【摘要】：臨床上種植義齒在缺失牙患者的治療中適應證廣泛,近幾十年種植義齒更是迅速發(fā)展,越來越多的缺牙患者開始選擇種植義齒修復,種植學也成為了口腔學科中發(fā)展最為迅速的二級學科,種植義齒的出現甚至改變了傳統的缺牙修復治療模式。種植體周圍炎(又稱種植體周圍黏膜炎)是指發(fā)生在口腔種植體周圍軟組織的可逆炎癥。其發(fā)生發(fā)展的根本因素是寄生在種植體上的細菌微生物。由于口腔衛(wèi)生不良,種植體周圍菌斑堆積,從而刺激機體產生炎癥反應。臨床上患者表現為黏膜的紅腫、探診出血甚至溢膿等癥狀。其一般發(fā)生在種植體植入之后或行使功能之后,發(fā)生于種植體周圍組織的慢性炎癥,多導致種植體周圍支持骨吸收,其發(fā)展的最終歸宿是種植體脫落。良好的骨整合與種植體頸部良好的軟組織附著所形成的“袖口”封閉是維持種植體長期穩(wěn)定的生物學基礎,是抵抗種植體周圍炎的關鍵�！靶淇凇苯Y構的形成,可以起到生物學屏障作用,能夠有效阻止細菌及其他致炎因子的入侵,預防種植體周圍炎的發(fā)生,減少骨組織吸收,提高臨床種植義齒成功率。本實驗意在探討一種更有利于牙齦成纖維細胞附著的愈合基臺表面處理方法,為愈合基臺一種表面臨床改良提供可行的實驗依據。種植體可以長期穩(wěn)定存在于口腔環(huán)境并良好的行使作用,“骨結合”必不可少,其中種植體穿齦部分也起著至關重要的作用。雖然種植體周圍結合上皮和天然牙周圍結合上皮類似,以半橋粒與基底板附著在種植體表面,但是種植體和結締組織的結合方式一直存在著爭議。牙齦結締組織里牙齦成纖維細胞占最主要作用,本實驗擬研究微弧氧化處理和微弧氧化載銀處理的Ti6Al4V合金對牙齦成纖維細胞的生物學行為的影響,引導我們探索一種有利于袖口形成的愈合基臺的表面處理方法,具有一定臨床意義。第一章人牙齦成纖維細胞的培養(yǎng)及鑒定目的:體外分離培養(yǎng)人牙齦成纖維細胞(Human Gingival Fibroblasts, HGFs),觀察人牙齦成纖維細胞體外培養(yǎng)的形態(tài)特點,對其來源進行鑒定,為接下來的實驗提供細胞基礎。方法:選擇就診于南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院正畸科且需要拔牙進行矯正治療的年輕患者,年齡12～20歲,要求患者牙齦健康、無齲齒、無牙齦增生且未服用可使牙齦增生的藥物。征得其同意并簽署知情同意書后局部麻醉下拔除正畸牙同時切取牙齦組織,采用酶消化組織塊法對其進行原代培養(yǎng),并通過免疫組織化學染色對其來源進行鑒定。結果:1.顯微鏡下可觀察到原代細胞在培養(yǎng)到第3-5d左右時從黑色組織塊邊緣向四周游出,細胞緊貼培養(yǎng)瓶壁生長,細胞形態(tài)多呈長梭形,胞體豐滿,胞漿均勻,可見到單顆細胞核位于胞漿中央呈橢圓形,其內可見含2-3個核仁。伴隨培養(yǎng)天數的增加,細胞從組織塊中央向四周伸展,以組織塊為中心呈現放射狀排列,排列緊密,細胞呈極性排列。到觀察到細胞長滿培養(yǎng)瓶底約90%面積左右時可看見HGFs胞體排列緊密呈細長梭形,細胞排列呈旋渦狀與編織狀,傳代培養(yǎng)后的牙齦成纖維細胞生長旺盛,上皮細胞逐漸消失,性狀趨于穩(wěn)定。2.在光鏡下對細胞行免疫組化染色觀察,細胞表現出抗波形絲蛋白染色陽性,胞質內陽性顆粒分布均勻,胞核清晰、無染色;抗角蛋白染色陰性,證明細胞來源于中胚層,且無上皮源性細胞混雜。陰性對照組均未見陽性染色結果。說明我們培養(yǎng)的細胞來源于間充質而非上皮源性細胞。結論:本實驗通過組織塊法成功培養(yǎng)出HGFs,并通過免疫組織化學對其進行了鑒定,這些細胞增殖能力較強,可以在體外維持較長時間,足以滿足本接下來研究所需。第二章 微弧氧化與微弧氧化載銀處理的Ti6Al4V鈦合金理化性能的研究目的:使用掃描電鏡(SEM)、表面元素分析儀、表面粗糙度儀、接觸角測量儀檢測微弧氧化與微弧氧化載銀處理后的Ti6Al4V鈦合金表面形貌特點、元素組成、表面粗糙度水平和表面接觸角大小水平。