本文選題：納米硒 + 雄性大鼠�。� 參考：《浙江大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：本課題應(yīng)用納米技術(shù)成功構(gòu)建了以殼聚糖為模板的硒納米微粒(SeNPs),并通過TEM、AFM、SEM、紅外光譜等各種技術(shù)手段對(duì)其進(jìn)行表征,證實(shí)制備得到了平均粒徑為79.88 nm,表面電荷為+29 mV的分布均勻、大小較一致的近圓形的較為穩(wěn)定的納米顆粒。在此基礎(chǔ)上,應(yīng)用制備得到的納米硒,以雄性SD大鼠為試驗(yàn)動(dòng)物,通過活體灌胃、肝細(xì)胞培養(yǎng)等三個(gè)試驗(yàn),研究了SeNPs對(duì)雄性大鼠抗氧化、生殖功能的影響及毒性機(jī)理。初步探討超營(yíng)養(yǎng)劑量即高于營(yíng)養(yǎng)劑量的SeNPs的添加對(duì)雄性大鼠抗氧化和生殖功能的影響,篩選出最優(yōu)的添加劑量。并在毒性劑量下研究SeNPs在體內(nèi)的生物學(xué)效應(yīng)和作用靶器官,通過細(xì)胞活性測(cè)定、流式細(xì)胞凋亡和相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)水平等手段檢測(cè)SeNPs對(duì)體外培養(yǎng)肝細(xì)胞的毒性作用機(jī)理,為SeNPs的臨床和生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論參考。試驗(yàn)一：選擇40只5周齡的健康雄性SD大鼠,分4組,分別灌服0、0.2、0.4、0.8 mg/kgBW SeNPs,每天一次,連續(xù)灌胃兩周,試驗(yàn)結(jié)束后麻醉處死,取相關(guān)樣品進(jìn)行分析檢測(cè)。結(jié)果表明：(1)灌胃超營(yíng)養(yǎng)劑量的SeNPs兩周后,0.2、0.4 mg/kg BW的SeNPs促進(jìn)了大鼠的生長(zhǎng),而08mg/kg BW的SeNPs對(duì)體重沒有產(chǎn)生顯著影響。(2) 0.2、0.4、0.8 mg/kgBW SeNPs灌胃處理組的IgG水平均較對(duì)照組顯著升高。0.8mg/kgBW SeNPs處理組的IgM水平較對(duì)照組有顯著升高。04 mg/kgSeNPs組的C3、IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ均較對(duì)照組有顯著升高,08 mg/kgSeNPs組的C3、C4和IL-2也較對(duì)照組有顯著升高。因此三個(gè)劑量SeNPs對(duì)大鼠的免疫功能均有不同程度的促進(jìn)作用,且以04 mg/kg SeNPs組最為顯著。(3) 0.2、0.4、0.8 mg/kgBW SeNPs處理均顯著提高了血清中RT3、FT3的水平,而對(duì)血清中FT4和TSH的水平?jīng)]有顯著影響。此結(jié)果揭示了在超營(yíng)養(yǎng)劑量下,SeNPs對(duì)于甲狀腺功能有促進(jìn)作用。(4)對(duì)血清中抗氧化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果顯示,0.8 mg/kg劑量組的T-GSH值較對(duì)照組顯著升高,0.2、0.4 mg/kg劑量組H2O2的值較對(duì)照組顯著降低,而三個(gè)劑量組其他指標(biāo)沒有顯著影響。本研究結(jié)果揭示了在超營(yíng)養(yǎng)水平下,SeNPs對(duì)血清的抗氧化能力提高的程度不太明顯,但有改善的趨勢(shì),且有劑量依賴性。而對(duì)不同組織中抗氧化功能的檢測(cè)結(jié)果顯示,灌胃超營(yíng)養(yǎng)劑量的SeNPs使肝臟和腎臟的抗氧化能力有所提高,且提高的幅度以腎臟較為明顯,而對(duì)于心臟和睪丸的影響較小,因此,納米硒對(duì)于各組織臟器的抗氧化反應(yīng)具有組織差異性。(5)0.8mg/kgBW劑量組肺臟的濕重較對(duì)照組有顯著升高,且肺臟指數(shù)也較對(duì)照組顯著升高；其他各臟器指數(shù)與對(duì)照組均無顯著差異�？梢酝茰y(cè)0.8mg/kgBW SeNPs對(duì)于肺臟產(chǎn)生了一定的毒性作用。(6)對(duì)大鼠繁殖性能的研究結(jié)果顯示,0.2、04 mg/kgBW SeNPs組血清中睪酮含量較對(duì)照組沒有顯著差異,而0.8 mg/kgBW SeNPs處理組較對(duì)照組顯著升高,說明其促進(jìn)了睪酮的分泌。三個(gè)劑量組的SeNPs對(duì)于睪丸組織中LDH、ACP、AKP酶的活性均沒有產(chǎn)生顯著的影響。對(duì)精子活力和精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)的檢測(cè)結(jié)果顯示,0.8 mg/kgBW SeNPs以下的處理劑量對(duì)于精子的活力和運(yùn)動(dòng)力有很好的促進(jìn)作用。(7) 0.2、0.4、0.8mg/kg灌胃劑量的SeNPs使肝臟中GPX1和GPX4的mRNA表達(dá)量均較對(duì)照組極顯著升高,但對(duì)睪丸中GPX1和GPX4的基因表達(dá)沒有顯著影響,說明SeNPs對(duì)不同器官組織的作用存在組織差異。