本文關(guān)鍵詞：人牙齦成纖維細(xì)胞的多分化潛能及骨形成蛋白-2和地塞米松影響其成骨能力的研究

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【摘要】：目的:研究人牙齦成纖維細(xì)胞(human gingival fibroblasts,h GFs)是否具有成骨、成軟骨和成脂的多向分化潛能,同時(shí)檢測骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和地塞米松(dexamethasone,DEX)對體外培養(yǎng)的h GFs的細(xì)胞增殖活性以及成骨誘導(dǎo)分化的影響。方法:選擇就診于天津醫(yī)科大學(xué)口腔頜面外科的志愿者(18-25歲),經(jīng)志愿者知情同意后,拔除阻生齒(無齲病、無牙周病),收集術(shù)中分離的新鮮健康牙齦組織。采用組織塊法提取h GFs,取第3代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為兩部分。第一部分,培養(yǎng)至第3代的人牙齦成纖維細(xì)胞,進(jìn)行多分化包括成骨、成軟骨和成脂肪誘導(dǎo)分化研究,分別以DMEM(低糖)與3%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)進(jìn)行培養(yǎng)作為對照組,分別進(jìn)行堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、茜素紅染色、阿利新藍(lán)染色和油紅O染色檢測成骨、成軟骨和成脂分化情況。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分包括DMEM培養(yǎng)基(低糖)、3%FBS、10-2mol/Lβ-甘油磷酸鈉、5 mg/L抗壞血酸、2×10-3mol/L L-谷氨酰胺以及10-7mol/L DEX;成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分包括DMEM(低糖)、3%FBS、50 mg/L抗壞血酸、6.25mg/L胰島素及10μg/L轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1);成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分包括DMEM(低糖)、3%FBS、10-6mol/L DEX、10-5mol/L胰島素、0.5 mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌(3-Isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)及2×10-4mol/L吲哚美辛。第二部分,分5組培養(yǎng):A組為DMEM培養(yǎng)組,僅使用DMEM培養(yǎng)基(低糖)與3%FBS進(jìn)行培養(yǎng);B組為基礎(chǔ)骨誘導(dǎo)培養(yǎng)組;C組為基礎(chǔ)骨誘導(dǎo)+10-7mol/L DEX培養(yǎng)組;D組為基礎(chǔ)骨誘導(dǎo)+50μg/L BMP-2培養(yǎng)組;E組為基礎(chǔ)骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+10-7mol/L DEX+50μg/L BMP-2培養(yǎng)組。MTT法檢測細(xì)胞增殖活性,ALP染色、茜素紅染色、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測細(xì)胞成骨分化情況。結(jié)果:(1)培養(yǎng)至7d的ALP染色結(jié)果顯示成骨誘導(dǎo)組可見大量細(xì)胞內(nèi)染色的藍(lán)紫色沉淀,對照組無沉淀產(chǎn)生;培養(yǎng)至28d,可見成骨誘導(dǎo)組細(xì)胞周圍有大量紅染的鈣結(jié)節(jié)沉積,對照組無紅染的鈣結(jié)節(jié)。培養(yǎng)至14d,成軟骨誘導(dǎo)組阿利新藍(lán)染色見細(xì)胞染色的藍(lán)色沉淀,成脂誘導(dǎo)組細(xì)胞內(nèi)可見油紅O染色呈紅色的脂肪滴,對照組的h GFs阿利新藍(lán)和油紅O染色均成陰性。(2)MTT結(jié)果顯示:h GFs在所有培養(yǎng)條件下均能夠穩(wěn)定生長,各組細(xì)胞在相同時(shí)間的增殖活性無明顯差異(P0.05)。(3)培養(yǎng)至7d的細(xì)胞,堿性磷酸酶染色結(jié)果顯示:A組無明顯藍(lán)紫色沉淀,B組和D組可見少量細(xì)胞染色的藍(lán)紫色沉淀,C組和E組可見大量藍(lán)紫色沉淀,E組染色較C組稍深。(4)培養(yǎng)至28d的細(xì)胞,茜素紅染色結(jié)果顯示:A組無鈣結(jié)節(jié)形成,其它組均有大量鈣結(jié)節(jié)形成,E組的鈣結(jié)節(jié)量最多,其次為C組,再次是D組、B組。