本文關鍵詞：IL-27在博來霉素誘導小鼠肺纖維化模型中對T淋巴細胞的分化及相關因子影響作用的實驗研究

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【摘要】：目的：本研究通過給予小鼠體內注射白介素27重組蛋白(rmIL-27)和白介素27抗體重組蛋白(Anti IL-27),初步探討博來霉素誘導肺纖維化模型中IL-27對T淋巴細胞分化及相關因子的影響。方法：1、將120只6-8周齡18-22GC57BL/6小鼠隨機分為正常組(A組)、BLM模型組(B組)、BLM+IL-27組(C組)、BLM+抗IL-27組(D組),每組各30只。2、麻醉小鼠后A組給予氣管注入生理鹽水0.05m1,B、C、D組小鼠氣管內注入生理鹽水稀釋的博來霉素溶液0.05ml (5ml/kg)。C組造模后第二天開始腹腔皮下注射小鼠IL-27重組蛋白液1μg/只.天,連續(xù)注射7天,D組造模后當天一次性腹腔皮下注射小鼠抗IL-27蛋白溶液200mg／只。3、分別于第3天,第7天,第14天,第28天處死BLM組(B組)小鼠各5只,流式細胞術檢測肺組織中與IL-27雙染的T淋巴細胞,B淋巴細胞、自殺傷性細胞、樹突狀細胞以及巨噬細胞的細胞比例,觀察博來霉素所致肺纖維化中IL-27的來源。4、分別于第7天,第28天處死各組小鼠5只,①Western Blotting檢測IL-27在4組肺組織中的表達,觀察各組區(qū)別；②流式細胞術檢測脾臟組織Th1、Th2、Th17以及Treg細胞比例；③酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測肺泡灌洗液中不同Th細胞亞群相關細胞因子濃度。觀察IL-27在肺纖維化中對T淋巴細胞分化及相關因子的影響。結果：1、3、7、14、28天與IL-27雙染的肺組織中的T淋巴細胞在所占細胞比例分別為32.51±7.37%、39.98±4.19%、70.7±0.54%、43.82±2.28%；B淋巴細胞所占細胞比例分別為0.03±0.05%、0.07±0.09%、4.35±0.46%、7.66±0.91%：樹突狀細胞所占細胞比例分別為4.54±0.71%、15.96±0.84%、20.97±0.81%、16.13±1.15%；自然殺傷細胞所占細胞比例分別為0.58±0.3%、6.63±0.55%、26.69±0.82%、0.48±0.49%；巨噬細胞所占細胞比例分別為0.31±0.08%、1.12±0.51%、21.97±0.93%、8.69±0.2%,T淋巴細胞在各時間點所占細胞比例最高(P0.05)。2、第28天各組T淋巴細胞亞群比例變化：Thl細胞比例C組(0.93±0.04%)最大,A組(0.32±0.01)其次,B組(0.15±0.01)次之、D組(0.04±0.01)最小(P0.05)；Treg細胞比例C(9.23±0.85%)組大于A(2.57±0.39%)、B(0.77±0.11%)、D(0.59±0.05%)組(P0.05)：Th2細胞比例D組(3.8±0.28%)大于A(0.12±0.04%)、B(1.34±0.22%)、C(0.38±0.16%)組(P0.05)；B組大于C組(P0.05)；Th17細胞比例D組(0.94±0.16%)大于A(0.13±0.07%)、B(0.54±0.08%)、C(0.38±0.07%)組(P0.05)：B組大于C組,細胞比例無差異(P0.05)。3、肺泡灌洗液中各細胞因子濃度變化：第7、28天IFN-γ細胞因子水平C組(49.67±3.06 pg/ml)、(54.11±7.03pg/ml)高于A組(37.1±4.51 pg/ml)、(42.98±2.87pg/ml)高于B組(20.79±8.45 pg/ml)、(16.01±2.98pg/ml),C組高于D組(17.01±4.63pg/ml)、(13.85±2.49pg/ml)(P0.05)；IL-4細胞因子濃度B組(47.7±3.06pg/ml)、(67.87±16.65pg/ml)高于C組(28.28±4.62pg/ml)、(38.48±5.73pg/ml)高于A組(4.98±2.Olpg/ml)、(6.99±1.07 pg/ml),D組(60.81±5.68pg/ml)、(71.41±2.371.41±2.3pg/ml)高于C組(P0.05)；IL-10細胞因子濃度B組(156.57±54.71pg/ml)、(243.8±58.29pg/ml)D組(226.65±31.87pg/ml)、(265.97±72.71pg/ml)較A組(89.59±53.01pg/ml)、(120.28±32.73pg/ml)顯著升高,C組(129.43±30.13pg/ml)、(166.2±45.77pg/ml)均低于D組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；B組高于C組(P0.05)；IL-17細胞因子濃度B組(51.23±5.78pg/ml)、(56.05±0.42pg/ml)D組(60.31±19.69pg/ml)、(73.03±18.4pg/ml)高于A(30.93±4.78pg/ml)、(32.53±3.05pg/ml)組,D組高于C組(42.59±14.84pg/ml)、(31.82±6.48pg/ml)(P0.05)；TGFβ1細胞因子濃度具第7天、28天D組(432.76±59.22pg/ml)、(1025.28±175.33pg/ml)大于B組(334.67±65.83g/ml)、(489.72±104.82pg/ml)大于A組(168.29±37.61pg/ml)、(177.6±33.34pg/ml),D組高于C組(255.5±102.05pg/ml)、(232.76±67.8pg/ml)(P0.05)；28天C組(232.76±67.8pg/ml)細胞因子水平低于B組(489.72±104.82pg/ml)(P0.05)；第7天A組(168.91±42.5pg/ml)IL-6細胞因子濃度小于B(212.68±73.88pg/ml)、D(273.43±118.05pg/ml)組,B、C、D各組間細胞因子水平無差異(P0.05)；第28天IL-6細胞因子濃度B組(503.47±90.13pg/ml)、D組(816.43±118.98pg/ml)高于A組(197.12±27.45pg/ml),B組(503.47±90.131pg/ml)高于C組(275.12±36.62pg/ml),D組高于C組(P0.05)。結論：1、IL-27在博來霉素誘導的小鼠肺纖維化模型中主要來源于T淋巴細胞。2、IL-27在博來霉素所誘導的小鼠肺纖維化模型中,促進T淋巴細胞向Th1、Treg細胞分化,而抑制其細胞亞群Th2、Th17細胞的產(chǎn)生。3、IL-27在博來霉素所誘導的小鼠肺纖維化模型中,促進T淋巴細胞相關細胞因子IFN-γ分泌,抑制IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β 1分泌,以及IL-27可能通過抑制TGF-β1信號通路,對肺纖維化起保護作用。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R563

【參考文獻】

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1 李敬萍;關鍵;許西琳;羅倩;王蓓;;IL-27在結核性胸膜炎胸水中的表達及其意義[J];吉林醫(yī)學;2013年19期

2 李麗娜;王華;周蕾;張永勝;于永利;王麗穎;孫陸果;;博萊霉素誘導小鼠肺間質纖維化造模方式的選擇[J];中國免疫學雜志;2010年03期

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本文編號：1143075