本文選題：氯胺酮　切入點(diǎn)：原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：全世界每年有150萬嬰幼兒因需進(jìn)行外科手術(shù)或介入治療等原因而接受全身麻醉，長期以來全身麻醉藥是否影響嬰幼兒的大腦發(fā)育一直是患兒家屬及麻醉學(xué)者十分關(guān)注的問題。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為只要麻醉過程中不存在大腦缺氧等因素就不會(huì)影響嬰幼兒大腦的發(fā)育，但近年來大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明全身麻醉藥可對發(fā)育期大腦產(chǎn)生損傷，并引起遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶損傷。因此全身麻醉藥的發(fā)育期神經(jīng)毒性已引起了眾多學(xué)者的關(guān)注。 氯胺酮為N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate, NMDA)受體拮抗劑，被廣泛應(yīng)用于嬰幼兒手術(shù)的麻醉。NMDA受體是一種離子通道型谷氨酸能受體，具有許多不同變構(gòu)調(diào)控位點(diǎn)并對Ca2+高度通透，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要分布在大腦皮層及海馬。研究發(fā)現(xiàn)NMDA受體與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育密切相關(guān)，控制神經(jīng)元的分化、遷移和存活，并在學(xué)習(xí)、記憶的形成和維持過程中發(fā)揮著重要作用。動(dòng)物出生前后時(shí)間階段是中樞神經(jīng)系統(tǒng)生長發(fā)育的高峰期，有大量神經(jīng)細(xì)胞增殖、大量樹突生成和大量突觸連接形成，進(jìn)而形成復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。許多研究已證實(shí)在大腦發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期NMDA受體保持適度興奮對大腦神經(jīng)元的存活具有重要的意義，如果改變NMDA受體的活性可能會(huì)影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能。 目前大量研究發(fā)現(xiàn)氯胺酮可引起發(fā)育期動(dòng)物大腦廣泛腦區(qū)神經(jīng)元的凋亡，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)氯胺酮可引起原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元的大量凋亡。關(guān)于氯胺酮引起發(fā)育期大腦神經(jīng)元凋亡與神經(jīng)功能損害的確切機(jī)制目前還不清楚。既往研究表明在大鼠大腦快速發(fā)育期注射氯胺酮會(huì)導(dǎo)致皮層組織的NMDA受體表達(dá)上調(diào)，引起神經(jīng)元興奮性毒性增加。此外，氯胺酮作為NMDA受體的非競爭性拮抗劑，可以通過作用于NMDA受體PCP結(jié)合位點(diǎn)，阻斷與NMDA受體耦聯(lián)的鈣通道，減少Ca2+內(nèi)流，降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，從而拮抗谷氨酸、天冬氨酸等興奮性氨基酸對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的調(diào)節(jié)。目前有研究認(rèn)為氯胺酮通過抑制神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣震蕩而對發(fā)育期神經(jīng)元產(chǎn)生神經(jīng)毒性。 針對全身麻醉藥引起的發(fā)育期大腦損傷，NIH、FDA以及IARS要求研究學(xué)者不僅要研究其發(fā)生機(jī)制而且要尋找安全有效的措施來防治麻醉藥所引起的發(fā)育期大腦損傷。近年來國內(nèi)外學(xué)者對如何防治氯胺酮引起的發(fā)育期大腦損傷進(jìn)行了一系列研究，結(jié)果表明維生素D3、鋰劑、促紅細(xì)胞生成素、肉毒堿、煙酰胺、可樂定等可對氯胺酮引起的發(fā)育期神經(jīng)元損傷產(chǎn)生保護(hù)作用，但它們在嬰幼兒時(shí)期應(yīng)用的安全性還有待于進(jìn)一步研究。 神經(jīng)甾體（neurosteroid）是一類由神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞合成、代謝產(chǎn)生的具有神經(jīng)活性的甾體物質(zhì)的總稱，主要包括：孕烯醇酮（pregnenolone，PREG）、孕烯醇酮硫酸酯（pregnenolone sulfate，PREGS）、脫氫表雄酮（dehydroepiandrosterone，DHEA）、脫氫表雄酮硫酸酯（dehydroepiandrosterone sulfate，DHEAS）、孕酮（progesterone，PROG）、別孕烯醇酮（allopregnanolone，AP）以及雌二醇（estradiol，E2）等。