本文關鍵詞： Nrf2 基因敲除 液壓沖擊腦損傷 神經(jīng)功能缺損評分 腦組織含水量 神經(jīng)細胞凋亡 Caspase-3 Caspase-12 TUNEL　出處：《河北醫(yī)科大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：觀察Nrf2基因敲除小鼠液壓沖擊腦損傷后水腫腦組織中凋亡蛋白Casepase-3、Casepase-12表達變化和神經(jīng)細胞凋亡改變，探討Nrf2在液壓沖擊腦損傷中所發(fā)揮的抗神經(jīng)細胞凋亡作用。 方法：用雄性Nrf2基因正常和基因敲除小鼠制作液壓沖擊腦損傷模型。選取成年小鼠32只，其中Nrf2+/+、Nrf2-/-各16只，體重約28-32g，隨機分為4組：Nrf2+/+對照組（Nrf2+/+NC組，n=8）、Nrf2+/+損傷組（Nrf2+/+TBI組，n=8）和Nrf2-/-對照組（Nrf2-/-NC組，n=8）、Nrf2-/-損傷組（Nrf2-/-TBI組，n=8）。其中，對照組僅頭顱開窗不進行液壓沖擊損傷；損傷組頭顱開窗并常規(guī)制作液壓沖擊腦損傷模型。 各實驗組小鼠于24h后采用神經(jīng)功能缺損評分（NSS）方法進行評分，然后過度麻醉，斷頭，留取組織標本。迅速從損傷區(qū)前緣取重約50mg水腫腦組織，采用干濕重法測量腦組織含水量；經(jīng)損傷區(qū)切成約4mm薄層冠狀腦組織，用多聚甲醛固定，采用HE染色觀察組織形態(tài)學變化；免疫組織化學染色方法檢測Caspase-3、Caspase-12的表達；原位末端熒光標記（TUNEL）法檢測神經(jīng)細胞的凋亡情況；取損傷區(qū)域后緣腦組織采用免疫蛋白印跡法（Western Blot）檢測Caspase-3、Caspase-12蛋白含量。 結果： 1神經(jīng)功能缺損評分 腦損傷后，小鼠出現(xiàn)了神經(jīng)功能缺損癥狀。與對照組（NC）比較，損傷各組（TBI）在損傷后24h神經(jīng)功能評分明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；但是Nrf2+/+TBI組（5.25±0.89）與Nrf2-/-TBI組（5.88±1.36）比較無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 2組織學觀察 Nrf2+/+NC組和Nrf2-/-NC組肉眼觀察：腦組織軟腦膜完整表面光滑，腦溝及腦回清晰可見，腦表面及顱底無挫傷、出血、充血等表現(xiàn)。鏡下觀察：腦組織細胞結構完整，排列有序，核膜完整，核仁藍色淡染。 Nrf2+/+TBI組和Nrf2-/-TBI組肉眼觀察：可見打擊側皮層局部挫傷，腦溝回存在積血，切面觀察可見皮層下有散在點狀出血，嚴重者可見腦室內(nèi)出血。鏡下觀察：挫傷灶周圍細胞出現(xiàn)水腫且水腫程度明顯，胞漿淡染，部分出現(xiàn)空泡樣變性伴膠質細胞增生。 3腦組織含水量測定 采用Elliot公式對小鼠腦組織含水量進行測定。與對照組相比，損傷各組小鼠腦組織含水量明顯增高；Nrf2+/+NC組（78.37±0.18）與Nrf2-/-NC組（78.32±0.13）比較無差別（P0.05），Nrf2+/+TBI組（81.55±0.40）與Nrf2-/-TBI組（82.89±0.20）之間有明顯差別（P0.05）。 4免疫組化技術檢測Caspase-3和Caspase-12表達 Nrf2+/+NC組和Nrf2-/-NC組小鼠Caspase-3和Caspase-12陽性細胞很少，Nrf2+/+TBI組和Nrf2-/-TBI組小鼠則明顯增多。與Nrf2+/+NC組比較，Nrf2+/+TBI組動物挫傷灶周圍腦組織內(nèi)Caspase-3（28.892±5.865），Caspase-12（28.619±2.547）陽性細胞明顯增多，且染色也較深（P0.05）；與Nrf2-/-NC組比較，Nrf2-/-TBI組動物挫傷灶周圍腦組織內(nèi)Caspase-3（56.884±5.819），Caspase-12（51.196±4.563）陽性細胞數(shù)量增多，且染色也加深（P0.05）；與Nrf2+/+TBI組相比，Nrf2-/-TBI組動物挫傷灶周圍腦組織Caspase-3，Caspase-12陽性細胞同樣明顯增多（P0.05）。 5TUNEL法檢測神經(jīng)細胞凋亡 Nrf2+/+NC組和Nrf2-/-NC組TUNEL陽性細胞很少，Nrf2+/+TBI組和Nrf2-/-TBI組TUNEL陽性細胞表達均較對照組明顯增多，且Nrf2-/-TBI組（59.30±9.90）明顯高于Nrf2+/+TBI組（31.11±5.31），具有統(tǒng)計學意義（P0.05)。 6Western Blot測定Caspase-3和Caspase-12蛋白表達情況 Nrf2+/+NC組和Nrf2-/-NC組小鼠Caspase-3和Caspase-12蛋白表達較少，但Nrf2+/+TBI組和Nrf2-/-TBI組小鼠表達明顯增多。與Nrf2+/+NC組比較，Nrf2+/+TBI組動物挫傷灶周圍腦組織內(nèi)Caspase-3（0.8857±0.0226），，Caspase-12（0.6327±0.0080）明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；與Nrf2-/-NC組比較，Nrf2-/-TBI組動物挫傷灶周圍腦組織內(nèi)Caspase-3（1.0894±0.2479），Caspase-12（1.0290±0.1421）也明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；與Nrf2+/+TBI組相比，Nrf2-/-TBI組動物挫傷灶周腦組織的Caspase-3，Caspase-12蛋白表達顯著增多，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 結論： 1野生型（Nrf2+/+）小鼠液壓沖擊腦損傷后水腫腦組織內(nèi)Caspase-3和Caspase-12表達增多，神經(jīng)細胞凋亡加重，提示液壓沖擊腦損傷后Caspase-3和Caspase-12上調(diào)表達，誘導神經(jīng)細胞凋亡。 2液壓沖擊傷后Nrf2基因敲除型（Nrf2-/-）小鼠腦損傷后Caspase-3和Caspase-12表達和神經(jīng)細胞凋亡明顯高于野生型（Nrf2+/+）小鼠，表明Nrf2基因可通過抑制Caspase依賴凋亡途徑，發(fā)揮抗神經(jīng)細胞凋亡的神經(jīng)保護作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R651.15

