本文關鍵詞：過表達CRMP2對彌漫性軸索損傷后α7nAChR及Aβ的影響

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【摘要】：目的研究過表達腦衰反應調節(jié)蛋白2(collapsin response-mediator protein 2,CRMP2)對大鼠彌漫性軸索損傷(diffuse axonal injury,DAI)后β-淀粉樣前體蛋白(β-amyloid precursor protein,β-APP)及β-淀粉樣蛋白(amyloidβ,Aβ)表達的影響。方法1.實驗動物分組:實驗分為正常對照組、DAI組、AAV組及CRMP2組。正常對照組動物入組即處死。AAV組及CRMP2組分別注射空白AAV病毒和AAV-CRMP2病毒,10天后予以DAI損傷。DAI組僅致傷,不注射病毒。各損傷組大鼠分別于傷后7、14、30天處死,取標本保存待測。2.DAI大鼠模型建立:利用本課題組自行研制的DAI致傷裝置建立大鼠DAI模型,該裝置可通過產(chǎn)生復合線加速和角加速運動致傷(專利號:ZL200920067463.4、ZL 200910056452.0、ZL 201520430079.1)。3.病毒制備及注射:采用基因重組技術將CRMP2基因插入AAV表達載體,構建AAV重組質粒。通過重組AAV載體包裝系統(tǒng)共轉染HEK293細胞包裝病毒,并測定病毒滴度。AAV組和CRMP2組的大鼠采用立體定向技術分別注射2ul空白AAV病毒及AAV-CRMP2病毒至右側海馬區(qū)。4.組織學研究:各組大鼠深麻醉后處死取腦,腦組織固定24小時后石蠟包埋,利用免疫熒光技術定性觀察不同時間點海馬組織α7n ACh R和Aβ的表達情況。5.α7n ACh R和Aβ檢測:各組大鼠深麻醉后處死取腦,取右側海馬組織。采用Western blot、Real-time PCR技術定量評估α7n ACh R蛋白及m RNA的動態(tài)變化,采用Elisa方法檢測Aβ蛋白的表達變化。6.統(tǒng)計學處理:使用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計分析,組間均數(shù)比較采用方差分析,p0.05為差異具有統(tǒng)計學顯著性。結果1.組織學研究:α7n ACh R和Aβ在大鼠海馬組織中均有表達。在免疫熒光顯微鏡下海馬組織中α7n ACh R和Aβ免疫熒光反應呈陽性,發(fā)出紅色熒光,胞核發(fā)出藍色熒光。2.海馬組織中α7n ACh R表達:與正常對照組相比,DAI組與AAV組海馬組織中α7n ACh R蛋白及m RNA水平在傷后各時間點均明顯降低(p0.05),但這兩組之間無明顯差異。CRMP2組較以上兩組明顯升高,具有統(tǒng)計學意義(p0.05),但仍低于正常組(p0.05)。3.海馬組織中Aβ表達:與正常對照組相比,在傷后各時間點DAI組和AAV組海馬組織中Aβ的表達均明顯升高(p0.05)。但DAI組和AAV組之間無明顯差異(P?0.05)。與DAI組和AAV組相比,CRMP2組Aβ的表達在損傷7、14天均明顯減低(p0.05),而在損傷30天無明顯差異;但DAI組、AAV組及CRMP2組Aβ的表達均高于正常組(p0.05)。結論1.大鼠DAI后海馬組織內(nèi)α7n ACh R表達降低,Aβ表達增加。2.大鼠DAI后過表達CRMP2可引起α7n ACh R表達升高及Aβ表達降低。
【關鍵詞】：彌漫性軸索損傷 腦衰反應調節(jié)蛋白2 海馬β-淀粉樣蛋白 α7煙堿型乙酰膽堿受體
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R651.15
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-29
• 結果29-40
• 討論40-43
• 結論43-44
• 參考文獻44-47
• 附錄A 英文縮寫詞一覽表47-48
• 附錄B 綜述48-55
• 參考文獻52-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 孫兆良;尹義國;戚睿;徐楠杰;馮東福;;大鼠彌漫性軸索損傷后腦干內(nèi)α7煙堿型乙酰膽堿受體的表達變化[J];中國臨床神經(jīng)外科雜志;2013年05期

2 趙麗琴;席斌;彭華松;;腺相關病毒(AAV)載體研究進展[J];生物技術進展;2012年02期

3 劉燕燕;楊璇;韓松;蘇吉兒;羅宏;李俊發(fā);;cPKCγ參與低氧預適應對小鼠腦缺血皮質內(nèi)CRMP2水解和磷酸化的調節(jié)[J];基礎醫(yī)學與臨床;2012年01期

4 郭國慶;張吉鳳;紀志盛;;CRMPs對神經(jīng)元突起生長的調控[J];暨南大學學報(自然科學與醫(yī)學版);2011年06期

5 顧磊;馮東福;;彌漫性軸索損傷后工作記憶障礙的研究進展[J];中國臨床神經(jīng)外科雜志;2010年10期

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本文編號：929718