【摘要】：目的:本實驗以中醫(yī)“腎主骨,生髓”理論為基礎,研究左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠骨髓成骨-成脂分化的影響,進一步探討中醫(yī)“髓”與“骨”的關系以及防治PMOP可能存在的機制。材料與方法:SPF級2月齡雌性大鼠65只,依據(jù)體重隨機分層的方法,分為空白組10只,假手術組10只,模型組45只。采用10%水合氯醛按0.3m L/100g體重進行腹腔麻醉,除空白組外,模型組從背部入路切除雙側卵巢,其中假手術組只切除卵巢周圍適量的脂肪組織,不切除雙側卵巢,最后逐層縫合,切口處給予青霉素肌肉注射,預防感染。術后7天,依據(jù)大鼠存活情況,分為空白組(KB)、假手術組(SHAM)、模型組(OVX)、補佳樂組(BJL)、左歸丸組(ZGW)、右歸丸組(YGW),共6組。經(jīng)過12周給藥治療后,去除由于手術、灌胃等其它原因?qū)е滤劳龅拇笫?只,共納入本次實驗的大鼠為60只,取材對指標進行檢測。全部實驗大鼠取材前24h禁止喂食,前2h禁止給藥,稱重并麻醉,對大鼠進行腹主動脈取血,在室溫下靜置2h后,離心,分離血清,凍存于-80℃冰箱,用于血脂檢測;取大鼠第2、3、4節(jié)腰椎并用濕潤的紗布和錫箔紙包裹好,凍存于-80℃冰箱,用于雙能X線骨密度測量;取大鼠股骨,并將附著于其上的肌肉、筋膜等組織剝離、剔除,置于4%多聚甲醛溶液中固定,然后投入到脫鈣液中脫鈣約21天,進行石蠟切片,用于骨組織形態(tài)學HE染色,觀察骨髓脂肪細胞數(shù)目;取大鼠股骨,剪斷股骨兩頭,暴露骨髓腔,用PBS緩沖液反復沖洗髓腔,沖出骨髓,直至骨干發(fā)白透明。將沖出的骨髓離心,棄去上層PBS,將裝有骨髓的離心管凍存于-80℃冰箱,分別采用實時熒光定量PCR法和蛋白印跡法檢測大鼠骨髓組織成骨指標Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN和成脂指標PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4基因和蛋白的表達情況。結果:1.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠第2、3、4節(jié)腰椎骨密度的影響各組大鼠第2、3、4節(jié)腰椎骨密度檢測結果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術組BMD表達量相當,無顯著性差異(P0.05),模型組BMD表達量降低,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組BMD表達量有所升高,有顯著性差異(P0.01);與補佳樂組比較,左歸丸組BMD表達量相當,無顯著性差異(P0.05),右歸丸組BMD升高不及補佳樂組,有顯著性差異(P0.01);與左歸丸組比較,右歸丸組BMD升高不及左歸丸組,有顯著性差異(P0.01)。左歸丸與右歸丸均可以提高去卵巢大鼠BMD,其中左歸丸組效果優(yōu)于右歸丸組。2.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠血脂的影響各組大鼠血脂檢測結果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C表達量相當,無顯著性差異(P0.05),模型組血清TC、TG、LDL-C表達量降低,HDL-C表達量升高,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組TC、TG、LDL-C表達量有所降低,HDL-C表達量升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05)。與補佳樂組比較,左歸丸組、右歸丸組TC、TG、LDL-C、HDL-C表達量相當,無顯著性差異(P0.05);與左歸丸組比較,右歸丸組TC、TG、LDL-C、HDL-C表達量相當,無顯著性差異(P0.05)。3.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠骨髓組織Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN的影響各組大鼠骨髓組織成骨m RNA檢測結果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPNm RNA表達量相當,無顯著性差異(P0.05),模型組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPNm RNA表達量降低,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN m RNA表達量有所升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與補佳樂組比較,左歸丸組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPNm RNA表達量相當,無顯著性差異(P0.05),右歸丸組Runx2、CollagenⅠm RNA表達量升高不及補佳樂組,有差異(P0.05);與左歸丸組比較,右歸丸組CollagenⅠm RNA表達量升高不及左歸丸組,有差異(P0.05)。各組大鼠骨髓組織成骨蛋白檢測結果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達量相當,無顯著性差異(P0.05),模型組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達量降低,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達量有所升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與補佳樂組比較,左歸丸組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達量相當,無顯著性差異(P0.05),右歸丸組CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達量升高不及補佳樂組,有顯著性差異((P0.01或P0.05);與左歸丸組比較,右歸丸組CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達量不及左歸丸組,有顯著性差異(P0.01或P0.05)。4.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠股骨近端骨髓脂肪細胞數(shù)目的影響各組大鼠股骨近端HE染色結果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術組股骨近端骨小梁排列致密整齊,形態(tài)完整,骨髓中有少量的脂肪細胞,無顯著性差異(P0.05),模型組骨小梁結構散亂稀疏變細,股骨近端骨髓脂肪細胞數(shù)目增多,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組股骨近端骨髓脂肪細胞數(shù)目明顯減少,有顯著性差異(P0.01);與補佳樂組比較,左歸丸組股骨近端骨髓脂肪細胞數(shù)目相當,無顯著性差異(P0.05),右歸丸組股骨近端骨髓脂肪細胞數(shù)目增多,有顯著性差異(P0.01);與左歸丸組比較,右歸丸組股骨近端骨髓脂肪細胞數(shù)目增多,有顯著性差異(P0.01)。5.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠骨髓組織PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4的影響各組大鼠骨髓組織成脂m RNA檢測結果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表達量相當,無顯著性差異(P0.05),模型組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表達量升高,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表達量有所降低,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與補佳樂組比較,左歸丸組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表達量相當,無顯著性差異(P0.05),右歸丸組C/EBPαm RNA表達量升高,有顯著性差異(P0.01);與左歸丸組比較,右歸丸組C/EBPαm RNA表達量升高,有顯著性差異(P0.01)。各組大鼠骨髓組織成脂蛋白檢測結果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表達量相當,無顯著性差異(P0.05),模型組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表達量升高,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表達量有所降低,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與補佳樂組比較,左歸丸組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表達量相當,無顯著性差異(P0.05),右歸丸組PPARγ、C/EBPβ蛋白表達量升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與左歸丸組比較,右歸丸組PPARγ、C/EBPβ蛋白表達量升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05)。結論:1.實驗大鼠切除雙側卵巢后,腰椎骨密度降低;左歸丸與右歸丸可有效改善去卵巢骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度的流失,防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。2.實驗大鼠切除雙側卵巢后,出現(xiàn)血脂代謝紊亂,骨髓向脂肪細胞分化增強。左歸丸與右歸丸可有效改善去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠脂代謝紊亂,促進成骨分化,抑制成脂分化,調(diào)控骨髓成骨-成脂分化平衡。3.絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的病機之一與骨髓成骨-成脂分化失衡有關。左歸丸與右歸丸可以有效防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥,其作用機理與其調(diào)控骨髓成骨-成脂分化平衡有關,本研究為臨床應用左歸丸與右歸丸防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥提供了一定的實驗依據(jù)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 郭魚波;馬如風;王麗麗;唐雨晴;李_g;張東偉;牛建昭;;骨質(zhì)疏松動物模型及其評價方法的研究進展[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2015年09期

