本文選題：心肌肥厚 + 螺內(nèi)酯　； 參考：《河北醫(yī)科大學》2014年博士論文

【摘要】：心肌肥厚是心臟對急、慢性血流動力學超負荷和非血流動力學因素的一種基本的適應性反應,是高血壓、瓣膜病、急性心肌梗死及先天性心臟病等心血管疾病的一種常見的并發(fā)癥。心肌肥厚使心力衰竭和心臟性猝死的風險顯著增加。心肌肥厚的發(fā)生過程中腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)被激活。應用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）或血管緊張素受體阻斷劑（ARB）可降低心衰病人的死亡率和發(fā)病率。然而僅僅抑制血管緊張素Ⅱ并不能完全阻斷醛固酮的生成，大約有40%的心衰病人在應用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑治療時仍伴有醛固酮增高。越來越多的研究表明，醛固酮參與了心肌肥厚、心衰過程。隨機臨床實驗表明，醛固酮受體拮抗劑螺內(nèi)酯與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑合用降低了心肌梗死后充血性心力衰竭患者的死亡率。因此，心力衰竭治療的臨床實踐指南推薦醛固酮受體拮抗劑作為心衰患者的一線治療藥物。然而，應用醛固酮受體拮抗劑進行治療的同時增加了并發(fā)癥風險，特別是高鉀血癥，可引起嚴重的心律失常事件。因此，在臨床上聯(lián)合使用醛固酮受體拮抗劑引發(fā)高血鉀的擔憂減少了醛固酮受體拮抗劑在心衰治療中的應用，特別是高血壓伴早期心肌肥厚性重構(gòu)的治療是否應用醛固酮受體阻斷劑尚無定論。 近幾年，越來越多的實驗研究中采用“低劑量”醛固酮受體拮抗劑，盡管不同的實驗研究采用螺內(nèi)酯（spironolactone，Sp）的劑量各異，一般接受的概念是低劑量指不影響血壓的劑量。實驗發(fā)現(xiàn)，在過表達腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因大鼠，低劑量Sp（1mg/kg）與傳統(tǒng)使用的劑量(30mg/kg)具有相當?shù)男呐K保護作用。臨床實驗發(fā)現(xiàn)，低于常規(guī)用量下的螺內(nèi)酯與其他一線降壓藥合用可以發(fā)揮顯著腎臟保護作用。上述研究結(jié)果提示，低于傳統(tǒng)排鈉利尿用量的“低劑量”Sp具有臟器保護作用，此作用不依賴于其血流動力學的改變。而臨床研究發(fā)現(xiàn)低劑量Sp引發(fā)高血鉀的風險顯著減低。由此我們假定，在不影響腎臟排鈉、儲鉀的低劑量下，醛固酮受體拮抗劑與ACEI或ARB抗心衰藥物聯(lián)合應用可以對抗心臟肥厚性重構(gòu)，同時又可避免高血鉀的風險。為驗證上述假設，本研究首先利用壓力超負荷致心肌肥厚大鼠模型，評價“低劑量” Sp（不影響血鉀）與ARB類藥物厄貝沙坦（irbesartan，Ir）聯(lián)用對心肌肥厚性重構(gòu)的有效性，并與常規(guī)劑量下Sp的作用進行比較。同時測定血清鉀濃度，評估其誘發(fā)高血鉀的風險；并觀察低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對心肌氧化應激狀態(tài)的影響，以探討兩藥聯(lián)合效應的潛在藥理機制。此外，本研究利用核因子NF-E2相關(guān)因子(nuclear factor erythroid2-related factor2，Nrf2)基因敲除小鼠，觀察Nrf2在外源性醛固酮誘導心肌肥厚中的調(diào)控作用。研究預期為臨床醛固酮受體拮抗劑應用于心肌肥厚、心衰的治療提供實驗依據(jù)。 第一部分低劑量螺內(nèi)酯與厄貝沙坦聯(lián)合應用對大鼠心肌肥厚性重構(gòu)的影響 目的：本研究利用壓力超負荷致心肌肥厚大鼠模型，評價“低劑量”醛固酮受體拮抗劑螺內(nèi)酯與血管緊張素受體阻斷劑厄貝沙坦聯(lián)用對心肌肥厚性重構(gòu)的有效性，并與常規(guī)劑量下螺內(nèi)酯的作用進行比較。同時測定血清K濃度，評估其誘發(fā)高血鉀的風險。 方法：選用雄性SD大鼠，腹主動脈部分縮窄（PAAC）法制備心肌肥厚模型。造模4周后用超聲診斷儀測定心室壁厚度。