR信號通路,減輕了碘普羅胺對細胞內(nèi)mTOR信號通路的磷酸化抑制作用,進而改善了碘普羅胺誘導的細胞凋亡。4.雷帕霉素可以抑制mTOR信號通路相關蛋白的活化表達,可能由于藥物本身的“多效性”,亦可在一定程度上減輕對比劑造成的細胞凋亡。
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【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R692.5

【參考文獻】

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本文編號：1580672