本文關(guān)鍵詞：HMGB1對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖與凋亡的影響

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【摘要】：目的：通過(guò)檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞系(BIU-87、 5637、T24、EJ)及人正常膀胱上皮細(xì)胞(SV-HUC-1)中HMGB1的表達(dá)情況,探討HMGB1對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響及可能的機(jī)制。方法：第一部分：內(nèi)源檢測(cè)1.利用膀胱癌組織芯片技術(shù),檢測(cè)人正常膀胱上皮細(xì)胞和膀胱癌細(xì)胞系(BIU-87、5637、T24、EJ)中HMGB1的表達(dá)情況；2.分別使用膀胱癌細(xì)胞系(BIU-87、5637、T24、EJ)及人正常膀胱上皮細(xì)胞(SV-HUC-1),利用實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)(QPCR)檢測(cè)HMGB1在膀胱癌細(xì)胞系(BIU-87、5637、T24、EJ)及人正常膀胱上皮細(xì)胞(SV-HUC-1)中的mRNA表達(dá)水平；第二部分：功能建模1.過(guò)表達(dá)HMGB1,過(guò)表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞系BIU-87、T24。2.設(shè)計(jì)并構(gòu)建HMGB1靶向敲除質(zhì)粒對(duì),共轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞系BIU-87、T24,分別篩選出穩(wěn)定的細(xì)胞株。3.Western Blot檢測(cè)細(xì)胞模型中HMGB1蛋白的表達(dá)水平變化。分組：Con,過(guò)表達(dá)NC,HMGB1過(guò)表達(dá),pTalen NC,pTalen-HMGB1第三部分：功能實(shí)驗(yàn)1.MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖測(cè)定。分組：Con組,亂序siRNA組,HMGB1 siRNA組,NC組,pTalen NC組,pTalen-HMGB1組。2. Transwell檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲。分組：Con,過(guò)表達(dá)NC,HMGB1過(guò)表達(dá),pTalen NC, pTalen-HMGB1。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。分組：Con,過(guò)表達(dá)NC,HMGB1過(guò)表達(dá),pTalen NC,pTalen-HMGB1。結(jié)果：本研究發(fā)現(xiàn),相對(duì)于正常人膀胱上皮細(xì)胞,膀胱癌細(xì)胞系(BIU-87、T24、5637、EJ)中的HMGB1蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)；轉(zhuǎn)染HMGB1 siRNA后的膀胱癌細(xì)胞T24、BIU-87生長(zhǎng)受到抑制；轉(zhuǎn)染pTalen-HMGB1質(zhì)粒后膀胱癌細(xì)胞T24、BIU-87生長(zhǎng)同樣受到抑制；轉(zhuǎn)染HMGB1 siRNA后,兩株膀胱癌細(xì)胞BIU-87、T24侵襲能力減弱；轉(zhuǎn)染pTalen-HMGB1后,兩株膀胱癌細(xì)胞BIU-87、T24侵襲能力也減弱；轉(zhuǎn)染HMGB1 siRNA細(xì)胞凋亡率升高；轉(zhuǎn)染pTalen-HMGB1細(xì)胞凋亡率升高,且高于HMGB1 siRNA組(p0.05)。結(jié)論：1.HMGB1在膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)水平高于人正常的膀胱上皮細(xì)胞;2.HMGB1敲除／沉默后可抑制膀胱癌細(xì)胞增殖和侵襲;3.HMGB1敲除／沉默后可誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞的凋亡；4.HMGB1敲除／沉默后可能通過(guò)Bax/Bcl-2途徑誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞凋亡；
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.14

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2 潘春武;沈周俊;唐小瑩;王e，

本文編號(hào)：1182049