大量研究表明神經(jīng)甾體不僅參與調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育并對神經(jīng)系統(tǒng)的功能產(chǎn)生廣泛影響，對神經(jīng)系統(tǒng)還具有營養(yǎng)保護(hù)以及促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生和神經(jīng)元存活的作用。 雌二醇作為一種內(nèi)源性神經(jīng)甾體，在神經(jīng)元發(fā)育過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，促進(jìn)神經(jīng)元的存活以及功能維護(hù)。最近有研究表明氯胺酮可引起斑馬魚發(fā)育期17β雌二醇水平的下降，睪酮水平升高，同時(shí)還有研究表明氯胺酮對發(fā)育期斑馬魚具有神經(jīng)損傷作用。PI3K-Akt信號通路是介導(dǎo)多種生長因子促進(jìn)細(xì)胞存活的重要通路，有研究表明氯胺酮通過抑制NMDA受體的活性進(jìn)而抑制pAkt的表達(dá)對原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元產(chǎn)生損傷。有研究表明17β雌二醇可通過激活PI3K-Akt信號通路對NMDA受體拮抗劑MK-801以及麻醉藥咪達(dá)唑侖、笑氣、異氟醚聯(lián)合應(yīng)用所引起的發(fā)育期大鼠大腦廣泛腦區(qū)神經(jīng)元凋亡產(chǎn)生保護(hù)作用。另外Ramezani等研究表明17β雌二醇可對酒精引起的發(fā)育期大鼠大腦神經(jīng)損傷以及遠(yuǎn)期行為學(xué)異常產(chǎn)生保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)Aβ25-35對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元產(chǎn)生損傷時(shí)伴隨神經(jīng)甾體代謝通路的變化。氯胺酮引起發(fā)育期皮層神經(jīng)元損傷的同時(shí)是否伴隨神經(jīng)甾體合成代謝的變化，以及神經(jīng)活性甾體17β雌二醇是否通過PI3K-Akt信號通路對氯胺酮引起的皮層神經(jīng)元損傷產(chǎn)生保護(hù)作用，國內(nèi)外未見報(bào)道。 本課題首先以原代培養(yǎng)的大鼠皮層神經(jīng)元為研究對象采用不同濃度的氯胺酮建立氯胺酮體外誘導(dǎo)皮層神經(jīng)元損傷的細(xì)胞模型。在該模型的基礎(chǔ)上采用液液萃取結(jié)合高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS/MS）方法對氯胺酮引起皮層神經(jīng)元損傷時(shí)主要神經(jīng)甾體PREG、PROG以及17β雌二醇合成代謝水平進(jìn)行了研究。隨后以氯胺酮損傷皮層神經(jīng)元時(shí)合成代謝水平明顯降低的17β雌二醇進(jìn)行外源性給藥，從離體細(xì)胞和在體動(dòng)物兩方面研究17β雌二醇對氯胺酮誘導(dǎo)的原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元損傷以及發(fā)育期大鼠皮層區(qū)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。最后應(yīng)用原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元進(jìn)一步研究17β雌二醇是否通過PI3K-Akt信號通路保護(hù)發(fā)育期皮層神經(jīng)元免受氯胺酮的損傷。本實(shí)驗(yàn)將為神經(jīng)活性甾體17β雌二醇防治氯胺酮引起的發(fā)育期大腦損傷提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 本研究采用的試驗(yàn)方法包括： 1大鼠大腦皮層神經(jīng)元的原代培養(yǎng) 大鼠大腦皮層神經(jīng)元進(jìn)行原代培養(yǎng)7天用于實(shí)驗(yàn)。倒置顯微鏡下觀察皮層神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化。 2分組與藥物處理 ①觀察氯胺酮對神經(jīng)元的損傷作用時(shí)分為：不同濃度氯胺酮（0、1、10、100、1000μΜ）作用神經(jīng)元24h100μΜ氯胺酮作用神經(jīng)元不同時(shí)間（0、6、12、24、48h） ②觀察氯胺酮對神經(jīng)元神經(jīng)甾體合成的影響分為：對照組、氯胺酮組、膽固醇組、氯胺酮+膽固醇組 ③觀察17β雌二醇對氯胺酮誘導(dǎo)皮層神經(jīng)元凋亡的影響分為：對照組，氯胺酮組，17β雌二醇+氯胺酮組 ④觀察17β雌二醇對氯胺酮引起發(fā)育期大鼠大腦皮層區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡和遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶損傷的影響分為：對照組，溶劑對照組，17β雌二醇組，氯胺酮組，17β雌二醇+氯胺酮組 ⑤研究17β雌二醇保護(hù)原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元免受氯胺酮損傷的機(jī)制分為： 對照組，氯胺酮組，17β雌二醇+氯胺酮組，17β雌二醇+氯胺酮+LY294002組 3細(xì)胞樣品的收集與蛋白定量 給予各種藥物處理的皮層神經(jīng)元，加入細(xì)胞裂解液，低溫離心收集上清，應(yīng)用多功能酶標(biāo)儀測定蛋白質(zhì)濃度。 