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張慧;尹琳;劉麗梅;;腦缺血后處理對大鼠海馬Caspase-3表達的影響[J];中國實用神經(jīng)疾病雜志;2010年09期

2 薛瑞;王明仲;洪學軍;吳倩;廉果;何標;;原花青素通過Caspase途徑誘導乳腺癌MCF-7細胞凋亡[J];實用藥物與臨床;2013年01期

3 許建新;周躍飛;趙洪洋;;創(chuàng)傷性腦損傷后腦神經(jīng)細胞內(nèi)Ca~(2+)變化實驗研究[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2009年01期

4 周國勝,張新中,周文科;鎂離子對實驗性腦損傷大鼠的腦保護作用[J];中國臨床康復;2004年28期

5 鄭建明;陳曉春;林敏;張靜;林智穎;鄭關毅;李康增;;赤芍801通過抑制NF-κB抗腦缺血-再灌注損傷的機制[J];藥學學報;2011年02期

6 丁永忠;孫群周;張建生;;急性顱腦損傷后血清TNF-α,IL-1,IL-6,IL-8含量變化及其臨床意義[J];中國臨床神經(jīng)外科雜志;2006年01期

7 趙瑞杰;李引乾;王會;王廣彬;娜日蘇;金大鵬;關偉軍;馬月輝;;Caspase家族與細胞凋亡的關系[J];中國畜牧雜志;2010年17期

8 劉華;張國平;別曉東;劉銘;楊潔紅;萬海同;張宇燕;;虎杖苷對大鼠腦出血性損傷腦脊液中興奮性氨基酸動態(tài)變化的影響[J];中國中藥雜志;2010年22期

9 賈s

本文編號：1475176