隨后進行隨機分組：假手術(shù)組，模型組，厄貝沙坦（15mg/kg/d）組，低劑量螺內(nèi)酯（1mg/kg/d）+厄貝沙坦（15mg/kg/d）組，常規(guī)劑量螺內(nèi)酯（20mg/kg/d）+厄貝沙坦（15mg/kg/d）組。灌胃給藥4周后，超聲心動圖測定心室壁厚度及心臟收縮功能參數(shù)；右側(cè)頸動脈插管至心室腔，記錄麻醉動物的血壓及左室壓力變化等血流動力學參數(shù)；計算左室質(zhì)量指數(shù)（左心室重/體重，LVW/BW）；HE染色及Masson染色觀察心肌細胞肥大程度及心肌間質(zhì)膠原沉積情況； RT-PCR法檢測心肌組織ANP、β-MHC、Procollagen I、TGF-β等心肌肥厚、纖維化相關(guān)生物標志物的mRNA表達。 結(jié)果： 1低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對大鼠LVW/BW的影響：藥物治療結(jié)束，各組大鼠體重無明顯差別。左心室質(zhì)量指數(shù)（LVW/BW）可用來反映由于壓力超負荷所致心肌肥厚。和假手術(shù)組相比，模型組左心室質(zhì)量指數(shù)明顯增大（p 0.01）。與模型組相比，單用Ir使左心室質(zhì)量指數(shù)有所下降，但無明顯差異；低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用均可降低左心室質(zhì)量指數(shù)（p 0.01），但低劑量與高劑量之間無明顯差別。提示低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用可降低壓力超負荷所致左心室質(zhì)量指數(shù)的增加，且其作用與常規(guī)劑量Sp相當。 2低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對大鼠超聲心動圖參數(shù)的影響：腹主動脈狹窄術(shù)后4周動物的室間隔厚度（IVs）、左室后壁厚度（LVPW）均明顯增大，而左室內(nèi)徑（LVd）明顯降低（p 0.05或p 0.01），射血分數(shù)（EF）、短軸縮短率（FS）無明顯改變。說明PAAC引起心肌肥厚，收縮功能尚正常，處于代償階段，模型成功。藥物治療結(jié)束后，各組大鼠的EF及FS基本一致(p均0.05)，提示心臟整體收縮功能尚正常。單用Ir對IVs、LVPW、LVd無明顯影響；低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用均可降低IVs、LVPW，而增大LVd，差異有統(tǒng)計學意義（p 0.05），提示低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用均可降低PAAC所致心肌肥厚，二者作用無明顯差別，低劑量Sp作用與常規(guī)劑量Sp作用相當。 3低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對大鼠血流動力學參數(shù)的影響：模型組收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）均明顯升高，左室舒張末壓（LVEDP）增高及dp/dtmin/LVSP降低(p均0.05)，但dp/dtmax和假手術(shù)組大鼠基本一致，說明腹主動脈狹窄術(shù)后8周大鼠主要表現(xiàn)為左室舒張功能受損，而心臟整體收縮功能正常。此結(jié)果與超聲心動圖所得結(jié)果一致。單用厄貝沙坦治療對SBP、DBP、LVEDP及dp/dtmin/LVSP無明顯影響，但低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用均可降低SBP、DBP，且可拮抗PAAC所致LVEDP的增高及dp/dtmin/LVSP的降低。提示低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用不僅逆轉(zhuǎn)了心肌肥厚，而且改善了左室舒張功能，且低劑量Sp可達到與常規(guī)劑量相似的作用。 