天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

IL-8對乳腺癌干細胞的影響及其作用機制

發(fā)布時間:2020-02-08 19:54
【摘要】:研究背景::乳腺癌是女性最高發(fā)的惡性腫瘤之一,全球每年約新增138萬名乳腺癌患者,占女性新發(fā)腫瘤的30%。并且近年來的研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌的發(fā)病有年輕化的趨勢。并已成為威脅女性生命的“頭號殺手”。乳腺癌是一種全身性疾病,早期手術(shù)是最主要的治療方法,而化療和放療是晚期患者治療的重要策略。腫瘤細胞的化療耐藥或放療抵抗是乳腺癌臨床治療的主要障礙,而腫瘤的復發(fā)和轉(zhuǎn)移是導致乳腺癌患者治療失敗和引起癌癥病人生活質(zhì)量下降及死亡的主要原因。目前研究認為,腫瘤干細胞是腫瘤不斷生長及復發(fā)轉(zhuǎn)移的根源,腫瘤微環(huán)境在調(diào)控腫瘤干細胞的自我更新、多向分化及耐藥等過程中發(fā)揮重要作用。深入研究腫瘤微環(huán)境中的信號分子及其傳導通路對腫瘤干細胞的調(diào)控機制,可為制定新的治療策略有效靶向腫瘤干細胞,減少腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移提供理論依據(jù)。近年來,一種促炎細胞因子,CXC趨化因子8(CXCL8,又名白細胞介素8,interleukin8,IL-8),在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用引起了研究者的高度關(guān)注。 目的:了解乳腺癌干細胞IL-8及其受體特別是IL-8受體1(CXCR1)的表達情況;進一步探索外源性高表達IL-8對乳腺癌干細胞的影響及其作用機制,為乳腺癌的防治提供實驗依據(jù)。 方法:首先,利用磁珠分選出乳腺癌MCF-7細胞中CD44+/CD24-和非CD44+/CD24-兩組細胞,實時定量PCR、ELISA或Western Blot法檢測IL-8及其受體CXCR1的表達情況。然后,利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建高表達IL-8的真核表達載體(pcDNA3.1/myc-HisC-IL-8重組質(zhì)粒);利用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)到MCF-7細胞,轉(zhuǎn)染后24h收集細胞及其培養(yǎng)上清,qRT-PCR和ELISA方法檢測IL-8在MCF-7細胞中的過表達,Western Blot檢測IL-8受體CXCR1表達的變化。進一步利用CCK-8實驗、Transwell體外侵襲和遷移實驗了解IL-8高表達對MCF-7細胞的增殖、遷移及侵襲能力的影響。最后,通過成球?qū)嶒灹私釳CF-7細胞高表達IL-8后乳腺癌細胞乳腺球形成能力的變化,流式細胞儀檢測CD44+/CD24-和非CD44+/CD24-兩組細胞所占比例的變化Western Blot檢測乳腺癌干細胞標記物如ALDH1、BMI1表達的變化;同時,將高表達IL-8的MCF-7細胞接種裸鼠,觀察裸鼠腫瘤生長情況;接種后第21天,麻醉后取裸鼠外周血,ELISA法檢測IL-8水平的變化,取荷瘤裸鼠腫瘤組織,Western Blot檢測腫瘤組織中IL-8受體CXCR1、ALDH1及BMI1表達的變化,免疫組織化學檢測ALDH1表達的變化。 結(jié)果: 1.利用磁珠從乳腺癌MCF-7細胞中分選出CD44+/CD24-和非CD44+/CD24-兩群細胞后,ELISA檢測發(fā)現(xiàn)CD44+/CD24-細胞分泌的IL-8量明顯高于非CD44+/CD24-細胞,而qRT-PCR結(jié)果顯示在mRNA水平上CD44+/CD24-細胞的IL-8的表達低于非CD44+/CD24-細胞。qRT-PCR和Western Blot檢測證實在mRNA和蛋白水平上CD44+/CD24-細胞IL-8受體CXCR1的表達顯著高于非CD44+/CD24-細胞。 2.利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建高表達IL-8的真核表達載體(pcDNA3.1/myc-HisC-IL-8重組質(zhì)粒),并用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染到MCF-7細胞中,并用qRT-PCR和ELISA法證實轉(zhuǎn)染后細胞IL-8mRNA和蛋白表達均升高。進一步通過WesternBlot證實轉(zhuǎn)染后細胞IL-8受體CXCR1的表達也增加。 3.pcDNA3.1/myc-HisC-IL-8重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MCF-7細胞后,CCK8法檢測發(fā)現(xiàn)外源性高表達IL-8對乳腺癌MCF-7細胞的增殖能力沒有明顯影響;在Transwell侵襲實驗中穿過基質(zhì)膠的MCF-7細胞數(shù)分別為:IL-8轉(zhuǎn)染組:(247.3±17.6)個/高倍鏡視野,無關(guān)序列組:(76.7±3.1)個/高倍鏡視野,空白對照組:(86.3±7.4)個/高倍鏡視野;在Transwell遷移實驗中穿過小室基底膜的細胞數(shù)分別為:IL-8轉(zhuǎn)染組:(255.3±22.7)個/高倍鏡視野,無關(guān)序列組:(105.3±7.1)個/高倍鏡視野,空白對照組:(126.7±11.6)個/高倍鏡視野,提示,高表達IL-8的乳腺癌MCF-7細胞的遷移和侵襲能力顯著高于轉(zhuǎn)染無關(guān)序列或空白對照的MCF-7細胞,差別具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。 