試驗(yàn)二：選擇40只6周齡的健康雄性SD大鼠,分4組,分別灌服0、2.0、4.0、8.0 mg/kgBW SeNPs,每天一次,連續(xù)灌胃兩周,試驗(yàn)結(jié)束后麻醉處死,取相關(guān)樣品進(jìn)行分析檢測(cè)。結(jié)果顯示：(1)灌胃毒性劑量的SeNPs兩周后,2.0、4.0、8.0 mg/kgBW的SeNPs均顯著抑制了大鼠的生長(zhǎng),而且血清中肝功能指標(biāo)顯著升高,顯示三個(gè)劑量均對(duì)大鼠產(chǎn)生了一定的毒性作用,且對(duì)肝臟造成了一定程度的損傷。(2)灌胃2.0、4.0、8.0 mg/kgBW的SeNPs兩周,對(duì)大鼠的甲狀腺功能沒有顯著性影響,4、8 mg/kgBW的SeNPs使外周血T淋巴細(xì)胞和脾臟T淋巴細(xì)胞增殖顯著降低,即4.0、8.0 mg/kgBW的SeNPs使大鼠免疫功能受損,而2.0mg/kgBW的SeNPs則使血清中IgM、IgG、IL-6均有顯著升高。(3)灌胃8.0mg/kgBW劑量的SeNPs使血清、肝臟、腎臟、心臟和暈丸組織的抗氧化能力明顯降低,4.0 mg/kgBW劑量的SeNPs也使血清、肝臟、心臟的抗氧化功能受到不同程度損傷,抗氧化能力降低,體內(nèi)的過氧化產(chǎn)物升高。并且從抗氧化指標(biāo)來看,大鼠的睪丸組織較其他組織對(duì)于過量的SeNPs的耐受性稍強(qiáng),其次是腎臟、心臟。肝臟對(duì)于SeNPs的毒性最敏感。(4)對(duì)臟器指數(shù)的檢查結(jié)果顯示：在8mg/kgBW處理組的毒性劑量下肝臟、腎臟、肺臟和脾臟指數(shù)均較對(duì)照組顯著升高,而心臟指數(shù)、睪丸指數(shù)和胸腺指數(shù)則較對(duì)照組顯著降低,2mg/kgBW處理劑量下的肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)也較對(duì)照組顯著升高,4 mg/kgBW處理劑量下的腎臟指數(shù)顯著升高,而胸腺指數(shù)顯著降低。對(duì)臟器組織的病理檢查結(jié)果顯示：在8 mg/kgBW處理組的毒性劑量下,肝臟出現(xiàn)細(xì)胞壞死、崩解,肝竇內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,有少量淋巴細(xì)胞樣細(xì)胞浸潤(rùn)；腎臟中腎小球萎縮并且有漸進(jìn)性細(xì)胞壞死的發(fā)生；肺泡內(nèi)有充血,且支氣管腔上皮內(nèi)膜增厚；胸腺的髓質(zhì)和皮質(zhì)界限不清晰,以及有炎癥細(xì)胞的大量浸潤(rùn)；睪丸組織中曲細(xì)精管大部分退化萎縮,曲細(xì)精管管壁明顯變薄甚至破裂,細(xì)胞層次減少,生精小管直徑變小,各級(jí)生精細(xì)胞排列紊亂甚至缺失。2、4 mg/kgBW處理組的組織病理圖片較對(duì)照組沒有顯著變化。對(duì)肝臟和睪丸的電鏡檢查發(fā)現(xiàn),8mg/kgBW處理組的肝臟和睪丸細(xì)胞的細(xì)胞間界限模糊,細(xì)胞核變形,細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)濃染、邊聚,呈現(xiàn)細(xì)胞凋亡的形態(tài)。利用TUNEL法檢測(cè)肝細(xì)胞的凋亡指數(shù),結(jié)果顯示2、4、8 mg/kg BW SeNPs處理組的凋亡細(xì)胞明顯較對(duì)照組多,且4、8 mg/kg BW SeNPs處理組的凋亡指數(shù)較對(duì)照組均有極顯著的升高。(5)對(duì)精子質(zhì)量的檢查發(fā)現(xiàn),精子的各項(xiàng)運(yùn)動(dòng)參數(shù)有不同程度降低,但顯著提高了睪丸組織中GPX1和GPX4的基因表達(dá)量。試驗(yàn)三：以01、0.5、1.0、12.0、24.0.48.0μM六個(gè)不同濃度的SeNPs對(duì)BRL細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),結(jié)果顯示：(1)0.1、0.5、1.0、12.0μM濃度處理組的SeNPs對(duì)細(xì)胞活性有促進(jìn)作用,而超過24.0μM濃度的SeNPs則對(duì)細(xì)胞活性有損害。(2)不同濃度SeNPs對(duì)細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),0.1、0.5、1、12μM濃度處理組的GSH-Px、SOD、T-AOC的值均較對(duì)照組有不同程度的升高,而超過24μM濃度的SeNPs使細(xì)胞內(nèi)的GSH-Px和T-AOC的值顯著降低,MDA的值顯著升高。即大于24μM濃度的SeNPs對(duì)細(xì)胞內(nèi)的抗氧化活性有損害。(3)進(jìn)一步研究不同水平SeNPs對(duì)細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果顯示,24.0μM和48.0μM濃度的SeNPs顯著提高了BRL細(xì)胞的早期凋亡和晚期凋亡率,使與誘導(dǎo)凋亡的關(guān)鍵蛋白Caspase3和Caspase8的活性顯著升高,而對(duì)P53的基因表達(dá)水平?jīng)]有顯著影響。