4低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對各組大鼠心肌組織的病理改變的影響：HE染色結(jié)果顯示：和假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌細胞橫截面面積明顯增加(p 0.01)。單用Ir對心肌細胞橫截面面積無明顯影響，但Ir聯(lián)合應用低劑量或常規(guī)劑量Sp均明顯降低了心肌細胞橫截面面積(p均0.05)，提示Ir聯(lián)合應用低劑量或常規(guī)劑量Sp治療改善了心肌細胞的肥厚程度，且低劑量Sp可達到與常規(guī)劑量相似的作用。Masson染色結(jié)果顯示：和假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌間質(zhì)膠原纖維明顯增多，排列紊亂。Ir干預組心肌膠原積聚明顯減輕，排列也趨于規(guī)則。Ir聯(lián)合應用低劑量或常規(guī)劑量Sp較單獨Ir對心肌間質(zhì)纖維化改善程度更加明顯(p均0.05)。提示低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用可降低壓力超負荷所致左心室心肌纖維化，且其作用與常規(guī)劑量Sp相當。 5低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對心肌肥大及纖維化相關(guān)生物標志物的影響：心肌肥厚不僅表現(xiàn)為心肌細胞肥大及間質(zhì)纖維化程度增加，還表現(xiàn)為肥大基因及促纖維化基因的上調(diào)。因此，我們觀察了各組大鼠心肌肥大基因ANP及β-MHC，促纖維化基因procollagen I和TGF-β1的表達情況。結(jié)果表明，腹主動脈狹窄術(shù)后8周大鼠心肌ANP、β-MHC、procollagen I和TGF-β1的表達明顯增強(p均0.01)。單獨應用Ir削弱了左室ANP、β-MHC、procollagen I和TGF-β1mRNA的表達，但統(tǒng)計無顯著差異，，Ir聯(lián)合應用低劑量或常規(guī)劑量Sp (p均0.05)可明顯降低左室ANP、β-MHC、procollagen I和TGF-β1mRNA的表達。提示低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用可抑制壓力超負荷所致左心室心肌肥大基因及促纖維化基因上調(diào)，且其作用與常規(guī)劑量Sp相當。 6低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對血鉀、鈉的影響：應用醛固酮拮抗劑最重要和常見的不良反應就是高血鉀癥，為了比較低劑量或常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用的作用，我們進一步觀察了各組對血鉀、鈉的影響。和對照組相比，常規(guī)劑量Sp與Ir聯(lián)合應用明顯使血鉀濃度增加，但低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對血鉀無明顯影響。各組血鈉均無明顯改變。提示低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用不會引起血鉀增高，此點優(yōu)于常規(guī)劑量Sp。 結(jié)論：低劑量螺內(nèi)酯與厄貝沙坦聯(lián)合應用可改善腹主動脈縮窄所致心肌肥厚、心肌纖維化及心臟舒張功能。此作用與常規(guī)劑量螺內(nèi)酯與厄貝沙坦聯(lián)合應用相似。常規(guī)劑量螺內(nèi)酯與Ir聯(lián)合應用明顯升高血鉀，而低劑量對血鉀無影響。上述實驗結(jié)果表明，低劑量醛固酮受體拮抗劑與ARB合用具有顯著的抗心肌肥厚作用，同時可以降低高血鉀風險。 第二部分低劑量螺內(nèi)酯與厄貝沙坦聯(lián)合應用對大鼠腹主動脈部分縮窄所致氧化應激的影響 目的：觀察低劑量螺內(nèi)酯（Sp）和厄貝沙坦（Ir）聯(lián)合用藥對腹主動脈部分縮窄（PAAC）大鼠心肌組織氧化應激狀態(tài)的影響，探討聯(lián)合用藥改善壓力超負荷所致左室肥厚及舒張功能障礙的潛在藥理機制。 方法：選用雄性SD大鼠，腹主動脈部分縮窄制備心肌肥厚模型。