4MTT法測定皮層神經(jīng)元的存活率 5Hoechst33258核染色法檢測神經(jīng)元凋亡 在熒光顯微鏡下，隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和計(jì)數(shù)，計(jì)算凋亡率，凋亡率=（凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)）×100%。 6TUNEL法檢測原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元凋亡 細(xì)胞爬片于倒置顯微鏡下任意選取5個(gè)視野觀察陽性細(xì)胞并計(jì)數(shù)，計(jì)算神經(jīng)元的凋亡率，凋亡率=（凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)）×100%。 7免疫組織化學(xué)染色分析大腦皮層區(qū)cleaved-caspase-3表達(dá)： 以細(xì)胞中出現(xiàn)棕褐色濃染顆粒作為陽性細(xì)胞的判定標(biāo)準(zhǔn)。在光鏡下觀察皮層區(qū)的凋亡神經(jīng)細(xì)胞，以個(gè)/0.01mm2計(jì)數(shù)。 8Western-blot法檢測p-Akt、Akt、cleaved-caspase-3、Bcl-2的蛋白表達(dá) 9HPLC-MS/MS測定細(xì)胞培養(yǎng)液中主要神經(jīng)甾體的濃度 10Morris水迷宮行為學(xué)測試 11統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，水迷宮行為學(xué)測試中定位航行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用重復(fù)測量方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，其他數(shù)據(jù)采用單因素方差分析（one way ANOVA）繼以LSD post hoc test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1氯胺酮對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元的損傷作用 1.1氯胺酮呈濃度和時(shí)間依賴性降低原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元存活率 不同濃度的氯胺酮作用于體外培養(yǎng)7天的皮層神經(jīng)元24h后，神經(jīng)元存活率下降，其中100、1000μΜ的氯胺酮使神經(jīng)元存活率顯著下降（P0.01，P0.01）。100μΜ氯胺酮作用于神經(jīng)元不同時(shí)間后神經(jīng)元存活率下降，其中作用24h及48h后，神經(jīng)元存活率顯著下降（P0.05，P0.01）。 1.2氯胺酮損傷大鼠皮層神經(jīng)元時(shí)的細(xì)胞形態(tài)變化 倒置顯微鏡下觀察剛種植的皮層神經(jīng)元呈圓形，單個(gè)均勻分布，折光性強(qiáng)，胞體透亮，接種8h后細(xì)胞貼壁，24h后細(xì)胞貼壁牢固并可見短小的突起，胞體呈梭型或雛形，第三天后神經(jīng)元胞體進(jìn)一步增大，部分細(xì)胞突起延長，神經(jīng)元培養(yǎng)至第7天，胞體進(jìn)一步增大，多呈梭型或雛形，胞體飽滿，部分神經(jīng)元集聚成團(tuán)，突起增多并延長，相互交織形成網(wǎng)絡(luò)。培養(yǎng)7天的神經(jīng)元經(jīng)100μΜ氯胺酮處理24h后，神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量較對照組明顯減少，折光性差，胞體明顯縮小，軸突斷裂，部分神經(jīng)元細(xì)胞膜破裂成細(xì)胞碎片。 1.3氯胺酮對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元凋亡的影響 TUNEL結(jié)果顯示，對照組僅見少量的TUNEL陽性神經(jīng)元，100μΜ氯胺酮組TUNEL陽性神經(jīng)元較對照組顯著增加（P0.01）。Hoechst33258熒光染色結(jié)果顯示，對照組細(xì)胞核內(nèi)呈均勻分布的淡藍(lán)色熒光，內(nèi)有較深的藍(lán)色顆粒，有少量凋亡細(xì)胞呈亮藍(lán)色。100μΜ氯胺酮組皮層神經(jīng)元染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化，細(xì)胞核甚至裂解為碎塊，有大量凋亡細(xì)胞呈亮藍(lán)色(P0.01)。 