本文關鍵詞： 哮喘 間歇低氧 瘦素 瘦素受體 氣道炎癥 氣道重塑　出處：《河北醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:觀察間歇低氧條件下哮喘大鼠瘦素及其受體的表達情況。通過建立間歇低氧合并哮喘大鼠模型,監(jiān)測間歇低氧干預后哮喘大鼠血清瘦素濃度、瘦素及其受體m RNA表達情況與肺泡灌洗液中炎性細胞計數(shù)、氣管壁及氣道平滑肌厚度的變化。探討間歇低氧對于瘦素及其受體的影響,分析瘦素及其受體在哮喘氣道炎癥和重塑中的作用。方法:將40只清潔級SD大鼠(雌性,6周齡,體重120g-150g之間)隨機分為正常對照組、間歇低氧組、哮喘組、間歇低氧哮喘組,各10只。哮喘組大鼠于實驗開始第1、8天通過腹腔注射給予卵清蛋白(OVA)100mg和氫氧化鋁100mg(溶于2m L 0.9%氯化鈉中)以致敏,于第15天起將大鼠置于自制非完全封閉霧化箱內(nèi),給予大鼠OVA溶液5ml霧化吸入,每次30分鐘,隔日一次,每激發(fā)4次,調(diào)整一次藥物濃度(依次為1%、1.5%、2%、2.5%、3%),共20次。間歇低氧組大鼠自實驗開始第1天起,將大鼠放置于低氧艙內(nèi),循環(huán)充入45分鐘純氮氣,使低氧艙中氧氣濃度由21%降至5%,再充入壓縮空氣75分鐘,使低氧艙中氧濃度復升至21%,此為一個周期,低氧頻率為4周期/天(上午九點到下午五點),7天/周,共四周,其余時間常規(guī)飼養(yǎng)。間歇低氧哮喘組大鼠在激發(fā)日每次激發(fā)后將大鼠置于低氧艙內(nèi),低氧操作方式同間歇低氧組,在非激發(fā)日僅給予間歇低氧操作,其余時間常規(guī)飼養(yǎng),共四周。正常對照組的致敏和激發(fā)均使用等量生理鹽水替代,剩余時間常規(guī)飼養(yǎng)。最后一次激發(fā)24小時后,用1%戊巴比妥麻醉大鼠后處死,進行取材。收集各組大鼠血清、肺組織、支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。測定BALF中細胞計數(shù)及分類;部分肺組織行病理切片,行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色,觀察形態(tài)學變化,并應用計算機圖像分析軟件測定支氣管管壁厚度(總管壁面積/支氣管基底膜周徑)、支氣管平滑肌厚度(總管壁平滑肌面積/支氣管壁內(nèi)周長)及血管密度;應用放射免疫法測定血清瘦素濃度;應用RT-PCR法測定肺組織中瘦素及其受體m RNA的表達。1動物模型的建立通過腹腔注射卵清蛋白致敏及反復霧化吸入激發(fā)的方式成功建立大鼠哮喘模型,于激發(fā)過程中可見大鼠出現(xiàn)呼吸急促、節(jié)律不規(guī)整、精神萎靡、反應遲鈍等表現(xiàn)。通過將大鼠放置于低氧艙內(nèi),循環(huán)低氧-復氧過程,成功給予間歇低氧干預,于間歇低氧干預過程中可見大鼠出現(xiàn)精神萎靡、反應遲鈍等癥狀。2 BALF中細胞計數(shù)及分類的比較(×10~6/L):細胞總數(shù):四組間比較差異具有統(tǒng)計學意義(F=2375.37,P0.01),兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。由高至低依次為間歇低氧哮喘組(35.16±1.08)、哮喘組(15.34±0.83)、間歇低氧組(10.26±0.55)、正常對照組(9.48±0.55)。中性粒細胞:四組間比較差異具有統(tǒng)計學意義(F=424.57,P0.01),兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。由高至低依次為間歇低氧哮喘組(0.98±0.07)、哮喘組(0.51±0.05)、間歇低氧組(0.36±0.03)、正常對照組(0.25±0.04)。淋巴細胞數(shù):四組間比較差異具有統(tǒng)計學意義(F=1896.37,P0.01),兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。由高至低依次為間歇低氧哮喘組(2.91±0.36)、哮喘組(2.22±0.39)、間歇低氧組(1.65±0.74)、正常對照組(1.25±0.51)。