本文關(guān)鍵詞：USP26基因突變與男性無精子癥的相關(guān)性

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【摘要】：近年來,不孕不育已經(jīng)成為一個世界性問題,在眾多導(dǎo)致不孕不育的原因中,男性不育癥所占比重已經(jīng)高達50%。在男性不育癥中,無精子癥的發(fā)病率日益增高,其發(fā)病率已高達15%-20%。其原因復(fù)雜、因素之多給臨床診治帶來了很多困難。隨著臨床先進技術(shù)的應(yīng)用,部分導(dǎo)致男性不育癥的病因已被確定,如遺傳性疾病:常染色體或性染色體異常;睪丸本身病變:如睪丸外傷、炎癥、扭轉(zhuǎn)以及睪丸血管病變;內(nèi)分泌疾病、垂體功能亢進、垂體腫瘤、腎上腺功能亢進或低下、甲亢或甲低,均可影響精子生成而造成無精子癥。但目前仍有部分病例無法探知其確切的病理機制。造成男性不育的原因主要有:染色體畸形病變、Y染色體生精基因的缺失與突變及X染色體上生精基因的突變。泛素特異蛋白酶26基因是位于X染色體上,該基因與雄性不育具有相關(guān)性。泛素蛋白酶歸屬于去泛素化酶(DUB)家族,這種酶可對泛素與蛋白質(zhì)的結(jié)合產(chǎn)生拮抗作用,并對蛋白質(zhì)的異常降解有降低的作用,而該基因的突變把該酶的這種作用在某種程度上進行了抑制,泛素特異蛋白酶26(USP26)基因編碼由913個氨基酸組成的蛋白質(zhì),該基因位于Xq26.2,由2794個堿基組成,僅有單一外顯子,隸屬與男性不育癥相關(guān)的眾多候選基因之一,屬于去泛素化酶家族,其特異表達于睪丸,插入突變和點突變?yōu)槠涑Ｒ姷耐蛔冾愋?對于與該基因生理功能相關(guān)的研究目前仍很少。本實驗通過研究USP26基因多態(tài)性在無精子癥患者與其在正常男性中的表達差異,通過seqman軟件分析比對基因測序結(jié)果,確定泛素特異蛋白酶26基因在259-1206、長度為947bp的基因片段中突變的方式和位點,可能對了解及揭示無精子癥發(fā)生的某些機制,對部分男性無精子癥的診斷及針對性治療有某些重要的意義。目的通過seqman軟件分析比對基因測序結(jié)果,確定泛素特異蛋白酶26基因在259-1206、長度為947bp的基因片段中突變的方式和位點,確定無精子癥患者泛素特異蛋白酶26(USP26)基因多態(tài)性與男方無精子癥的關(guān)系。材料和方法1.實驗材料:根據(jù)WHO精液檢測標(biāo)準(zhǔn),精液離心后取沉渣鏡檢,3次均未發(fā)現(xiàn)精子可確診為無精子癥,無精子癥可以分為梗阻性與非梗阻性兩大類型,排除因輸精管道缺如(如輸精管、精囊缺如)或輸精管道阻塞(輸精管結(jié)扎、射精管梗阻)等所致梗阻性無精子癥及染色體畸形病變、Y染色體微缺失等。選取2013年1月-2013年9月來鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院生殖中心就診的50例非梗阻性無精子癥患者作為病例組,同時取50例男方生育力正常者作為對照組,排除因男性不育實施過手術(shù)治療或通過輔助生殖技術(shù)獲得生育者。清晨空腹采集病例組及對照組上肢靜脈血3ml,將所采集標(biāo)本移置EP管并保存于-20℃待測。2.研究方法:嚴(yán)格按照試劑盒使用方法提取病例組及對照組外周血DNA,PCR方法擴增患者外周血基因組獲得泛素特異蛋白酶26基因片段,通過seqman軟件分析比對基因測序結(jié)果,確定泛素特異蛋白酶26基因在259-1206、長度為947bp的基因片段中突變的方式和位點。3.統(tǒng)計學(xué)方法:運用seqman軟件分析測序結(jié)果,采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。病例組與對照組之間的差異使用X2檢驗,雙側(cè)檢驗水準(zhǔn)α=0.05,P0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.所選病例組及對照組,無染色體畸形病變及Y染色體微缺失。2.基因測序分析結(jié)果顯示:在所測的259-1206基因片段中,50例對照組均未檢測到USP26基因的突變,但在50例病例組中有12例存在USP26基因復(fù)合突變,其中主要表現(xiàn)為363-364位點插入了ACA及494位點T置換成C,其余位點未見突變。3.在所測結(jié)果中,50例無精子癥患者中有12例患者在363-364位點插入ACA及494位點T置換成C,突變的同時伴隨有氨基酸序列的改變,其突變率為24%,X2=13.636,P=0.000(0.005),具有統(tǒng)計學(xué)意義。4.正常生育組未見突變。P=1(0.05),無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論1.男性無精子癥的發(fā)生與USP26基因突變存在某種聯(lián)系,這種基因突變可能會在某種程度上造成精液質(zhì)量的嚴(yán)重下降或在一定程度上調(diào)控精子的發(fā)生,進而導(dǎo)致男性無精子癥。2.泛素特異性蛋白水解酶26可特異性的在精子產(chǎn)生的多個階段及睪丸組織中表達,這種酶可降解蛋白質(zhì)。該酶可以對泛素前體進行活化,是組成泛素-蛋白酶途徑的一部分,參與蛋白質(zhì)的降解及功能發(fā)揮,進而在精子形成過程中起著非常重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：泛素特異性蛋白水解酶 USP26 基因突變 男性無精子癥
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R698.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英文縮略詞12-13
• 1 引言13-17
• 2 實驗標(biāo)本、試劑及儀器17-20
• 3 實驗方法20-25
• 4 實驗結(jié)果25-28
• 5 討論28-32
• 6 結(jié)論32-33
• 附圖33-34
• 參考文獻34-37
• 綜述 無精子癥病因的相關(guān)性探討37-57
• 參考文獻52-57
• 個人簡歷 在學(xué)校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和研究成果57-58
• 致謝58

【共引文獻】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫擎;分泌型多肽TAT-CT3-cMyc對白血病HL-60細胞的生長調(diào)節(jié)[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 彭國慶;甲醛誘導(dǎo)雌性大鼠卵巢及子宮毒性研究[D];中南大學(xué);2011年

3 朱小東;鼻咽癌后程加速超分割放射治療的臨床及實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

4 于光艷;甲醛聯(lián)合苯對幼鼠骨髓細胞毒性及其相關(guān)機制的研究[D];吉林大學(xué);2008年

5 陳雪梅;鄰苯二甲酸二丁酯和苯并[a]芘對雄性大鼠的聯(lián)合生殖毒性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

6 吳成秋;居室空氣甲醛與苯污染的生殖和胚胎發(fā)育毒性及其作用機制研究[D];中南大學(xué);2010年

7 邱慶明;若干生精細胞相關(guān)基因功能初步研究[D];中南大學(xué);2009年

8 張瑋;泛素特異性蛋白酶Usp46和Usp26基因錯義突變對去泛素化酶活性的影響及其流行病學(xué)意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

9 武陽;瞬時受體電位通道和神經(jīng)肽表達上調(diào)在甲醛誘導(dǎo)型支氣管哮喘小鼠模型中的作用[D];華中師范大學(xué);2013年

10 董媛;染色體異常與睪丸生精障礙相關(guān)研究[D];吉林大學(xué);2014年

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本文編號：1072111