2氯胺酮對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元神經(jīng)甾體水平的影響 2.1不同處理對皮層神經(jīng)元存活率的影響 MTT結(jié)果顯示，與對照組比較，氯胺酮組皮層神經(jīng)元的存活率顯著下降（P0.01），膽固醇單純處理組神經(jīng)元存活率未見顯著改變（P0.05）。與氯胺酮組比較，膽固醇與氯胺酮共處理組神經(jīng)元存活率顯著升高（P0.01）。 2.2不同處理對神經(jīng)元凋亡的影響 TUNEL結(jié)果顯示，與對照組比較，膽固醇單純處理組TUNEL陽性神經(jīng)元未見顯著變化（P＞0.05），氯胺酮組TUNEL陽性神經(jīng)元顯著增加（P0.01）。與氯胺酮比較，膽固醇與氯胺酮共處理組TUNEL陽性神經(jīng)元顯著降低（P0.01）；Hoechst33258熒光染色結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了以上變化。 2.3氯胺酮對皮層神經(jīng)元神經(jīng)甾體水平的影響 對照組及氯胺酮處理組因未加入神經(jīng)甾體合成所必需的底物膽固醇，均未測得各種神經(jīng)甾體。與膽固醇單純處理組相比，氯胺酮共處理后神經(jīng)甾體PREG水平未見顯著變化，而17β雌二醇水平顯著下降(P0.01)，PROG水平顯著升高（P＞0.05）。 317β雌二醇對氯胺酮誘導(dǎo)的發(fā)育期皮層神經(jīng)元凋亡以及發(fā)育期大鼠遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶損傷的影響 3.117β雌二醇對氯胺酮導(dǎo)致的原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元損傷的影響 MTT結(jié)果顯示，與對照組比較,氯胺酮組原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元存活率顯著下降（P0.01）；與氯胺酮組比較，不同濃度（0.001、0.01、0.1、1μΜ）的17β雌二醇與氯胺酮共處理24h后神經(jīng)元的存活率顯著升高，其存活率分別為(54.8±5.1)%，(75.1±9.3)%，(88.3±8.5)%，(79.5±10.3)%，其中0.1μM的17β雌二醇保護(hù)效果最好。 3.217β雌二醇減輕氯胺酮誘導(dǎo)的原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元凋亡 TUNEL結(jié)果顯示，對照組可見少量的凋亡神經(jīng)元，氯胺酮組神經(jīng)元凋亡較對照組顯著增加（P0.01），0.1μM的17β雌二醇使氯胺酮導(dǎo)致的神經(jīng)元凋亡顯著降低（P0.01）。Hoechst33258核染色法進(jìn)一步證實(shí)了17β雌二醇減輕氯胺酮誘導(dǎo)的皮層神經(jīng)元凋亡。對照組細(xì)胞核多呈彌散均勻分布的淡藍(lán)色熒光，內(nèi)有較深的藍(lán)色顆粒，，有少量的凋亡細(xì)胞呈亮藍(lán)色。氯胺酮組凋亡細(xì)胞較對照組顯著增加(P0.01)，17β雌二醇與氯胺酮共處理組神經(jīng)元凋亡較氯胺酮組顯著降低（P0.01）。 3.3不同處理對發(fā)育期大鼠大腦額葉皮層區(qū)cleaved-caspase-3表達(dá)的影響 與對照組比較，溶劑對照組和17β雌二醇組cleaved-caspase-3陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)/0.01mm2未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均為P0.05），氯胺酮組陽性表達(dá)顯著增加（P0.01）。與氯胺酮組比較，17β雌二醇與氯胺酮共處理組陽性表達(dá)顯著降低（P0.01）。 3.4Morris水迷宮測試SD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力 SD幼鼠飼養(yǎng)至60天時(shí)，進(jìn)行Morris水迷宮5天訓(xùn)練，一天四次。把SD大鼠逃逸潛伏期（s）和游泳距離（cm）作為學(xué)習(xí)能力的指標(biāo)。在5天的訓(xùn)練期中，前2天實(shí)驗(yàn)各組逃逸潛伏期和游泳距離未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與對照組比較，氯胺酮組第3天、第4天、第5天逃逸潛伏期和游泳距離均顯著增加（均為P0.01），與氯胺酮組比較，17β雌二醇與氯胺酮共處理組逃逸潛伏期和游泳距離均顯著降低（均為P0.01）；第6天撤去平臺，進(jìn)行60s空間探索試驗(yàn)作為對記憶能力的評估。與對照組比較，氯胺酮組穿越平臺的次數(shù)和靶象限的時(shí)間比率均顯著減少（均為P0.01），與氯胺酮組比較，17β雌二醇與氯胺酮共處理組穿越平臺的次數(shù)和靶象限的時(shí)間比率均顯著增加（均為P0.01）。 417β雌二醇保護(hù)原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元免受氯胺酮損傷的機(jī)制研究 4.1不同處理對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元pAkt表達(dá)水平的影響 結(jié)果顯示，與0h相比，0.1μM的17β雌二醇單獨(dú)處理皮層神經(jīng)元0.5、1、2、4h, pAkt表達(dá)水平時(shí)間依賴性顯著升高（P0.01）；17β雌二醇與氯胺酮共處理皮層神經(jīng)元0.5、1、2、4h， pAkt表達(dá)水平隨時(shí)間延長顯著升高（P0.01）。