2 譚峰;樊巧玲;卞玉群;管華全;;左、右歸丸對去卵巢骨質(zhì)疏松癥大鼠模型骨密度及骨代謝的影響[J];中國實驗方劑學雜志;2015年09期

3 安敏;王兆杰;安榮澤;葉含釗;;成骨細胞向脂肪細胞和骨細胞分化的研究進展[J];中國醫(yī)學創(chuàng)新;2015年06期

4 伍海昭;朱敏;詹紅生;陳海嘯;;骨碎補總黃酮對去卵巢大鼠骨組織Ⅰ型膠原表達及骨代謝的影響[J];中醫(yī)正骨;2014年04期

5 申全財;;原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的預防和治療[J];山西職工醫(yī)學院學報;2013年06期

6 李玲慧;丁道芳;杜國慶;宋奕;石印玉;詹紅生;;左、右歸丸對大鼠成骨細胞增殖及Ⅰ型膠原蛋白表達的影響[J];中國中醫(yī)骨傷科雜志;2013年10期

7 龔顏;王鍵;魏勁松;;骨質(zhì)疏松與骨髓間充質(zhì)干細胞分化調(diào)控的研究進展[J];海南醫(yī)學;2013年03期

8 王艷杰;任艷玲;宋囡;李亞玲;呂海波;趙金茹;;左歸丸對去卵巢大鼠股骨中Ⅰ型膠原mRNA表達的影響[J];中國老年學雜志;2012年23期

9 任艷玲;李婭玲;呂海波;劉立萍;趙金茹;王良辰;;左歸丸對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠腎臟TGF-β_1/Smad4 mRNA表達的影響[J];中國實驗方劑學雜志;2012年10期

10 卞琴;沈自尹;王擁軍;;骨髓間充質(zhì)干細胞在中醫(yī)理論中的歸屬[J];中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志;2011年07期

相關博士學位論文 前1條

1 邱曦;雌激素對骨髓造血功能的影響及其機制的研究[D];浙江大學;2012年

相關碩士學位論文 前3條

1 張曉星;淫羊藿苷對去卵巢后骨質(zhì)疏松大鼠骨強度、骨微結構、血清BGP及Fabp4mRNA的影響[D];暨南大學;2014年

2 羅曉;滋腎丸浸膏對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松模型骨密度、骨髓OPG/RANK/RANKL系統(tǒng)的影響的實驗研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2009年

3 臧晶;大豆異黃酮類成分對去卵巢大鼠脂類代謝的影響及機制初探[D];北京中醫(yī)藥大學;2003年

，

本文編號：2294651