造模4周后進行隨機分組：假手術(shù)組，模型組，厄貝沙坦（15mg/kg/d）組，低劑量螺內(nèi)酯（1mg/kg/d）組，低劑量螺內(nèi)酯（1mg/kg/d）+厄貝沙坦（15mg/kg/d）組。灌胃給藥4周后，生化法測定心肌組織丙二醛（MaleicDialdehyde, MDA）水平。采用光澤精化學增強發(fā)光法測定左室心肌組織的NADPH氧化酶活動度。采用氮藍四唑顯色法法測定心肌組超氧化物歧化酶（SOD）活性。Western blot技術(shù)分析心肌組織NADPH氧化酶（NOX）亞基NOX2、NOX4及SOD亞基SOD-1、SOD-2蛋白表達。 結(jié)果： 1Ir、低劑量Sp和低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對心肌MDA含量的影響:通過測定心肌組織丙二醛（Maleic Dialdehyde, MDA）水平來間接評估心肌組織的氧化應激狀態(tài)。和假手術(shù)組相比，模型組心肌MDA含量明顯增多（p0.01），表明PAAC引起心肌氧化應激損傷。應用Ir單藥或低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用均可降低PAAC所致心肌MDA水平的增加（p0.05或p0.01）。與單藥相比，聯(lián)合用藥進一步降低了心肌的MDA水平（p0.05）。上述結(jié)果提示Ir可顯著改善心肌的氧化應激狀態(tài)，但Ir與低劑量Sp聯(lián)合應用效果更佳。 2Ir、低劑量Sp和低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對心肌NADPH氧化酶活性的影響: NADPH氧化酶為心肌組織中活性氧簇生成的主要酶之一，所以我們觀察了NADPH氧化酶在心肌中的改變。和假手術(shù)組相比，模型組心肌NADPH氧化酶活性明顯增強（p0.01），應用Ir、低劑量Sp單藥或低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用均有降低NADPH氧化酶活性的趨勢，但只有低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用有統(tǒng)計學意義（p0.05）。與單獨應用低劑量Sp相比，聯(lián)合用藥進一步降低了心肌的NADPH氧化酶活性（p0.05）。 3Ir、低劑量Sp和低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對心肌NADPH氧化酶亞型蛋白表達的影響:為了進一步說明NADPH氧化酶活性改變的機制，我們應用免疫印跡的方法觀察心肌NADPH氧化酶亞型NOX2、NOX4的改變。和假手術(shù)組相比，模型組心肌NADPH氧化酶NOX4亞型蛋白表達明顯增多（p0.01），但NOX2亞型無明顯改變。說明PAAC所致心肌氧化應激損傷可能與NADPH氧化酶NOX4亞型表達增加有關(guān)。和模型組相比，單用Ir或低劑量Sp均對NOX4亞型無明顯影響；但低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用顯著降低了NOX4亞型蛋白表達（p0.05）。上述結(jié)果說明Ir與低劑量Sp聯(lián)合應用對NOX4亞型蛋白表達的抑制效果更佳，提示低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用降低PAAC所致心肌氧化應激損傷的機制可能與其對NOX4的影響有關(guān)。 4Ir、低劑量Sp和低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對心肌SOD活性的影響: SOD為一線的活性氧簇清除酶，推測PAAC所致氧化應激與SOD功能失調(diào)有關(guān)。所以我們觀察了SOD在心肌中的改變。和假手術(shù)組相比，模型組心肌SOD活性明顯降低（p0.05）。和模型組相比，單用Ir或低劑量Sp均對SOD活性有增強趨勢，但無統(tǒng)計學差異；而低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用顯著增加SOD活性（p0.05）。 