本文關鍵詞：氟對大鼠腎小管上皮細胞的毒性作用及硒干預機制的研究

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【摘要】：目的:本課題主要以大鼠腎小管上皮細胞為研究對象,采用單氟、單硒及硒氟聯(lián)合培養(yǎng)細胞,旨在探討硒對氟誘導大鼠腎小管上皮細胞的拮抗作用和相關機制的研究。方法:腎小管上皮細胞經(jīng)不同濃度氟、硒和硒氟聯(lián)合染毒培養(yǎng)48和72 h后,運用MTT法檢測細胞增殖情況;觀察細胞形態(tài)結構變化運用HE染色法;采用流式細胞儀檢測細胞凋亡和線粒體膜電位的變化;運用試劑盒檢測細胞培養(yǎng)液中氧化應激酶的活性;Real-Time PCR檢測凋亡相關因子Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2 m RNA表達水平;Western-blot免疫印跡檢測Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表達水平。結果:1.染氟48、72和96 h時,染氟組5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L和40 mg/L均對細胞增殖呈抑制作用。低濃度染硒組能夠促進細胞增殖,高濃度染硒組能夠抑制細胞的增殖。與等劑量染氟組相比,硒干預組細胞增殖顯著加快。2.顯微鏡下觀察細胞形態(tài)結構,對照組細胞生長正常,形態(tài)自然,細胞排列緊密;染氟組細胞體積增大,細胞間隙變寬,連接不緊密,出現(xiàn)多核現(xiàn)象,異常細胞數(shù)量增多;染硒組細胞形態(tài)與對照組大致相近;與等劑量染氟組相比,硒干預組細胞形態(tài)趨于正常。3.細胞培養(yǎng)液中氧化應激指標檢測結果顯示,隨染氟濃度的升高,細胞培養(yǎng)液中SOD、CAT、T-AOC和GSH-PX的活性逐漸降低;NO和MDA含量逐漸增多。染硒組差異不明顯。與等劑量染氟組比,硒干預組中SOD、CAT、T-AOC和GSH-PX活性均升高;NO和MDA含量均降低。4.細胞凋亡和線粒體膜電位變化,隨染氟濃度的升高,凋亡率升高,線粒體膜電位降低;染硒組細胞凋亡率和線粒體膜電位無明顯變化;與等劑量染氟組相比,硒干預組細胞凋亡率顯著降低,線粒體膜電位顯著升高。5.凋亡相關因子m RNA表達情況,隨染氟濃度的升高,除Bcl-2 m RNA表達水平降低外,其他凋亡因子Caspase-3、Caspase-9和Bax m RNA表達水平顯著升高。與等劑量染氟組相比,硒干預組Bcl-2 m RNA表達水平升高,而Caspase-3、Caspase-9和Bax m RNA表達水平都顯著降低。6.凋亡相關因子蛋白表達測定結果,與對照組比較,隨染氟濃度的升高,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Bax蛋白表達上調(diào),而Bcl-2蛋白表達下調(diào)。染硒組無統(tǒng)計學意義。與等劑量染氟組相比,硒干預組Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Bax蛋白表達下調(diào),而Bcl-2蛋白表達上調(diào)。而各組中pro-Caspase-3和pro-Caspase-9蛋白表達沒有明顯變化。結論:1.硒對氟誘導的大鼠腎小管上皮細胞凋亡有拮抗作用。2.硒可以通過調(diào)節(jié)抗氧化酶活性,提高機體抗氧化能力,加快自由基的清除,使細胞免受氧化損傷。3.硒可以通過調(diào)節(jié)凋亡因子Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表達,抑制凋亡信號傳導,從而拮抗細胞凋亡。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692;R599

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