本文關(guān)鍵詞：急性大鼠脊髓損傷的蛋白組學(xué)初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】通過比較裂解液法、TCA-丙酮法和酚抽提取法提取大鼠脊髓蛋白的效率,選擇最適合的大鼠脊髓蛋白提取方法;研究大鼠急性脊髓損傷前后差異表達(dá)的蛋白質(zhì),分析這些蛋白質(zhì)生物學(xué)功能,為更加深入的了解脊髓損傷后復(fù)雜的病生理過程提供理論依據(jù)�！静牧虾头椒ā勘緦�(shí)驗(yàn)提取正常雌性Wistar大鼠T10前后1cm的脊髓組織,分別采用裂解液提取法、TCA-丙酮提取法和酚抽提取法提取脊髓蛋白,通過比較Bradford法測量蛋白質(zhì)的濃度,SDS-PAGE電泳和雙向電泳分析提取蛋白的種類和數(shù)量,選擇適合大鼠脊髓蛋白提取的最佳方案。成年雌性大鼠9只,隨機(jī)分成3組,每組3只。對照組不進(jìn)行脊髓打擊,僅采用同等劑量進(jìn)行麻醉,椎板切除后直接取材。實(shí)驗(yàn)組采用IMPACTOR MODEL-Ⅱ打擊器建立T10脊髓損傷模型(打擊力度為10g×25mm),根據(jù)取材時(shí)間的不同分成3h組和8h組。采用已經(jīng)建立的大鼠脊髓蛋白提取方案提取蛋白,通過雙向電泳技術(shù)分離各組提取的蛋白;采用PDQuest軟件分析和比較對照組和實(shí)驗(yàn)組的膠圖,尋找上調(diào)或者下調(diào)差異表達(dá)的蛋白;采用MALDI-TOF/TOF對這些蛋白質(zhì)進(jìn)行肽質(zhì)量指紋圖譜和二級質(zhì)譜鑒定;通過NCBI和Uni Prot KB數(shù)據(jù)庫對這些蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位和功能注解;STRING軟件對差異蛋白進(jìn)行通路分析。根據(jù)已建立的大鼠脊髓蛋白提取方案提取對照組,3h組和8h組蛋白質(zhì),通過Western Blot技術(shù)對已鑒定的關(guān)鍵差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。【結(jié)果】1.與裂解液法和酚抽提取法相比,TCA-丙酮提取法提取蛋白在SDS-PAGE電泳上有更多清晰的條帶,在雙向電泳上有這更多的蛋白斑點(diǎn),所以本實(shí)驗(yàn)采用TCA-丙酮提取法為最佳大鼠脊髓蛋白提取方法。2.實(shí)驗(yàn)組和對照組相比,共有30個(gè)差異表達(dá)的蛋白。包括9個(gè)代謝相關(guān)蛋白,6個(gè)氧化應(yīng)激蛋白,5個(gè)神經(jīng)纖維束蛋白,3個(gè)骨架蛋白,3個(gè)能量相關(guān)酶,1個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白,3個(gè)其它。其中11個(gè)上調(diào),19個(gè)下調(diào)。3.GFAP蛋白在損傷后3h表達(dá)明顯下降,8h表達(dá)量開始回升,與雙向電泳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)TCA-丙酮蛋白提取法最適合大鼠脊髓蛋白提取,應(yīng)用蛋白組學(xué)技術(shù)篩選急性大鼠脊髓損傷前后的蛋白,繪制差異表達(dá)的蛋白譜,尋找潛在的與脊髓損傷相關(guān)的特異分子標(biāo)志物和探索脊髓損傷后復(fù)雜級聯(lián)病生理機(jī)制,為將來進(jìn)一步脊髓損傷的治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：脊髓損傷 蛋白提取 蛋白組學(xué) wistar大鼠 GFAP
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-15
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、大鼠脊髓蛋白提取方法的選擇15-27
• 1.1 對象和方法15-22
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-22
• 1.2 結(jié)果22-25
• 1.2.1 三種提取方法的蛋白濃度22
• 1.2.2 三種提取方法的SDS-PAGE結(jié)果分析22-23
• 1.2.3 三種提取方法的雙向電泳圖結(jié)果23-25
• 1.3 討論25-26
• 1.4 小結(jié)26-27
• 二、急性大鼠脊髓損傷后蛋白組學(xué)研究27-40
• 2.1 對象和方法27-29
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料27
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法27-29
• 2.2 結(jié)果29-37
• 2.2.1 不同時(shí)間點(diǎn)的雙向電泳圖29-31
• 2.2.2 差異蛋白的質(zhì)譜鑒定31-35
• 2.2.3 差異蛋白的分類35-37
• 2.3 討論37-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 三、GFAP表達(dá)的Western blot組學(xué)研究40-45
• 3.1 對象和方法40-42
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料40-41
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 3.2 結(jié)果42-43
• 3.3 討論43-44
• 3.4 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明54-55
• 附錄55-62
• 綜述 脊髓損傷的蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展62-72
• 綜述參考文獻(xiàn)67-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐蓉;盧明;;銅及銅鋅超氧化物歧化酶對神經(jīng)保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2011年05期

  本文關(guān)鍵詞：急性大鼠脊髓損傷的蛋白組學(xué)初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：290969