【摘要】：目的研究白介素22融合蛋白(IL-22-FP)對刀豆蛋白A(Con A)誘導急性肝損傷后行70%肝切除手術(PHx)的小鼠術后肝再生及肝臟保護的作用。方法建立小鼠Con A肝損傷和PHx手術模型,術后32 h通過過量麻醉法處死小鼠。5-溴脫氧尿嘧啶核苷染色,觀察小鼠肝臟再生情況;全自動生化分析儀檢測小鼠血清谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)水平;HE染色觀察小鼠肝臟組織損傷情況;Western blot法檢測小鼠肝組織中增值細胞核抗原(PCNA)、細胞周期蛋白D1(Cycli D1)、信號轉導子及轉錄激活子3(STAT3)及p-STAT3蛋白的表達情況。結果 Con A+PHx+IL-22-FP組小鼠同Con A+PHx+rh-IL-22組及其他組小鼠相比,表現(xiàn)出更多的肝細胞增殖和更高的肝指數(shù)(肝臟重量/體重);HE染色顯示Con A+PHx+IL-22-FP組小鼠肝臟壞死及炎癥細胞浸潤程度較低;生化檢測顯示ConA+PHx+IL-22-FP組血清ALT和AST水平明顯低于其他組;Western blot結果表明Con A+PHx+IL-22-FP組小鼠的肝臟組織PCNA、Cyclin D1和p-STAT3蛋白的表達量也明顯高于其他組。結論 IL-22-FP能夠促進由Con A誘導肝損傷的小鼠PHx后的肝再生,并表現(xiàn)出顯著的肝臟保護作用。
【圖文】：

圖1IL-22-FP對小鼠術后肝指數(shù)及肝細胞增殖的影響B(tài)rdU染色×400A:部分肝切除術后各組肝指數(shù)變化;B:部分肝切除術后肝組織BrdU染色圖;C:部分肝切除術后不同組別肝組織BrdU陽性率比較;1:Co-nA組;2:PHx組;3:ConA+PHx組;4:ConA+PHx+rh-IL-22組;5:ConA+PHx+IL-22-FP組;與ConA+PHx+IL-22-FP組比較:*P＜0.05，，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;與ConA+PHx+rh-IL-22組比較:#P＜0.01圖2IL-22-FP對小鼠術后血清ALT和AST水平的影響A:ALT;B:AST;1:ConA組;2:PHx組;3:ConA+PHx組;4:ConA+PHx+rh-IL-22組;5:ConA+PHx+IL-22-FP組;與ConA+PHx+IL-22-FP組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;與ConA+PHx+rh-IL-22組比較:#P＜0.05+IL-22-FP組更加明顯，說明IL-22-FP在這種模型的損傷下對肝臟具有更強的保護作用。2．4不同劑量IL-22-FP對PHx后肝再生作用的對比小鼠根據(jù)體重隨機分為3組(n=6)，分別標記為低、中、高劑量組，每組給以ConA損傷，4d后行PHx手術(具體給藥及手術方法如實驗方法中所述)。術前30min低、中、高3組分別給予42、125和375μg/kg劑量的IL-22-FP靜脈注射，術后32h過量麻醉處死小鼠。3組肝臟組織BrdU染色結果及BrdU陽性細胞百分比結果顯示見圖4。從染色圖片可以看出中劑量組和高劑量組染色陽性細胞數(shù)明顯高于低劑量組，BrdU陽性細胞百分比的結果也證實了這一點。盡管高劑量組BrdU陽性細胞數(shù)量多于中劑量組，但差異無統(tǒng)計學意義。低劑量組血清ALT水平明顯高于中劑量組(P＜0.05)和高劑量組(P＜0.05)，同樣的，中劑量組和高劑量組的差異無統(tǒng)計學意義(圖5)。見表3。2．5IL-22-FP促進術后PCNA、CyclinD1和p-STAT3蛋白的表達圖6顯示，在PHx術后，ConA+PHx+rh-IL-22組和ConA+PHx+IL-22-FP組小鼠較其他組肝?

圖3IL-22-FP對小鼠術后肝組織的保護作用HE×400A:ConA組;B:PHx組;C:ConA+PHx組;D:ConA+PHx+rh-IL-22組;E:ConA+PHx+IL-22-FP組圖4不同劑量IL-22-FP對小鼠術后肝細胞增殖的影響B(tài)rdU染色×400A:低劑量組(42μg/kg);B:中劑量組(125μg/kg);C:高劑量組(375μg/kg);與低劑量組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01圖5不同劑量IL-22-FP對小鼠術后血清ALT水平的影響與低劑量組比較:*P＜0.05增加的更加顯著，沒有經(jīng)過任何處理的正常組和ConA組表達量較少。這提示IL-22能夠促進小鼠術后肝臟中上述3種蛋白的表達，且IL-22-FP的促進作用強于rh-IL-22。各組STAT3蛋白表達量差異較校圖6IL-22-FP對小鼠術后肝組織PCNA、CyclinD1、STAT3及p-STAT3蛋白表達的影響A:正常組;B:ConA組;C:PHx組;D:ConA+PHx組;E:ConA+PHx+rh-IL-22組;F:ConA+PHx+IL-22-FP組;與ConA+PHx+IL-22-FP組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;與ConA+PHx+rh-IL-22組比較:#P＜0.0013討論外科肝切除手術被認為是肝癌患者的最佳治療手段。對于正常肝臟行PHx的最大比率為肝總體的70%～75%［9］，超過這一比例很有可能由于殘余肝臟再生不足而導致急性肝衰竭;而對于伴有基礎肝病/肝損傷的患者而言，這一切除比率會大大降低，這將嚴重限制手術的開展和疾病的治療。本研究證實了IL-22-FP能夠在存在基礎肝臟疾病的條件下顯著的提高PHx后的肝再生水平，同時，有效的減少術后肝臟的損傷。這為IL-22-FP用于臨床擴展肝切除手術適應癥及提高術后患者生存率提供了數(shù)據(jù)支持。目前的研究［1－6］已經(jīng)證實，IL-22在多種化學毒物(ConA、Ccl4、GaIN)、乙型肝炎病毒和酒精等因素引起的肝損傷中扮演著保肝角色，而這種保護作用·1112·安徽醫(yī)科大學學報Ac
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學藥學院;安徽醫(yī)科大學肝病研究所;安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院腫瘤科;安徽省立醫(yī)院老年醫(yī)學科;
【基金】：國家自然科學基金(編號:81100311,81470879) 新世紀優(yōu)秀人才支持計劃(編號:NCET-13-0644) 安徽省皖江學者計劃
【分類號】：R965

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7 李瀚e

本文編號：2551506