嗜酸性粒細胞數(shù):四組間比較差異具有統(tǒng)計學意義(F=5234.02,P0.01),兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。由高至低依次為間歇低氧哮喘組(3.52±0.07)、哮喘組(1.75±0.04)、間歇低氧組(0.96±0.06)、正常對照組(0.57±0.05)。3病理圖像分析結果肺組織病理切片HE染色結果示:正常對照組:肺組織結構規(guī)整,肺泡腔內(nèi)少許炎性細胞,支氣管粘膜上皮連續(xù)完整,管腔較規(guī)則,炎性細胞浸潤少。哮喘組:肺組織結構紊亂,可見有大量炎性細胞浸潤、上皮細胞脫落、氣道平滑肌增厚及血管增生。間歇低氧組:支氣管肺泡結構紊亂,可見有炎性細胞浸潤,肺泡上皮細胞、氣道平滑肌及血管增生。間歇低氧哮喘組:上述病理改變明顯加重。病理圖像分析結果示:間歇低氧哮喘組大鼠的氣道壁厚度、平滑肌厚結果:度(μm2/μm)及血管密度(A/mm2)(139.47±3.34、60.19±4.34、82.80±3.11)均高于哮喘組(98.49±5.36、42.75±3.83、59.35±2.80)、間歇低氧組(80.72±6.27、28.04±2.95、41.40±2.62),且哮喘組高于低氧組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01);三組均高于對照組(67.06±4.58、15.08±2.50、19.18±1.55),差異具有統(tǒng)計學意義(F=394.298,P0.01;F=311.23,P0.01;F=1089.44,P0.01)。4放射免疫法測定血清瘦素濃度(ng/ml)間歇低氧哮喘組大鼠的瘦素濃度(2.74±0.24)高于哮喘組(2.06±0.15)、間歇低氧組(1.72±0.16),且哮喘組高于低氧組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01);三組均高于正常對照組(0.93±0.17),差異具有統(tǒng)計學意義(F=172.33,P0.01)。5 RT-PCR法測定肺組織瘦素及其受體m RNA的表達間歇低氧哮喘組大鼠瘦素m RNA表達(0.90±0.07)高于哮喘組(0.73±0.01)、間歇低氧組(0.46±0.02),且哮喘組高于低氧組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01);三組均高于正常對照組(0.36±0.01),差異具有統(tǒng)計學意義(F=479.901,P0.01)。哮喘組大鼠瘦素受體m RNA(0.61±0.04)表達低于間歇低氧哮喘組(0.83±0.04)、間歇低氧組(0.88±0.02),且間歇低氧哮喘組低于低氧組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01);三組均低于正常對照組(0.93±0.01),差異具有統(tǒng)計學意義(F=188.629,P0.01)。6相關性分析結果血清瘦素濃度與BALF中中性粒細胞計數(shù)、細胞總數(shù)呈顯著正相關(r=0.886,P0.01;r=0.834,P0.01)(Fig.11,Fig.12);血清瘦素濃度與氣道平滑肌厚度、氣道壁厚度呈顯著正相關(r=0.943,P0.01;r=0.916,P0.01)(Fig.13,Fig.14)。肺組織瘦素m RNA表達與血清瘦素濃度呈顯著正相關(r=0.893,P0.01)(Fig.15)。結論:1通過抗原致敏和反復霧化激發(fā)、循環(huán)低氧干預成功建立大鼠間歇低氧合并哮喘模型,病理結果顯示較哮喘組存在更加明顯的炎性細胞浸潤及氣道壁、氣道平滑肌增厚,說明合并間歇低氧存在時可能會加重哮喘。2血清瘦素濃度與炎性細胞計數(shù)、氣道壁及平滑肌厚度均呈顯著正相關,說明瘦素可在氣道炎癥及重塑兩方面同時加重哮喘。合并間歇低氧存在時,哮喘組大鼠瘦素在蛋白和基因水平的表達明顯升高,提示間歇低氧可通過影響瘦素濃度而加重哮喘。3哮喘時瘦素受體m RNA水平是降低的,同時存在間歇低氧時會升高,提示哮喘時可能存在瘦素抵抗,合并間歇低氧存在時會減輕此情況,從而使瘦素能夠與更多的瘦素受體結合發(fā)揮生物學活性,加重哮喘。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R562.25

【參考文獻】

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