為了進(jìn)一步證實(shí)17β雌二醇通過PI3K-Akt信號通路對氯胺酮引起的皮層神經(jīng)元損傷產(chǎn)生保護(hù)作用。給予PI3K抑制劑LY294002，觀察對皮層神經(jīng)元pAkt表達(dá)水平的影響。與對照組比較，17β雌二醇培養(yǎng)皮層神經(jīng)元2h引起pAkt表達(dá)水平的顯著升高（P0.01）,氯胺酮培養(yǎng)皮層神經(jīng)元2h引起pAkt表達(dá)水平的顯著降低（P0.01）。與氯胺酮組比較，17β雌二醇與氯胺酮共培養(yǎng)2h pAkt表達(dá)水平顯著升高（P0.01），加入PI3K抑制劑LY294002后培養(yǎng)2h，LY294002抑制了17β雌二醇對pAkt表達(dá)水平的上調(diào)作用（P0.01）。 4.217β雌二醇對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元Bcl-2表達(dá)水平的影響 Bcl-2作為一種抗凋亡分子，對多種損傷產(chǎn)生保護(hù)作用。Akt可通過激活CREB磷酸化，提高Bcl-2的表達(dá)水平，從而對各種應(yīng)激提供神經(jīng)保護(hù)作用。為了探討17β雌二醇是否有可能通過PI3K-Akt信號通路影響B(tài)cl-2的表達(dá)水平對氯胺酮引起的神經(jīng)元損傷產(chǎn)生保護(hù)作用，我們將皮層神經(jīng)元給予100μM氯胺酮和（或）0.1μM的17β雌二醇以及10μMLY294002處理24h，結(jié)果顯示與對照組比較，氯胺酮組Bcl-2表達(dá)水平顯著下降（P0.01）；與氯胺酮組比較，17β雌二醇與氯胺酮共處理組Bcl-2表達(dá)水平顯著增加（P0.01）；與17β雌二醇與氯胺酮共處理組比較，LY294002預(yù)處理組Bcl-2表達(dá)水平顯著下降（P0.01）。 4.317β雌二醇對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元cleaved-caspase-3表達(dá)水平的影響 Caspase-3是各種細(xì)胞凋亡通路的最終執(zhí)行者。為了探討17β雌二醇是否有可能通過PI3K-Akt信號通路影響cleaved-caspase-3的表達(dá)水平對氯胺酮引起的神經(jīng)元損傷產(chǎn)生保護(hù)作用，我們將皮層神經(jīng)元給予100μM氯胺酮和（或）0.1μM的17β雌二醇以及10μM LY294002處理24h，結(jié)果顯示與對照組比較，氯胺酮組cleaved-caspase-3表達(dá)水平顯著增加（P0.01）；與氯胺酮組比較，17β雌二醇與氯胺酮共處理組cleaved-caspase-3表達(dá)水平顯著下降（P0.01）；與17β雌二醇與氯胺酮共處理組比較，LY294002預(yù)處理組cleaved-caspase-3表達(dá)水平顯著增加（P0.01）。 4.4LY294002對17β雌二醇神經(jīng)保護(hù)作用的影響 MTT結(jié)果顯示,與對照組比較，氯胺酮組皮層神經(jīng)元存活率顯著降低（P0.01），與氯胺酮組比較，17β雌二醇與氯胺酮共處理組神經(jīng)元存活率顯著增加（P0.01），與17β雌二醇與氯胺酮共處理組比較，LY294002預(yù)處理組皮層神經(jīng)元存活率顯著降低（P0.01）。TUNEL結(jié)果顯示對照組可見少量的凋亡神經(jīng)元，與對照組比較，氯胺酮組神經(jīng)元凋亡顯著增加（P0.01），與氯胺酮組比較，17β雌二醇與氯胺酮共處理組神經(jīng)元凋亡顯著降低（P0.01），與17β雌二醇與氯胺酮共處理組比較，LY294002預(yù)處理組神經(jīng)元凋亡顯著增加（P0.01）。Hoechst33258核染色法進(jìn)一步證實(shí)了TUNEL試驗(yàn)所見。 結(jié)論： 1氯胺酮能濃度和時(shí)間依賴性的引起原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元損傷。 2氯胺酮在導(dǎo)致原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元損傷的同時(shí)伴隨某些神經(jīng)甾體水平的變化，其中PROG水平顯著升高，17β雌二醇水平顯著降低。 317β雌二醇對氯胺酮引起的原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用。 4外源系統(tǒng)性給予17β雌二醇對氯胺酮引起的發(fā)育期大鼠皮層區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡以及成年后學(xué)習(xí)記憶損傷產(chǎn)生保護(hù)作用。 5激活PI3K-Akt信號通路，促進(jìn)抗凋亡分子Bcl-2的表達(dá)，抑制促凋亡分子cleaved-caspase-3的表達(dá)可能是17β雌二醇對氯胺酮引起的皮層神經(jīng)元損傷產(chǎn)生保護(hù)作用的機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R614