綜合上述研究結(jié)果得出：0.2和0.4 mg/kg劑量的SeNPs對(duì)大鼠的生長(zhǎng)、免疫、甲狀腺功能以及抗氧化功能有不同程度的促進(jìn)作用,顯著提高了雄性大鼠的生殖功能,其中以0.4mg/kgBW劑量最為顯著,肝臟中GPXl和GPX4的基因表達(dá)顯著上升；而灌胃2.0、4.0、8.0 mg/kgBW的SeNPs對(duì)大鼠生長(zhǎng)有抑制作用,免疫功能和甲狀腺功能受損,抗氧化能力也有不同程度降低,8.0mg/kgBW的SeNPs肝臟、腎臟、肺、胸腺和睪丸組織都產(chǎn)生了不同程度的病理?yè)p傷,且能誘導(dǎo)肝臟細(xì)胞的凋亡,精子的各項(xiàng)運(yùn)動(dòng)參數(shù)也有不同程度降低。對(duì)于肝細(xì)胞培養(yǎng)的研究發(fā)現(xiàn),SeNPs可能是通過誘導(dǎo)凋亡的關(guān)鍵蛋白Caspase3和Caspase8的表達(dá)的途徑來誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡的。
[Abstract]:In this study , the effects of Se on the antioxidation and reproductive function of male rats were studied by means of TEM , AFM , SEM and IR spectra . ( 2 ) The levels of anti - oxidation in serum were significantly higher than those in the control group . The results showed that the levels of anti - oxidation in serum were significantly higher than those in the control group . The results showed that the levels of anti - oxidation in serum were significantly higher than those in the control group .
There was no significant difference in the expression of GPX1 and GPX4 in the liver . The results showed that the activity of GPX1 and GPX4 in the liver was significantly higher than that in the control group . The results showed that the liver , kidney , lung and spleen index of liver , kidney , lung and spleen increased significantly at the dose of 8 mg / kg BW , while the index of heart index , testis index and thymus index were significantly lower than those in the control group .
Renal glomerulus atrophy and progressive cell necrosis occurs ;
There was congestion in the alveolus , and the endobronchial epithelium was thickened ;
The medulla and the cortex of thymus were not clear , and there were a lot of infiltration of inflammatory cells .
The results showed that the levels of GSH - Px , SOD and T - AOC in the treated group were significantly higher than those in the control group . The results showed that the activity of GSH - Px , SOD and T - AOC in the treated group was significantly higher than that in the control group .
In the study of liver cell culture , the expression of Caspase - 3 and Caspase8 in the liver , kidney , lung , thymus and testis in the liver , kidney , lung , thymus and testis of rats with 8.0 mg / kg BW decreased significantly .

