發(fā)布時(shí)間：2017-08-21 20:29

  本文關(guān)鍵詞：五子衍宗丸對幼年雄性大鼠睪丸Ki67、AR表達(dá)以及性激素的影響

  更多相關(guān)文章： 五子衍宗丸 雄激素受體 雄性生殖 支持細(xì)胞

【摘要】：研究背景和目的：近年來,男性不育的比例逐年上升,全世界不育夫婦約占育齡夫婦的15%,其中男方因素約占50%。多種原因可以導(dǎo)致男性不育,其中無精,少精,弱精或者畸形精子均屬精子發(fā)生障礙中最常見的原因。中醫(yī)理論認(rèn)為腎藏精,主生殖,腎精的充盛與否決定著生殖能力的強(qiáng)弱。歷代醫(yī)家都很重視補(bǔ)腎填精法在治療男性生殖系統(tǒng)疾病中的重要作用,認(rèn)為腎精虧虛是導(dǎo)致男性生殖能力減弱的主要原因。五子衍宗丸具有補(bǔ)腎填精、促進(jìn)生殖的功能,由枸杞子、覆盆子、車前子、菟絲子、五味子組成,是中醫(yī)治療男性不育的經(jīng)典方劑。目前臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究以不育患者或者各種造模后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為研究對象,探討病理狀態(tài)下五子衍宗丸對生殖功能異常的改善或治療作用,而生理狀態(tài)下,五子衍宗丸能否促進(jìn)幼年大鼠生殖功能發(fā)育成熟還不清楚。此外,前期的研究多局限于精子功能的概述,比如精子的數(shù)量和活動(dòng)度,而尚未發(fā)現(xiàn)從曲細(xì)精管中支持細(xì)胞與生精細(xì)胞功能的變化來探討幼年大鼠睪丸生殖功能的研究。本研究的目的是以幼年雄性大鼠為研究對象,從FSH、LH、T的變化,Ki67、AR和CK-18的變化以及睪丸間質(zhì)細(xì)胞、精子細(xì)胞變化來探討五子衍宗丸是否能促進(jìn)幼年大鼠的生殖功能,為腎主生殖的中醫(yī)理論提供現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)。研究方法：實(shí)驗(yàn)一：(1)20d齡Wistar雄性大鼠40只,隨機(jī)分為5組：20d組、30d組、40d組、50d組、60d組,每組8只。給予正常的飲食和水,分別在第Od、10d、20d、30d、40d后腹主動(dòng)脈取血、睪丸取材。(2)放射性免疫法測定大鼠血清激素水平：卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、睪酮(T)。(3) RT-PCR:Ki67、AR、CK-18基因表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二：(1)20d齡Wistar雄性大鼠16只,隨機(jī)分為正常組和給藥組2組,每組8只。給藥組每天給予五子衍宗丸灌胃,正常組給予等體積生理鹽水,連續(xù)灌胃10d,每天一次。10%水合氯醛麻醉后,腹主動(dòng)脈取血,雙側(cè)睪丸取材。(2)放射性免疫法測定大鼠血清激素水平：FSH、LH、T。(3)HE染色：觀察睪丸曲細(xì)精管內(nèi)形態(tài),并做形態(tài)計(jì)量。(4)免疫組織化學(xué)方法：Ki67蛋白的表達(dá)。(5) RT-PCR:CK-18、AR、Ki67基因表達(dá)。(6) Western-Blot:CK-18、AR蛋白的表達(dá)。研究結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一：(1)血清激素檢測結(jié)果：與20d組相比,30d組血清T水平顯著降低(P0.05),40d組、50d組、60d組均沒有明顯變化(P0.05)；與20d組相比,30d組、40d組、50d組、60d組血清FSH水平和LH水平均沒有明顯變化(P0.05)。(2) RT-PCR檢測結(jié)果：與20d組相比,30d組Ki67mRNA的表達(dá)沒有明顯變化(P0.05),40d組、50d組、60d組Ki67mRNA的表達(dá)明顯降低,(P0.05)；與20d組相比,30d組、40d組、50d組、60d組ARmRNA和CK-18mRNA的表達(dá)均明顯降低(P0.05)。實(shí)驗(yàn)二：(1)血清激素檢測結(jié)果：與正常組相比,給藥組血清T水平顯著升高(P0.05)；給藥組血清FSH水平和LH水平有升高的趨勢(P0.05)。