4.高表達IL-8的乳腺癌MCF-7細胞形成乳腺球的體積、乳腺球的數(shù)量明顯高于空白對照組和無關(guān)序列組;流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)高表達IL-8的乳腺癌MCF-7細胞中CD44+/CD24-比例為16.39%±0.56%,明顯高于空白對照組和轉(zhuǎn)染無關(guān)序列組的MCF-7細胞,其CD44+/CD24-的細胞比例分別為6.39%±0.59%,5.28%±1.1%;WesternBlot檢測發(fā)現(xiàn)高表達IL-8的乳腺癌MCF-7細胞乳腺癌干細胞標記物ALDH1及BMI1的表達明顯高于空白對照組和轉(zhuǎn)染無關(guān)序列組細胞,提示高表達IL-8不但可上調(diào)乳腺癌MCF-7細胞中的干細胞數(shù)量而且還能增強其“干性”標志物。進一步體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn):裸鼠接種等數(shù)量的轉(zhuǎn)染IL-8或轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的MCF-7細胞后,轉(zhuǎn)染IL-8的荷瘤裸鼠腫瘤的生長速度明顯快于轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的荷瘤裸鼠。接種后第21天,轉(zhuǎn)染IL-8的荷瘤裸鼠外周血中IL-8水平顯著高于轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的荷瘤裸鼠,同時,轉(zhuǎn)染IL-8荷瘤裸鼠的瘤重為(4.93±0.3)g,顯著高于轉(zhuǎn)染無關(guān)序列荷瘤裸鼠的瘤重(2.28±0.39)g,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);Western Blot檢測證實轉(zhuǎn)染IL-8后荷瘤裸鼠腫瘤組織中IL-8受體CXCR1的表達顯著高于轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的荷瘤裸鼠;免疫組織化學檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染IL-8的荷瘤裸鼠腫瘤組織ALDH1的表達明顯高于轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的荷瘤裸鼠,且Western Blot證實轉(zhuǎn)染IL-8后荷瘤裸鼠腫瘤組織IL-8受體CXCR1及乳腺癌干細胞的相關(guān)蛋白ALDH1及BMI1顯著高于轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的荷瘤裸鼠。 結(jié)論: 1.乳腺癌CD44+/CD24-干細胞可分泌IL-8并表達IL-8受體CXCR1。 2.外源性高表達IL-8在乳腺癌細胞IL-8受體CXCR1的表達水平也增高,伴有乳腺癌細胞遷移及侵襲能力的增強,同時乳腺癌細胞中CD44+/CD24-干細胞的數(shù)量、成球能力及干細胞相關(guān)蛋白ALDH1及BMI1的表達亦顯著增高,明顯促進荷瘤裸鼠腫瘤的生長。
【學位授予單位】:大連醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2014
【分類號】:R737.9

【共引文獻】

相關(guān)博士學位論文 前2條

1 巨大維;白細胞介素8在胃癌細胞侵襲中的作用及消痰散結(jié)方的干預研究[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

2 王玲;Celecoxib通過NF-κB通路調(diào)控人三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231生物活性的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2010年

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 劉為青;乳腺癌基因治療特異性多肽載體的研究[D];昆明醫(yī)學院;2008年

,

本文編號:2577597

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://www.sikaile.net/yixuelunwen/mazuiyixuelunwen/2577597.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶96e5b***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com