方法:購置8mm直徑、0.8mm厚度的Ti6Al4V合金片;以Ti6Al4V鈦合金作為陽極,鉑電極作為陰極,采用350V恒壓,設置頻率50Hz,設置占空比50%,在冰塊冷卻作用下使電解液溫度保持在在40℃以下處理5min。試樣經微弧氧化后用去離子水超聲洗滌15min,放入烘干箱,烘干干燥紙塑密封包裝備用。配制為0.006mol/L濃度硝酸銀溶液作電解液,鉑電極作為陽極、微弧氧化處理后的試樣作作為陰極,硝酸銀溶液做電解液,設置2V電壓使試樣在電解液中處理30s,對鈦合金片作電沉積載銀處理(處理過程中均勻攪拌電解液),超聲清洗后干燥,得到載銀微弧氧化試樣。使用掃描電鏡(SEM)觀察處理后試樣表面形貌、結構;使用表面元素分析儀分析處理后試樣表面元素組成;使用表面粗糙度測量儀測量試件表面糙度,測量處理試樣表面液體接觸角并計算材料表面自由能。結果:掃描電鏡觀察微弧氧化后鈦合金片表面,可觀察到粗糙多孔氧化陶瓷,呈“火山口 ”形貌,“火山口”孔徑約2-5μm。檢測Ti6Al4V-MAO以及Ti6Al4V-MAO-Ag表面粗糙度得知粗糙度為微米級。進行表面接觸角檢測,發(fā)現Ti6Al4V-MAO以及Ti6Al4V-MAO-Ag組均小于光滑組。結論:經微弧氧化與微弧氧化載銀處理后的Ti6Al4V合金表面形成了“火山口”狀特殊形貌,其粗糙度加大,處理后所表面水接觸角更小,表面元素及元素比例發(fā)生變化。第三章微弧氧化Ti6Al4V鈦合金載銀對人牙齦成纖維細胞早期黏附、細胞形態(tài)及增殖的影響目的:研究微弧氧化Ti6Al4V鈦合金載銀對人牙齦成纖維細胞早期黏附、細胞形態(tài)及增殖的影響。方法:于光滑的Ti6Al4V鈦合金,Ti6Al4V-MAO以及Ti6Al4V-MAO-Ag表面分別接種原代培養(yǎng)的人牙齦成纖維細胞,通過掃描電鏡、CCK-8、熒光正置顯微鏡等方法檢測觀察HGFs的早期黏附、增殖情況及細胞形態(tài)。結果:1.細胞早期黏附:在光滑Ti6Al4V鈦合金、Ti6Al4V-MAO以及Ti6Al4V-MAO-Ag表面分別接種人牙齦成纖維細胞細胞,接種細胞12h,24h后用DAPI染料及熒光抗體分別對其細胞核與細胞骨架進行染色處理,熒光顯微鏡下計算細胞個數。12h,24h后Ti6Al4V-MAO組以及Ti6Al4V-MAO-Ag組表面細胞數量明顯多于光滑組,有統計學差異(P0.05)。2.細胞形態(tài):熒光正置顯微鏡下觀察經熒光染色處理的HGFs接種在光滑Ti6Al4V鈦合金、Ti6Al4V-MAO組與Ti6Al4V-MAO-Ag組表面12h后的細胞架形態(tài)變化,發(fā)現牙齦成纖維細胞在光滑鈦合金表面沿著拋光試樣時的紋路排列,呈梭型排開,細胞呈現出極性排列方式。而Ti6Al4V-MAO與Ti6Al4V-MAO-Ag組表面細胞呈紡錘型生長,細胞鋪展面積較大。掃描電鏡觀察可見在牙齦成纖維細胞與試樣恒溫共培養(yǎng)12h之后細胞延材料表面砂紙打磨痕跡單向極性伸展,呈梭型與條狀。而MAO與MAO-Ag組共培養(yǎng)牙齦成纖維細胞伸出偽絲和絲狀偽足。繼續(xù)培養(yǎng)至24h后可見到光滑組細胞有多方向伸展變化,MAO與MAO-Ag組牙齦成纖維細胞伸展面積明顯增大。3.細胞增殖:使用CCK8法檢測HGFs接種在對對照組、光滑組、MAO組以及MAO-Ag組表面1d、3d、5d、7d后的細胞增殖數量,發(fā)現培養(yǎng)1d時,各組的細胞增殖數量變化不明顯。但培養(yǎng)3 d、5 d、7 d后MAO組以及MAO-Ag組材料表面的細胞數量明顯多于光滑組,且有統計學差異。
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【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R783.6

【參考文獻】

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本文編號：2400711