5Ir、低劑量Sp和低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用對心肌SOD亞型蛋白表達的影響:為了進一步說明SOD改變的機制，我們應用免疫印跡的方法觀察心肌SOD亞型SOD-1、SOD-2的改變。PAAC使心肌SOD-2蛋白表達明顯減少（p0.01），但SOD-1無明顯改變。單用Ir或低劑量Sp均對SOD-2表達有增強趨勢，但無統(tǒng)計學差異；而低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用則顯著增加SOD-2表達（p0.05）。上述結(jié)果說明Ir與低劑量Sp聯(lián)合應用對SOD-2蛋白表達的增強效果更佳，提示低劑量Sp與Ir聯(lián)合應用降低PAAC所致心肌氧化應激損傷的機制可能與其對SOD-2的影響有關(guān)。 結(jié)論： 1腹主動脈縮窄引起大鼠心肌組織MDA含量增高，NADPH氧化酶活性及NOX4亞基表達增強，SOD活性降低及SOD-2亞基表達降低，提示NADPH氧化酶和SOD介導的氧化應激參與了PAAC大鼠心肌肥厚和心臟舒張功能失調(diào)的進程。 2低劑量螺內(nèi)酯與厄貝沙坦聯(lián)合應用可降低PAAC所致心肌氧化應激損傷，其可能是通過抑制NADPH氧化酶和增強SOD活性而發(fā)揮作用。 第三部分Nrf2轉(zhuǎn)錄因子在醛固酮所致小鼠心肌肥厚中的調(diào)控作用 目的：為進一步深入探討醛固酮致心肌肥厚的機制，本研究擬采用Nrf2基因敲除小鼠，觀察核因子NF-E2相關(guān)因子(nuclear factor erythroid2-related factor2，Nrf2)在外源性醛固酮誘導心肌肥厚中的調(diào)控作用。 方法：實驗中Nrf2+/+、Nrf2-/-ICR小鼠有河北醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科李春巖院士惠贈。對所用動物的基因型進行從DNA水平、mRNA水平、蛋白水平進行鑒定。選用健康雄性Nrf2+/+、Nrf2-/-小鼠，按體重隨機分為四組，分別為：Nrf2+/+對照組、Nrf2+/+醛固酮組、Nrf2-/-對照組、Nrf2-/-醛固酮組。醛固酮組小鼠采用皮下植泵方式給藥，醛固酮用量為1mg/kg/day，連續(xù)給藥28天。對照組進行假手術(shù)。應用小動物超聲影像系統(tǒng)（707B，30Hz）對心臟進行超聲測定心室壁厚度及心臟收縮功能。碘[125I]醛固酮放射免疫分析藥盒放射免疫γ計數(shù)器測定各組小鼠血中醛固酮的濃度。計算心臟質(zhì)量指數(shù)（心臟重/體重，HW/BW），急性胰酶法消化心肌細胞，負載DCFH-DA染料觀察心肌氧化應激水平。Western blot技術(shù)分析心肌組織Nrf2蛋白表達。RT-PCR法檢測心肌組織Nrf2及其下游抗氧化酶血紅素加氧酶（heme oxygenase， HO-1）,依賴還原型輔酶Ⅰ/Ⅱ:醌氧化還原酶（NAD(P)H:quinone oxidoreductase1，NQO1）的mRNA表達。 結(jié)果： 1Nrf2基因敲除小鼠鑒定結(jié)果：分別從DNA、mRNA、蛋白水平鑒定小鼠基因型。通過鼠尾提取DNA并進行PCR擴增，Nrf2-/-小鼠擴增產(chǎn)物條帶位于400bp左右位置，而野生型（Nrf2+/+）小鼠的PCR擴增產(chǎn)物位于700bp；提取心肌mRNA進行反轉(zhuǎn)錄、擴增，野生型小鼠表達Nrf2mRNA， Nrf2-/-小鼠無Nrf2mRNA表達；提取心肌蛋白進行免疫印跡，野生型小鼠表達Nrf2蛋白，Nrf2-/-小鼠無Nrf2蛋白表達。 2小鼠體內(nèi)醛固酮血藥濃度的測定：Nrf2+/+對照組、Nrf2+/+醛固酮組血藥濃度為0.32±0.07ng/mL，1.79±0.52ng/mL，Nrf2-/-對照組、Nrf2-/-醛固酮組血藥濃度為0.23±0.05ng/mL，1.48±0.44ng/mL，各醛固酮組血藥濃度明顯高于相應對照組（p0.05），表明滲透壓泵可以將醛固酮釋放到小鼠體內(nèi)，使醛固酮在體內(nèi)的含量明顯增加。 3小鼠心臟超聲心動圖改變：各組小鼠的射血分數(shù)（EF）、短軸縮短率（FS）基本一致(p均0.05)，提示心臟整體收縮功能正常。Nrf2+/+對照組、Nrf2-/-對照組的左室舒張末期前壁厚度(LVID)、左室舒張末期后壁厚度(LVPW)、EF、FS等指標相差不大，無明顯統(tǒng)計學差異（p均0.05)。