研究目的:本文擬通過一次性力竭運動和鈍挫傷模型誘導(dǎo)Wistar大鼠骨骼肌損傷,通過檢測MG53、PTRF、Pax7、β-catenin在力竭運動和鈍挫傷后即刻、24和48小時不同時相的變化,探討MG53、PTRF、Pax7、β-catenin在骨骼肌損傷修復(fù)再生中的作用及其調(diào)節(jié)機制。研究方法:實驗選用Wistar純系清潔級6-8周齡雄性大鼠42只,隨機分為7組,每組各6只:安靜對照組(C組)、力竭運動即刻組(E0組)、力竭運動后24H組(E24組)、力竭運動后48H組(E48組)、鈍挫傷即刻組(DO組)、鈍挫傷后24H組(D24組)、鈍挫傷后48H組(D48組)。安靜對照組取材:將大鼠腹腔注射麻醉,腹主動脈取血制備血清。取下左側(cè)腓腸肌,分為兩份,一份待測酶聯(lián)免疫法ELISA,另一份待測實時熒光定量PCR。運動組和鈍挫傷組取材:Wistar大鼠分別在力竭運動和鈍挫傷后即刻、24和48小時取材,取材步驟同上。研究結(jié)果:(1)PTRF的RT-PCR實驗結(jié)果:與C組相比,E0組、E24組和DO組、D24組、D48組大鼠骨骼肌PTRFmRNA表達(dá)水平顯著升高(p<0.05,p<0.0...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
前言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 骨骼肌概述
        1.1 骨骼肌的組織學(xué)結(jié)構(gòu)與功能
        1.2 骨骼肌損傷
            1.2.1 骨骼肌損傷概念
            1.2.2 骨骼肌損傷分類
            1.2.3 骨骼肌損傷機制
                1.2.3.1 肌細(xì)胞機械損傷
                1.2.3.2 能量代謝紊亂
                1.2.3.3 電解質(zhì)失衡
                1.2.3.4 自由基損傷
        1.3 骨骼肌損傷動物模型的建立與評價
            1.3.1 骨骼肌損傷動物模型的建立
                1.3.1.1 一次性力竭運動模型
                1.3.1.2 鈍挫傷模型
            1.3.2 骨骼肌損傷動物模型的評價
                1.3.2.1 安靜常氧狀態(tài)下骨骼肌的超微結(jié)構(gòu)
                1.3.2.2 一次性力竭運動對骨骼肌超微結(jié)構(gòu)的影響
                1.3.2.3 鈍挫傷對骨骼肌超微結(jié)構(gòu)的影響
        1.4 骨骼肌損傷的修復(fù)
    2 MG53、PTRF及其修復(fù)骨骼肌細(xì)胞膜損傷的機制
        2.1 細(xì)胞膜修復(fù)蛋白
            2.1.1 MG53蛋白
            2.1.2 聚合酶Ⅰ和轉(zhuǎn)錄釋放因子
        2.2 細(xì)胞膜損傷修復(fù)機制
            2.2.1 MG53與肌細(xì)胞膜修復(fù)
            2.2.2 PTRF與細(xì)胞膜修復(fù)
    3 肌衛(wèi)星細(xì)胞與骨骼肌損傷修復(fù)
        3.1 肌衛(wèi)星細(xì)胞概述
            3.1.1 肌衛(wèi)星細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)
            3.1.2 肌衛(wèi)星細(xì)胞的自我更新
            3.1.3 肌衛(wèi)星細(xì)胞的特異性標(biāo)記Pax7
            3.1.4 肌衛(wèi)星細(xì)胞與骨骼肌損傷修復(fù)
        3.2 Wnt/β-catenin信號通路與肌衛(wèi)星細(xì)胞
            3.2.1 Wnt/β-catenin信號通路
            3.2.2 Wnt/β-catenin信號通路與衛(wèi)星細(xì)胞自我更新
    4 研究展望
第二部分 實驗部分
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物與模型
            1.1.1 實驗動物和喂養(yǎng)
            1.1.2 實驗動物分組
            1.1.3 動物模型的建立
                1.1.3.1 一次性力竭運動模型
                1.1.3.2 鈍挫傷模型
        1.2 樣本取材與處理
            1.2.1 樣本取材
            1.2.2 組織樣本制備
        1.3 指標(biāo)測定與方法
            1.3.1 蛋白含量測定
                1.3.1.1 檢測原理
                1.3.1.2 檢測步驟
            1.3.2 酶聯(lián)免疫法
                1.3.2.1 檢測原理
                1.3.2.2 檢測方法與步驟
                1.3.2.3 結(jié)果計算
            1.3.3 骨骼肌組織總RNA的提取
                1.3.3.1 準(zhǔn)備工作
                1.3.3.2 提取總RNA
                1.3.3.3 RNA質(zhì)量和濃度檢測
            1.3.4 RNA反轉(zhuǎn)錄
            1.3.5 實時熒光定量(Real-Time PCR)
                1.3.5.1 引物設(shè)計
                1.3.5.2 實時熒光定量反應(yīng)體系
                1.3.5.3 實時熒光定量反應(yīng)條件
                1.3.5.4 實時熒光定量結(jié)果的計算
                1.3.5.5 熒光定量PCR溶解曲線
        1.4 實驗儀器
        1.5 實驗試劑
        1.6 統(tǒng)計學(xué)處理
    2 實驗結(jié)果
        2.1 力竭運動和鈍挫傷各組大鼠骨骼肌組織和血清PTRF含量的比較
        2.2 力竭運動和鈍挫傷各組大鼠骨骼肌組織PTRF mRNA表達(dá)水平的比較
        2.3 力竭運動和鈍挫傷各組大鼠骨骼肌組織和血清MG53含量的比較
        2.4 力竭運動和鈍挫傷各組大鼠骨骼肌組織MG53 mRNA表達(dá)水平的比較
        2.5 力竭運動和鈍挫傷各組大鼠骨骼肌組織和血清Pax7含量的比較
        2.6 力竭運動和鈍挫傷各組大鼠骨骼肌組織Pax7 mRNA表達(dá)水平的比較
        2.7 力竭運動和鈍挫傷各組大鼠骨骼肌組β-catenin mRNA表達(dá)水平的比較
    3 討論
        3.1 力竭運動和鈍挫傷對PTRF的影響
        3.2 力竭運動和鈍挫傷對MG53的影響
        3.3 力竭運動和鈍挫傷對Pax7的影響
        3.4 力竭運動和鈍挫傷對β-catenin的影響
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3827772