發(fā)布時(shí)間：2018-01-28 07:06

  本文關(guān)鍵詞： 益氣養(yǎng)陰法 IgA腎病 大鼠模型 α-SMA TNF-α 腎臟纖維化　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：IgA腎病（IgA nephropathy,IgAN）又稱Berger病。是腎臟免疫病理檢查中IgA或以IgA為主的免疫復(fù)合物在腎小球系膜區(qū)、毛細(xì)血管袢沉積的一類原發(fā)性腎小球疾病。本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制IgA腎病大鼠模型，并予相應(yīng)的益氣養(yǎng)陰中藥物進(jìn)行干預(yù)治療以研究益氣養(yǎng)陰法對IgA腎病的治療作用及可能作用機(jī)制，為臨床實(shí)驗(yàn)和治療提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：依據(jù)湯穎等的造模方法，對Sprague-Dauley(SD)大鼠進(jìn)行IgA腎病模型復(fù)制：150g左右的SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組，用牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）灌胃八周，0.3ml蓖麻油+0.1ml四氯化碳（Carbom tetrachloride,CCl4）皮下注射九周，并在第7周末尾靜脈注射脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）；正常組分別予純凈水灌胃、生理鹽水皮下注射、尾靜脈注射。益氣養(yǎng)陰組大鼠益氣養(yǎng)陰中藥物進(jìn)行灌胃，貝那普利組大鼠予貝那普利混懸液進(jìn)行灌胃，正常組、模型組予等量純凈水灌胃，持續(xù)8周。于模型復(fù)制前尿蛋白試紙測定尿蛋白、第4、7、10、14、18周末測定24小時(shí)尿蛋白定量、尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。第18周末斷頭取血，血清分離，檢測血清中血尿素氮（Bloodurea nitrogen,BUN）、血清肌酐（Serum creatinine，Scr），留取腎臟組織，行HE、PAS、Masson、Jones銀染色光鏡檢查及免疫熒光檢查，免疫組化法測定模型大鼠腎臟組織中α-平滑肌動蛋白（α-smooth muscleactin, α-SMA）、腫瘤壞死因子α(Tumour necrosis factor-α，TNF-α)的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1大鼠一般情況： 正常組：一般情況良好，毛色光亮，肌肉豐滿，精神正常，正常飲食、反應(yīng)敏捷 模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組：實(shí)驗(yàn)初情況同正常組，模型復(fù)制開始后被毛雜亂，毛色逐漸無光，消瘦，反應(yīng)遲緩，尾靜脈注射脂多糖后，一只老鼠當(dāng)即死亡（貝那普利組，原因不詳，考慮按壓老鼠力氣過大或注射器中進(jìn)入空氣），第一天死亡1只（模型組），第三天死亡1只（貝那普利組），三組老鼠均不欲飲食，另有2只（模型組、貝那普利組）第二天鼻眼部出現(xiàn)流血精神萎靡，一周后情況好轉(zhuǎn)。貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組治療后精神、毛色、飲食較模型組好轉(zhuǎn)。死亡老鼠剔除。 2同一時(shí)期不同組大鼠尿蛋白定量的比較： 模型復(fù)制前：正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠四組大鼠的尿蛋白定量均為陰性（只做定性分析，未予統(tǒng)計(jì)）。 第4周末：正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白無明顯差異(P0.05)。 第7周末：與正常組的蛋白定量進(jìn)行比較，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯升高(P0.05)；模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠各組間比較無顯著性差異（P0.05）。 第10周末：與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯升高(P0.05)；模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠各組間比較無顯著性差異（P0.05）。 第14周末：與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯升高（P0.05)；與模型組相比，貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯降低(P0.05)；貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白比較，無明顯差異(P0.05)。 第18周末：與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯升高（P0.05)；與模型組相比，貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯降低(P0.05)；貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白比較，無明顯差異(P0.05)。 3同一時(shí)期不同組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的比較： 第4周末：正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)無明顯差異(P0.05)。 第7周末：與正常組的尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行比較，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高(P0.05)；模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠各組間尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)比較無顯著性差異（P0.05）。 第10周末：與正常組相比，，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高(P0.05)；模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠各組間尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)比較無顯著性差異（P0.05）。 第14周末：與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高（P0.05)；與模型組相比，貝那普利組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有所降低，但比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與模型組相比，益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 第18周末：與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高（P0.05)；與模型組相比，貝那普利組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有所降低，但比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與模型組相比，益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 4IgA腎病大鼠Scr、BUN的比較： 正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組血清Scr、BUN各組間差異不明顯(P0.05)。 5腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察： 5.1光鏡：正常組：腎小球結(jié)構(gòu)完整，系膜、基質(zhì)無明顯異常改變。模型組：腎小球結(jié)構(gòu)完整，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，毛細(xì)血管、腎小管基底膜見不同程度增厚，或伴腎小管萎縮。 貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組：腎小球結(jié)構(gòu)完整，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，偶爾可見腎小管的萎縮，均較模型組病變減輕。 5.2免疫熒光： 正常組：腎小球系膜區(qū)未見或少見IgA免疫復(fù)合物沉積。 模型組：腎小球系膜區(qū)可見IgA免疫復(fù)合物沿腎小球系膜團(tuán)塊狀分布。 貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組：腎小球系膜區(qū)可見不同程度IgA免疫復(fù)合物沿腎小球系膜團(tuán)塊狀分布，較模型組減輕。 6免疫組化法測定α-SMA、TNF-α在腎臟組織的表達(dá)： 6.1大鼠腎臟組織α-SMA蛋白的表達(dá) 與正常組比較，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠腎臟組織中α-SMA的陽性表達(dá)增強(qiáng)(P0.05)；與模型組相比，貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠腎臟組織中α-SMA的陽性表達(dá)減弱(P0.05)。 6.2大鼠腎臟組織TNF-α蛋白的表達(dá) 與正常組比較，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠腎臟組織中TNF-α的陽性表達(dá)增強(qiáng)(P0.05)；與模型組相比，貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠腎臟組織中TNF-α的陽性表達(dá)減弱(P0.05)。 結(jié)論： 1益氣養(yǎng)陰中藥能明顯降低IgA腎病大鼠的尿蛋白、尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，進(jìn)而保護(hù)腎功能； 2益氣養(yǎng)陰中藥能降低IgA腎病大鼠腎組織的病理損傷，延緩IgA腎病的進(jìn)展； 3益氣養(yǎng)陰中藥可能通過降低α-SMA、TNF-α在IgA腎病大鼠腎臟組織的表達(dá)，進(jìn)而防止腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化、降低炎癥反應(yīng)，從而延緩腎臟病的發(fā)展。
[Abstract]:Objective: IgA nephropathy (IgA nephropathy IgAN) is also called Berger disease. Kidney immune pathological examination of IgA or IgA as immune complexes in the mesangial area, a kind of capillary deposition of primary glomerular diseases. Through this experiment, copy the model of IgA nephropathy rats, and were treated with research supplementing qi and nourishing Yin on IgA nephropathy treatment effect and the possible mechanism for medicine in the Qi and Yin, the theoretical and experimental basis for clinical and experimental treatment.
Methods: Based on the model of Tang Ying, Sprague-Dauley (SD) on rat IgA nephropathy model replication: SD rats were randomly divided into normal group 150g, model group, Benner Pury group, Yiqi Yangyin group, with bovine serum albumin (Bovine serum, albumin, BSA) by gavage for eight weeks, 0.3ml of castor oil +0.1ml (Carbom tetrachloride CCl4) by subcutaneous injection for nine weeks, and at the end of the seventh week intravenous injection of lipopolysaccharide (Lipopolysaccharide, LPS); the normal group were treated with pure water gavage, subcutaneous injection of normal saline, intravenous injection of drugs. In rats of Supplementing Qi and nourishing Yin, invigorating qi and Nourishing Yin by intragastric administration, rats were given the Benner Pury Benner Pury mixed suspension gavage, the normal group and model group were given pure water gavage for 8 weeks. In the model of urinary protein determination before albustix, 4,7,10,14,18 weekend 24 hours urinary protein quantitative determination, urine red blood cell count. At the end of the eighteenth broken blood, serum separation, detection of serum blood urea nitrogen (Bloodurea, nitrogen, BUN), serum creatinine (Serum creatinine, Scr), left kidney tissues were collected, HE, PAS, Masson, Jones silver staining by light microscopy and immunofluorescence examination, immunohistochemical determination of kidney tissue of rats alpha smooth muscle actin (-smooth alpha muscleactin, alpha -SMA), tumor necrosis factor alpha (Tumour alpha factor- alpha necrosis, TNF-) expression.
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本文編號：1470120