本文關鍵詞：變異鏈球菌ldh基因啟動子的克隆及活性檢測

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【摘要】：目的克隆變異鏈球菌ldh基因啟動子,并驗證其活性。方法以變異鏈球菌UA159基因組為模版,PCR擴增變異鏈球菌ldh基因候選啟動子,將其插入β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gusA)報告基因表達載體pIB107 BamH I/XhoI之間,構建ldh基因啟動子gusA報告載體pCKS11,PCR、酶切及測序鑒定;經(jīng)ScaI酶線性化后轉化變異鏈球菌UA159,卡那霉素篩選陽性克隆SCKS11,經(jīng)PCR和測序鑒定后,檢測其GusA活性。結果成功擴增出大小為269bp的ldh基因候選啟動子;經(jīng)PCR、酶切及測序鑒定,變異鏈球菌ldh基因候選啟動子gusA報告基因表達載體pCKS11構建正確;PCR和測序鑒定,ldh基因候選啟動子gusA報告株SCKS11構建成功;變異鏈球菌ldh基因候選啟動子啟動的GusA活性是無啟動子的陰性對照的5.8倍,是陽性對照變異鏈球菌clpP基因啟動子的0.9倍。結論成功克隆變異鏈球菌ldh基因啟動子序列,具有較強的啟動轉錄活性,為研究ldh基因的表達調(diào)控機制奠定基礎。
【作者單位】： 廈門大學附屬第一醫(yī)院暨福建醫(yī)科大學廈門市第一教學醫(yī)院檢驗科;福建醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院;廈門市中心血站;
【關鍵詞】： 變異鏈球菌 ldh基因 啟動子
【基金】：國家自然科學基金(No.81000762) 福建省自然科學基金(No.2015J0155,2013D002)聯(lián)合資助~~
【分類號】：R780.2
【正文快照】： (1.Department of Clinical Laboratory,the First Affiliated Hospital of Xiamen University,Xiamen361003,China;2.The First Clinical Medical College of Fujian Medical University,Fuzhou350108,China;3.Xiamen Central Blood Service Station,Xiamen361003,China)變異

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本文編號：996469