(5)RT-PCR結(jié)果顯示:同一時(shí)間,E組的ALP、膠原蛋白I(collagen 1,Col1)、runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)表達(dá)量均為最高(P0.0001);C組的ALP、Col1表達(dá)量僅次于E組(P0.0001);而第21d,D組Runx2(P0.05)。7d時(shí),除E組外,各組Runx2表達(dá)量均無明顯差異;14d時(shí),D組Runx2表達(dá)量僅次于E組(P0.05);21d時(shí),C組Runx2表達(dá)量僅次于E組(P0.05)。結(jié)論:(1)h GFs具有成骨、成軟骨和成脂分化的多向分化潛能。(2)BMP-2和DEX對h GFs的細(xì)胞增殖無明顯影響。(3)單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用DEX、BMP-2能夠促進(jìn)h GFs的堿性磷酸酶活性和鈣結(jié)節(jié)的形成,兩者聯(lián)合的作用更強(qiáng),提示兩者聯(lián)合能更有效地促進(jìn)h GFs成骨分化。
【關(guān)鍵詞】：人牙齦成纖維細(xì)胞 多分化潛能 骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2 地塞米松 成骨分化
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R781.4
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 一、人牙齦成纖維細(xì)胞多分化潛能的研究14-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備14-15
• 1.1.1 主要設(shè)備與儀器14-15
• 1.1.2 主要試劑15
• 1.2 對象和方法15-17
• 1.2.1 HGFs的原代培養(yǎng)15-16
• 1.2.2 ALP染色和茜素紅染色16
• 1.2.3 阿利新藍(lán)染色16-17
• 1.2.4 油紅O染色17
• 1.3 結(jié)果17-20
• 1.3.1 HGFs的原代培養(yǎng)17
• 1.3.2 ALP染色和茜素紅染色17-19
• 1.3.3 阿利新藍(lán)染色19
• 1.3.4 油紅O染色19-20
• 1.4 討論20-21
• 1.5 小結(jié)21-22
• 二、BMP-2 聯(lián)合DEX對人牙齦成纖維細(xì)胞成骨分化的影響22-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備22-23
• 2.1.1 主要設(shè)備與儀器22-23
• 2.1.2 主要試劑23
• 2.2 對象和方法23-26
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組23-24
• 2.2.2 MTT法細(xì)胞增殖檢測24
• 2.2.3 ALP染色24
• 2.2.4 茜素紅染色24
• 2.2.5 RT-PCR檢測成骨相關(guān)基因的表達(dá)24-26
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)分析26
• 2.3 結(jié)果26-28
• 2.3.1 MTT法檢測細(xì)胞增殖活性26-27
• 2.3.2 ALP染色27
• 2.3.3 茜素紅染色27-28
• 2.3.4 RT-PCR檢測成骨相關(guān)基因的表達(dá)28
• 2.4 討論28-30
• 2.5 小結(jié)30-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明36-37
• 綜述 誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞體外誘導(dǎo)及重編程模式37-46
• 綜述參考文獻(xiàn)42-46
• 致謝46

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王勤濤,張玉梅,袁乃梅,黃明霞;人牙齦成纖維細(xì)胞體外降解膠原能力的測定[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2003年02期

2 徐燕,袁萍,李頌,胡勇,王明麗;尼古丁和煙草浸提液對人牙齦成纖維細(xì)胞生長和貼附能力的影響[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2004年01期

3 趙永康,武志強(qiáng),艾紅軍,李述軍,鄭彩云;鈦合金對牙齦成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

4 唐昊U，

本文編號：972095