本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)口腔癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化并促其侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究

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【摘要】：口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)為最常見的口腔惡性腫瘤,癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移與其不良預(yù)后密切相關(guān)。近年來研究發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages,TAMs)參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移,研究證實(shí)TAMs可誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),進(jìn)而促其侵襲轉(zhuǎn)移,然而TAMs在口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制尚不明確。因此我們以口腔癌為研究對(duì)象,研究TAMs對(duì)口腔癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及其相關(guān)作用機(jī)制。研究目的:明確腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞能否誘導(dǎo)口腔癌細(xì)胞發(fā)生EMT進(jìn)而促其侵襲轉(zhuǎn)移并初步探討TAMs誘導(dǎo)EMT的生物學(xué)機(jī)制。材料與方法:首先用佛波脂(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和巨噬細(xì)胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)刺激人單核/巨噬細(xì)胞株(THP-1)促其形成TAMs并對(duì)其進(jìn)行熒光標(biāo)記鑒定,收集其上清液作為TAMs條件培養(yǎng)基培養(yǎng)口腔癌細(xì)胞HN4、HN6和SCC9,并對(duì)收集的TAMs條件培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)譜蛋白全譜分析;其次我們采用數(shù)字基因表達(dá)譜分析初步評(píng)測TAMs作用下SCC9差異基因的表達(dá)情況,再采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫蛋白印記技術(shù)和免疫熒光的方法分別從mRNA和蛋白質(zhì)以及熒光標(biāo)記的水平檢測TAMs作用后三種口腔癌細(xì)胞上皮和間質(zhì)標(biāo)記物的表達(dá)改變,在此基礎(chǔ)上,利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞周期測定和細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測三種口腔癌細(xì)胞的生物學(xué)特性改變;最后,通過RT-PCR檢測三種口腔癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄抑制因子的表達(dá)情況并應(yīng)用Western Blot方法檢測炎癥重要通路NF-κB的激活狀態(tài)等來探討TAMs誘導(dǎo)口腔癌細(xì)胞EMT及促其侵襲轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制。結(jié)果:首先成功體外誘導(dǎo)TAMs,表現(xiàn)為原本懸浮分散于培養(yǎng)基中的細(xì)胞貼壁成簇,部分細(xì)胞伸出偽足,巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD68和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD163均有明顯表達(dá),并檢測出TAMs條件培養(yǎng)基中含有多種炎癥因子與趨化因子;其次,TAMs誘導(dǎo)三種口腔癌細(xì)胞HN4、HN6和SCC9發(fā)生了EMT,主要表現(xiàn)為:TAMs誘導(dǎo)鋪路石樣的口腔癌上皮細(xì)胞逐漸拉長轉(zhuǎn)變?yōu)轭愃朴诔衫w維細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài);無論從mRNA水平,還是從蛋白質(zhì)水平,上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)下降,同時(shí)間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin的表達(dá)明顯上升,同時(shí)TAMs可明顯促進(jìn)三種口腔癌細(xì)胞HN4、HN6和SCC9侵襲轉(zhuǎn)移能力。最后,TAMs可能是通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄抑制因子Snail,ZEB和Twist以及激活炎癥信號(hào)通路NF-κB來促進(jìn)口腔癌EMT的發(fā)生。結(jié)論:1.體外成功構(gòu)建腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)。2.TAMs可以誘導(dǎo)HN4、HN6及SCC9發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)并顯著增強(qiáng)其侵襲、遷移能力。3.TAMs促進(jìn)了HN4、HN6及SCC9中轉(zhuǎn)錄抑制因子Snail,Twist,ZEB的表達(dá)并激活了三種口腔癌細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 口腔癌細(xì)胞 EMT 侵襲轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.85
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 1.材料和方法13-26
• 2 結(jié)果26-41
• 3.討論41-48
• 4 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 綜述56-71
• 參考文獻(xiàn)65-71
• 中英文縮略詞對(duì)照表71-73
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章等情況73-74
• 致謝74

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本文編號(hào)：708636