本文關(guān)鍵詞：Cad11高和低表達腎癌細胞分選與Cad11對腎癌細胞遷移作用的影響

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【摘要】：目的分選Ⅱ型成骨細胞型鈣黏附蛋白(cadherin-11,Cad11)高和低表達的腎癌細胞786-O細胞群,并證實Cad11在腎癌細胞786-O中的遷移作用。方法將質(zhì)粒pBMN-Ⅰ-GFP-Cad11轉(zhuǎn)染于Phoenix細胞進行包裝,之后感染786-O細胞,流式細胞儀分選后擴大培養(yǎng)建立786-LG細胞。將786-LG細胞經(jīng)Cad11抗體2C7孵育后用BSA封閉,洗滌后加入標記APC的二抗,同時以786-LG細胞(未經(jīng)任何處理)和786-LG細胞(只加入標記APC的二抗處理)作為陰性對照確定分選門,綠色熒光通道和紅色熒光通道進行雙參數(shù)分析,流式細胞儀分選技術(shù)篩選Cad11高和低表達的786-O腎癌細胞群,蛋白質(zhì)印跡法檢測分選細胞Cad11的表達。786-Cad11+和786-Cad11-細胞血清饑餓24h后接種于內(nèi)室(細胞數(shù)為1×104),每組設(shè)3個復(fù)孔,Transwell細胞遷移實驗和細胞結(jié)晶紫染色計數(shù)穿過小室的細胞數(shù)目,以穿過膜的細胞數(shù)目評估Cad11對其腎癌細胞786-O的遷移作用。結(jié)果成功構(gòu)建786-LG細胞。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示,786-LG細胞中Cad11陽性細胞亞群占細胞總數(shù)的75.98%。Cad11細胞群分選后,GFP+/APC+雙陽性細胞和GFP+/APC-單陽性細胞分別占細胞總數(shù)的28.0%和20.1%。蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果表明,Cad11相對表達量786-LG細胞為0.25±0.02,786-Cad11+細胞為0.60±0.03,786-Cad11-細胞為0.10±0.01,差異有統(tǒng)計學意義,F=132.32,P0.001。與786-LG細胞相比,兩個細胞亞群786-Cad11+和786-Cad11-中Cad11蛋白的表達量均有明顯變化,前者蛋白表達量升高至2.41倍(P=0.007),后者蛋白表達量降低至0.41倍(P=0.004),差異均有統(tǒng)計學意義。Transwell遷移實驗結(jié)果表明,786-LG細胞遷移數(shù)目為114.33±4.09,786-Cad11+細胞遷移數(shù)目為139.00±5.19,786-Cad11-細胞遷移數(shù)目為77.67±3.71,差異有統(tǒng)計學意義,F=49.65,P=0.000 2。結(jié)論成功建立了高和低表達Cad11的786-O細胞模型,并證實Cad11的表達與腎癌細胞的遷移密切相關(guān)。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院微生物學教研室;
【關(guān)鍵詞】： Ⅱ型成骨細胞型鈣黏附蛋白 分選 腎癌細胞 遷移
【基金】：國家自然科學基金(81101596)
【分類號】：R737.11
【正文快照】： 中華腫瘤防治雜志,2015,22(6):427-431Chin J Cancer Prev Treat,2015,22(6):427-431腎癌是泌尿系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤之一,約30%晚期腎癌會發(fā)生溶骨性骨轉(zhuǎn)移,患者表現(xiàn)為嚴重骨痛和病理性骨折,最終導(dǎo)致病死率增加[1-3]。近年研究發(fā)現(xiàn),Ⅱ型成骨細胞型鈣黏附蛋白(cadherin-11,Cad

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本文編號：1123097