提示基因敲除Nrf2對心臟基本形態(tài)和功能無明顯影響。和相應的對照組相比，醛固酮組LVID、LVPW均明顯增大。與Nrf2+/+醛固酮組相比，Nrf2-/-醛固酮組LVID、LVPW明顯增大（p0.05）。結(jié)果說明醛固酮可引起左室心肌肥厚，敲除Nrf2可加重醛固酮所致心肌肥厚。 4小鼠心臟質(zhì)量指數(shù)的變化：Nrf2+/+對照組、Nrf2+/+醛固酮組心臟質(zhì)量指數(shù)為3.92±0.08，4.34±0.31，Nrf2-/-對照組、Nrf2-/-醛固酮組心臟質(zhì)量指數(shù)為3.91±0.31，4.99±0.17。顯然，與野生型相比，Nrf2基因敲除并不影響心臟質(zhì)量指數(shù)，給予醛固酮后心臟質(zhì)量指數(shù)明顯高于相應對照組（p0.05），表明醛固酮增加心臟重量。與Nrf2+/+醛固酮組相比，Nrf2-/-醛固酮組心臟質(zhì)量指數(shù)明顯增大（p0.05）。提示Nrf2基因敲除可使醛固酮對心臟質(zhì)量指數(shù)的作用增強。 5小鼠心肌肥厚生物標志物ANP、β-MHC mRNA表達變化：與相應的對照組相比，醛固酮可使心肌肥大基因ANP、β-MHC mRNA表達量均明顯增加（p0.01）。與Nrf2+/+醛固酮組相比，Nrf2-/-醛固酮組ANP、β-MHC mRNA表達量增加更為明顯（p0.01）。提示Nrf2基因敲除增強了醛固酮對心肌肥厚生物標志物影響的作用。 6醛固酮對小鼠心肌ROS水平的影響：以上結(jié)果說明醛固酮可引起心肌肥厚，已知氧化應激在心肌肥厚發(fā)展中有重要作用，所以我們利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測進一步觀察了醛固酮對心肌的氧化應激的影響。與相應的對照組相比，Nrf2+/+醛固酮組、Nrf2-/-醛固酮組心肌細胞ROS水平均明顯增加，分別增加約1.7、2.8倍（p0.01）。與Nrf2+/+醛固酮組相比，Nrf2-/-醛固酮組ROS水平均明顯增大（p0.01）。提示醛固酮可引起左室心肌氧化應激損傷，敲除Nrf2可加重醛固酮所致心肌氧化應激損傷。 7醛固酮對野生型小鼠心臟Nrf2的影響：以上結(jié)果說明醛固酮可引起小鼠心肌肥厚、氧化應激增強，且敲除Nrf2可加重醛固酮致心肌肥厚、氧化應激的作用。為了進一步說明Nrf2在醛固酮致心肌肥厚中的作用，我們通過熒光定量PCR、免疫印跡技術(shù)觀察醛固酮對小鼠心臟Nrf2表達的影響。醛固酮使Nrf2mRNA及蛋白水平均明顯增加。提示醛固酮可上調(diào)Nrf2轉(zhuǎn)錄因子的表達，可能醛固酮激活了Nrf2轉(zhuǎn)錄因子及其下游抗氧化酶通路。 8醛固酮對小鼠心臟抗氧化酶HO-1、NQO-1mRNA表達的影響：既然醛固酮可上調(diào)Nrf2轉(zhuǎn)錄因子的表達，那么醛固酮對Nrf2的下游抗氧化基因有無影響？所以我們進一步觀察醛固酮對Nrf2的下游抗氧化酶HO-1、NQO-1mRNA表達的影響。結(jié)果表明，醛固酮使心肌HO-1、NQO-1mRNA表達明顯增加,但敲除Nrf2-/-后，醛固酮不會引起使HO-1、NQO-1mRNA表達增加，而使NQO-1mRNA表達明顯降低。提示醛固酮可通過Nrf2上調(diào)抗氧化酶HO-1、NQO-1的表達，從而抑制醛固酮所致心肌氧化應激損傷及心肌肥厚。 結(jié)論：敲除Nrf2基因可加重醛固酮所致小鼠心肌肥厚，提示Nrf2參與了醛固酮所致心肌肥厚的調(diào)控作用。醛固酮上調(diào)心肌Nrf2轉(zhuǎn)錄因子，改變其下游抗氧化酶表達，提示醛固酮在致心肌肥厚的同時亦啟動Nrf2-抗氧化酶通路，該通路對心肌肥厚發(fā)揮抑制作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R965

【參考文獻】

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10 楊大春;張鑫;楊永健;肖貞良;;醛固酮介導心肌成纖維細胞增殖的機制研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2007年14期

本文編號：1973675