發(fā)布時間：2017-10-01 20:11

  本文關鍵詞：MT01抑制牙周炎患者自身組織核酸刺激RAW264.7內破骨相關因子mRNA的表達

  更多相關文章： 特定序列寡核苷酸MT01 牙周炎患者自身組織核酸 損傷相關 模式分子 破骨相關因子 RAW264.7

【摘要】：牙周炎是一種由于局部免疫失衡導致的牙周組織破壞性疾病，疾病的進展和嚴重程度與宿主自身的免疫性炎癥反應密切相關。在牙周疾病免疫炎癥反應過程中，牙周自身組織核酸不僅參與牙周疾病的發(fā)展，而且有可能成為牙周炎發(fā)生機制的關鍵因素并起到調控作用。自身組織來源的核酸分子屬于核酸類損傷相關模式分子(damage-associated molecular patterns molecules,DAMPs)，是“內源性危險信號”(endogenous danger signal)。研究證實，核酸類DAMPs能啟動以產(chǎn)生大量炎性細胞因子為特征的固有免疫反應。對機體而言，這類固有免疫應答反應是“雙刃劍”，既可快速有效的控制細菌感染，又可在過度激活的狀態(tài)下引起炎癥性病理損傷，這種炎癥性病理損傷在牙周疾病中主要表現(xiàn)為炎性牙槽骨吸收。整合以上研究線索，我們推論，在牙周疾病的發(fā)展中，牙周炎患者自身組織核酸可能作為一類DAMPs，通過過度激活牙周局部固有免疫應答反應，引發(fā)炎性牙槽骨吸收。 為證實這一推論，首先，本研究采用慢性牙周炎患者自身組織核酸刺激小鼠巨噬細胞RAW264.7，檢測細胞內破骨相關因子mRNA表達水平，發(fā)現(xiàn)炎性牙周組織核酸可促進破骨細胞活化，說明，牙周炎患者自身組織核酸可能通過對破骨相關因子基因表達水平的上調，參與牙周局部固有免疫應答反應，，導致牙槽骨吸收。 其次，我們選用免疫抑制劑MT01（一種依據(jù)人線粒體DNA序列設計的單鏈寡脫氧核苷酸），對牙周炎患者自身組織核酸刺激小鼠巨噬細胞RAW264.7進行干預，結果發(fā)現(xiàn)，牙周炎患者自身組織核酸對破骨細胞活化的激活受免疫抑制劑的抑制，進一步證實，牙周炎患者自身組織核酸可能作為一類DAMPs參與牙周炎的發(fā)生，導致炎性牙槽骨吸收。 方法采集翻瓣術中慢性牙周炎患者炎癥牙周組織以及正畸患者健康牙拔除術獲取的健康牙周組織，提取組織總RNA逆轉錄cDNA。培養(yǎng)小鼠巨噬細胞系RAW264.7，加入質量濃度1μg mL-1的特定序列寡核苷酸MT01共孵育3h后（以1μg mL-1的PBS作為對照），加入已提取的炎癥牙周組織及健康牙周組織cDNA（質量濃度為1μg mL-1）。實驗分4組：健康組織cDNA，炎癥組織cDNA，MT01+健康組織cDNA，MT01+炎癥組織cDNA。4組細胞分別孵育3、6、12、24小時，采用熒光實時定量聚合酶鏈反應法檢測破骨相關因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-α mRNA的表達，進行兩兩組間比較。 結果牙周炎患者自身組織核酸可上調RAW264.7內破骨相關因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-αmRNA的表達；在免疫抑制劑MT01的作用下，牙周炎患者自身組織核酸對RAW264.7內破骨相關因子mRNA的表達受到抑制。 結論牙周炎患者自身組織核酸對破骨細胞活化的激活作用可能是其作為牙周局部組織內DAMPs的依據(jù)；免疫抑制劑MT01對牙周炎患者自身組織核酸刺激RAW264.7內破骨相關因子mRNA表達的抑制作用，可以提示，牙周炎患者自身組織核酸可能參與牙周局部免疫應答反應。
【關鍵詞】：特定序列寡核苷酸MT01 牙周炎患者自身組織核酸 損傷相關 模式分子 破骨相關因子 RAW264.7
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R781.42
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• abstract7-13
• 英文縮略詞表13-14
• 第1章 緒論14-17
• 第2章 文獻綜述17-21
• 2.1 DAMPS 與牙周炎癥免疫應答關系的研究進展17-19
• 2.2 MT01 在牙周炎癥免疫應答的中作用的相關研究進展19-21
• 2.2.1 MT01 概述19-20
• 2.2.2 MT01 在牙周炎癥免疫應答的中作用20-21
• 第3章 實驗研究21-31
• 3.1 實驗儀器和試劑21-22
• 3.1.1 主要材料和試劑21
• 3.1.2 主要儀器和設備21-22
• 3.1.3 試劑配制22
• 3.2 選擇研究對象22-24
• 3.2.1 慢性牙周炎的納入標準與研究對象23
• 3.2.2 健康組納入標準與研究對象23-24
• 3.2.3 排除標準24
• 3.3 牙周檢查24-25
• 3.4 收集牙周標本并提取組織 RNA 及逆轉錄成 CDNA25-27
• 3.4.1 提取牙周組織 RNA：26-27
• 3.4.2 逆轉錄反應（RT）：27
• 3.5 小鼠單核/巨噬細胞的培養(yǎng)27-28
• 3.6 實驗分組28
• 3.7 提取細胞總 RNA 及逆轉錄成 CDNA28-29
• 3.7.1 提取細胞總 RNA28-29
• 3.7.2 逆轉錄反應（RT）：方法同前29
• 3.8 實時定量 PCR 檢測破骨相關因子的表達29-30
• 3.9 數(shù)據(jù)整理與統(tǒng)計學分析30-31
• 第4章 實驗結果31-35
• 4.1 無 MT01 干預狀態(tài)下，牙周炎患者自身組織核酸可上調 RAW264.7 內破骨相關因子 MRNA 的表達31-32
• 4.2 MT01 可抑制牙周炎患者自身組織核酸刺激 RAW 264.7 內破骨相關因子 MRNA 的表達32-33
• 4.3 在牙周炎患者組內，MT01 同樣抑制自身組織核酸對 RAW264.7 內破骨相關因子 MRNA 的表達33-35
• 第5章 討論35-39
• 5.1 破骨細胞及破骨相關因子的概論35-36
• 5.2 MT01 對牙周炎患者自身組織核酸對破骨細胞活化調控的影響36-39
• 第6章 結論39-40
• 參考文獻40-45
• 附錄45-47
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果47-49
• 致謝49

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本文編號：955425