(2)HE染色結(jié)果：30d齡大鼠均沒有變形的精子細(xì)胞和精子出現(xiàn),其曲細(xì)精管出現(xiàn)兩種明顯不同的形態(tài)：Ⅰ型只包含有精原細(xì)胞和精母細(xì)胞；Ⅱ型還出現(xiàn)了圓形的精子細(xì)胞。與正常組相比,給藥組Ⅰ型曲細(xì)精管占總曲細(xì)精管個(gè)數(shù)比明顯降低(P0.05)；Ⅱ型曲細(xì)精管占總曲細(xì)精管個(gè)數(shù)比明顯升高(P0.05)；Ⅰ型和Ⅱ型曲細(xì)精管平均細(xì)胞個(gè)數(shù)均明顯升高(P0.05)；間質(zhì)細(xì)胞平均個(gè)數(shù)明顯升高(P0.05)。(3)免疫組化結(jié)果：Ⅰ型曲細(xì)精管中,Ki67主要在精原細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞表達(dá)；而在Ⅱ型曲細(xì)精管中,Ki67主要在精原細(xì)胞中表達(dá)。和正常組比較,給藥組Ⅰ型和Ⅱ型曲細(xì)精管內(nèi)的Ki67表達(dá)水平都明顯升高(P0.05)。(4) RT-PCR檢測結(jié)果：與正常組相比,給藥組Ki67 mRNA和AR mRNA表達(dá)量明顯增高(P0.05),CK-18的表達(dá)沒有明顯變化(P0.05)。(5) Western blot檢測結(jié)果：與正常組比較,給藥組AR蛋白水平明顯升高(P0.05)；CK-18的蛋白水平?jīng)]有明顯變化(P0.05)。研究結(jié)論：(1)幼年雄性大鼠在發(fā)育過程中,可能通過T和AR的變化調(diào)控支持細(xì)胞的成熟和生精細(xì)胞的增殖,促進(jìn)生殖功能的完善。其中雄性大鼠30d齡時(shí)可能是調(diào)控的關(guān)鍵時(shí)期。(2)五子衍宗丸的作用靶點(diǎn)之一在睪丸,可能通過促進(jìn)未成熟睪丸間質(zhì)細(xì)胞的增殖,進(jìn)而使睪酮合成增多。(3)五子衍宗丸在生理狀態(tài)下,可能通過上調(diào)T和AR水平,促進(jìn)幼年雄性大鼠支持細(xì)胞發(fā)育,促進(jìn)早期精原細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞增殖,從而促進(jìn)雄性生殖功能。
【關(guān)鍵詞】：五子衍宗丸 雄激素受體 雄性生殖 支持細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文縮略詞表9-10
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述10-29
• 綜述一 五子衍宗丸的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展10-21
• 1 五子衍宗丸的藥理作用10-13
• 2 五子衍宗丸的臨床應(yīng)用13-16
• 3 結(jié)語16-17
• 參考文獻(xiàn)17-21
• 綜述二 睪丸支持細(xì)胞的中西醫(yī)研究進(jìn)展21-29
• 1 支持細(xì)胞的作用21-22
• 2 環(huán)境以及理化因素對支持細(xì)胞的損害22-24
• 3 中藥對支持細(xì)胞的作用24-25
• 4 結(jié)語25-26
• 參考文獻(xiàn)26-29
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究29-51
• 實(shí)驗(yàn)一 幼年雄性大鼠發(fā)育過程中睪丸Ki67、AR表達(dá)以及性激素的變化29-37
• 前言29
• 1 材料及方法29-32
• 2 結(jié)果32-34
• 3 討論34-37
• 實(shí)驗(yàn)二 五子衍宗丸對幼年雄性大鼠睪丸Ki67、AR表達(dá)以及性激素的影響37-51
• 前言37
• 1 材料及方法37-44
• 2 結(jié)果44-48
• 3 討論48-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 結(jié)語54-55
• 致謝55-56
• 個(gè)人簡歷56

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：714953