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬路,張吉強(qiáng),姚青;雌激素合成酶與雌激素受體在神經(jīng)干細(xì)胞及其分化后細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)[J];重慶醫(yī)學(xué);2005年04期

2 張吉強(qiáng),蔡文琴;雌激素β受體在成年雄性大鼠腦內(nèi)的免疫組化定位研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年08期

3 涂麗莉,徐勝春;雌激素受體-β在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的分布及作用的研究進(jìn)展[J];解剖學(xué)研究;2004年03期

4 宋亞瓊;趙平;;雌激素與神經(jīng)保護(hù)的研究進(jìn)展[J];國際眼科雜志;2010年03期

5 許耘;劉勝洪;王小麗;唐立華;王芳;;雌激素受體在發(fā)育不同時(shí)期大鼠大腦的表達(dá)[J];解剖學(xué)報(bào);2006年01期

6 韓笑;呂廣明;吳輝群;季達(dá)峰;徐慧君;;雌激素對坐骨神經(jīng)損傷后脊髓脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的影響[J];交通醫(yī)學(xué);2007年05期

7 施慶余;羅愛林;李世勇;趙以林;;米諾環(huán)素對異氟醚誘導(dǎo)的發(fā)育期大鼠神經(jīng)元毒性的保護(hù)作用[J];臨床麻醉學(xué)雜志;2011年09期

8 扈俊華;梁羽冰;覃怡;謝玉波;;右美托咪定預(yù)處理對丙泊酚孵育的大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞活力的影響[J];臨床麻醉學(xué)雜志;2013年05期

9 徐穎,田玉科;氯胺酮和咪噠唑侖聯(lián)合使用對乳鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年06期

10 譚來勛;孫圣剛;張雙國;;不同發(fā)育時(shí)期大鼠腦海馬區(qū)膽固醇對發(fā)育與成熟的意義(英文)[J];中國臨床康復(fù);2005年36期

本文編號：1570005