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：S859.82

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 徐卓立，郭軍華，王德文，，吳德政;金屬硫蛋白水平與順鉑所致腎臟病理改變的相關(guān)性研究[J];癌癥;1995年06期

2 侯少范,李德珠,王麗珍,王五一,譚見安;我國(guó)土壤中結(jié)合態(tài)硒的含量和分布規(guī)律[J];地理研究;1990年04期

3 王秀娜;耿忠誠(chéng);武志敏;王燕;張繼波;;不同硒源對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能及體液免疫指標(biāo)的影響[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào);2010年01期

4 胡濱;陳一資;;亞硒酸鈉的急性、蓄積性、亞急性毒性研究[J];食品科學(xué);2011年05期

5 張志耘,胡志潔;微量元素硒多種拮抗作用研究進(jìn)展[J];天津藥學(xué);2001年04期

6 袁施彬;余冰;陳代文;;硒添加水平對(duì)氧化應(yīng)激仔豬生產(chǎn)性能和免疫功能影響的研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2008年05期

7 高學(xué)云,張勁松,張立德,朱茂祥,楊陟華;納米紅色元素硒抑制腫瘤和提高免疫功能的作用[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2003年03期

8 楊林生，侯少范，李德珠;硒酵母中硒的化學(xué)形態(tài)分析與評(píng)價(jià)[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;1995年11期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 胡華鋒;硒在土壤—苜蓿—飼料—蛋雞系統(tǒng)中的遷移效應(yīng)及其機(jī)理研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 袁施彬;仔豬氧化應(yīng)激及硒的抗應(yīng)激效應(yīng)和機(jī)理的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

3 彭西;日糧硒對(duì)雛雞免疫功能影響的機(jī)理研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

本文編號(hào)：1739507