【摘要】：目的:研究重組靈芝免疫調節(jié)蛋白對D-半乳糖誘導的衰老小鼠的抗衰老及其美白作用。方法:(1)重組靈芝免疫調節(jié)蛋白抗衰老作用實驗研究?體內實驗除正常對照組外,其余4組全部采用D-半乳糖誘導小鼠的衰老模型。將健康昆明小鼠隨機分為5組:正常對照組、模型對照組、rLZ-8低、中、高劑量組(劑量由低到高分別為660,990及1320ug/kg體重)。連續(xù)給予受試藥物(小鼠背部去毛后涂抹給藥)8周后,麻醉取血與皮膚組織,用于血清學與組織形態(tài)學等指標檢測。?體外實驗體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞,將細胞分為4組:正常對照組、rLZ-8低、中、高劑量組(0.5,1及2ug/ml),分別于24h,48h,72h收集6孔板中細胞培養(yǎng)上清以檢測膠原、HA及HYP含量。(2)重組靈芝免疫調節(jié)蛋白美白作用實驗研究體外培養(yǎng)黑色素瘤細胞,均勻接種于6孔培養(yǎng)板中,細胞接種24h后,吸去培養(yǎng)液,加入無血清培養(yǎng)液。次日,加入受試藥物rLZ-8使終濃度為8,16,24,32,48ug/ml,并分別于24h,36h,48h及60h后收集細胞及培養(yǎng)上清,檢測TYR與LDH活性。同時采用四甲基偶氮唑藍比色法(MTT法)測定黑色素瘤細胞增殖抑制率。結果:(1)涂抹給藥后,小鼠較造模后毛色變亮,行動較為敏捷,外觀方面出現(xiàn)一定程度改觀。(2)給予受試藥物后,各給藥組小鼠皮膚含水量均有不同程度提高。(3)HE染色結果顯示,rLZ-8各劑量組小鼠皮膚表皮增厚,真皮層纖維增多增粗、皮膚附屬器數目亦有所增加。(4)免疫組織化學染色結果顯示,各劑量組I型、III型膠原蛋白、波形蛋白含量均有提高。(5)血清學與皮膚組織勻漿結果顯示,各給藥組與模型對照組相比,超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、過氧化氫酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、羥脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)、褪黑素(Melatonin,MT)均有明顯上調(P0.05),丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量降低(P0.05)。(6)體外實驗結果顯示,與空白對照組相比,各給藥組人皮膚成纖維細胞I型、III型膠原蛋白、透明質酸(Hyaluronic acid,HA)及HYP水平均有上調(P0.05)。(7)rLZ-8可抑制黑色素瘤細胞增殖速率,同時降低酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)、乳酸脫氫酶(Lactic dehydrogenase,LDH)活性。結論:1.rLZ-8可有效改善衰老小鼠的外觀特征及皮膚組織的病理形態(tài),提高皮膚組織中I型、III型膠原蛋白、波形蛋白含量,上調成纖維細胞分泌I型、III型膠原蛋白、HYP及HA,體內體外實驗共同證實重組靈芝免疫調節(jié)蛋白具有抗衰老作用。2.rLZ-8可提高抗氧化物酶(SOD、CAT及GSH-Px)活性、上調HYP、MT水平,下調脂質過氧化產物MDA水平,增強衰老小鼠機體抗氧化能力,發(fā)揮其延緩機體衰老的作用。3.rLZ-8可以抑制黑色素瘤細胞增殖降低黑色素合成過程中限速酶TYR的活性,破壞黑色素瘤細胞,以達到美白肌膚的作用。
【圖文】：

造模前后小鼠外觀變化圖

厚度有所增加，膠原纖維較模型對照組明顯增多增粗且分布趨于均勻，皮膚器形態(tài)有較好改善，數目亦有所增加；其中中、高劑量組較低劑量組皮膚改為明顯。各劑量給藥組的同體實驗側小鼠皮膚較模型對照組亦有一定改善作但遠不及各實驗組明顯。HE 染色結果見圖 2.3。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285

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本文編號：2559959