發(fā)布時間：2017-08-24 04:49

  本文關鍵詞：SD乳鼠髁突軟骨細胞和四肢軟骨細胞生物學特性比較實驗研究

  更多相關文章： 髁突軟骨細胞 四肢關節(jié)軟骨細胞 外源性TGF-β_2

【摘要】：[目的]探討SD乳鼠髁突軟骨細胞(Mandibular Condylar Chondrocytes, MCC)和四肢關節(jié)軟骨細胞的體外培養(yǎng)方法與生物學特性,MTT法觀察不同濃度外源性轉化生長因子(transforming growth factor-β 2,TGF-β2)對兩種軟骨細胞的增殖作用,研究0.20ng/ml的TGF-β2對髁突軟骨細胞和四肢關節(jié)軟骨細胞PCNA和Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達差異。[方法]新生3天SD乳鼠10只,提取雙側髁突軟骨和四肢關節(jié)軟骨,聯(lián)合消化法獲取軟骨細胞,用15%FBS的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)。通過形態(tài)學、甲苯胺藍染色和Ⅱ型免疫組化鑒定細胞；傳代第2代時,兩種軟骨細胞各分為三個組,分別加入不同濃度的TGF-β20.10ng/ml、 0.20ng/ml、0.40ng/ml, MTT法觀察不同濃度TGF-β2對兩種軟骨細胞的增殖分化作用；篩選合適濃度的TGF-β2,以12h、24h、48h作為監(jiān)測點,MTT檢測兩種軟骨細胞各時間點增殖情況；RT-PCR檢測在兩種軟骨細胞中加入0.20ng/ml的TGF-β2作用12h后PCNA和Ⅱ型膠原蛋白的mRNA的表達差異。[結果]髁突軟骨細胞和四肢關節(jié)軟骨細胞的原代細胞24-48h后開始貼壁,72-96h可形成單層,144h即可長滿并傳代；傳代后,髁突軟骨細胞貼壁時間為4h,四肢關節(jié)軟骨細胞貼壁時間為6h；兩種軟骨的前3代細胞表型穩(wěn)定,有較強增殖能力；第4代細胞開始出現(xiàn)增殖能力減弱、形成單層時間變長的現(xiàn)象；甲苯胺藍染色和免疫組織化學染色顯示兩種軟骨細胞均表達陽性,四肢關節(jié)軟骨細胞Ⅱ型膠原蛋白陽性表達強于髁突軟骨細胞；不同濃度的TGF-β2作用髁突軟骨細胞,0.2ng/ml、0.4ng/ml TGF-β2比0.1ng/ml有明顯增殖促進作用,差異具有統(tǒng)計學意義,0.2ng/ml、0.4ng/ml TGF-β2對髁突軟骨細胞作用沒有明顯差異；0.2ng/ml的TGF-β2對四肢關節(jié)軟骨細胞是最合適的增殖濃度,而大于0.2ng/ml時則表現(xiàn)出部分的抑制作用；相同濃度TGF-β2作用下,髁突軟骨活細胞數(shù)達到峰值為12h左右,而四肢關節(jié)軟骨活細胞達到峰值在24h左右; 0.2ng/ml的TGF-β2對于兩種軟骨細胞中Ⅱ型膠原蛋白和PCNA中mRNA表達較對照組均增強,其中髁突軟骨細胞的Ⅱ型膠原蛋白和PCNA中mRNA表達較四肢關節(jié)軟骨細胞表達弱。[結論]通過本實驗研究,原代髁突軟骨細胞和四肢關節(jié)軟骨細胞在細胞形態(tài)和生長特性上有差異,髁突軟骨細胞免疫組化染色表達Ⅱ型膠原較四肢關節(jié)軟骨表達弱；外源性TGF-β2對兩種軟骨細胞的增殖作用存在差異,相同濃度的TGF-β2對兩種軟骨活細胞數(shù)量達到峰值時間有差異；0.2ng/ml的外源性TGF-β2對兩種軟骨細胞的Ⅱ型膠原蛋白和PCNA的mRNA表達存在差異,在基因水平探討兩種細胞對于外源性的TGF-β2的刺激表達出不同的反應；進一步說明兩種軟骨細胞在生長特性和對生長因子反應確實存在差異。
【關鍵詞】：髁突軟骨細胞 四肢關節(jié)軟骨細胞 外源性TGF-β_2
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R78;R68
【目錄】：

• 符號說明6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 引言11-14
• 第一部分 對髁突軟骨細胞和四肢關節(jié)軟骨細胞體外培養(yǎng)的研究14-24
• 材料與方法14-17
• 結果17-22
• 討論22-23
• 結論23-24
• 第二部分 外源性TGF-β_2對髁突軟骨細胞和四肢關節(jié)軟骨細胞增殖作用的研究24-33
• 材料24-25
• 方法25-26
• 結果26-30
• 討論30-31
• 結論31-33
• 第三部分 外源性TGF-β_2作用下髁突軟骨細胞和四肢關節(jié)軟骨細胞PCNA和Ⅱ型膠原蛋白mRNA的表達33-43
• 材料與方法33-34
• 方法34-37
• 結果37-41
• 討論41-42
• 結論42-43
• 全文總結43-45
• 參考文獻45-50
• 文獻綜述50-57
• 參考文獻55-57
• 發(fā)表文章57-58
• 致謝58

【參考文獻】

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1 史新立;胡X;孟祥提;;關節(jié)軟骨修復與相關細胞因子的作用[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年11期

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本文編號：729298