發(fā)布時間：2017-08-17 09:46

  本文關鍵詞：吸煙影響口腔黏膜上皮細胞防御功能及其機制的研究

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【摘要】：第一部分 吸煙對口腔黏膜上皮細胞防御功能的影響[目的] 吸煙可削弱呼吸道和胃腸道黏膜的防御功能,導致致病微生物的感染。然而,有關吸煙影響口腔黏膜防御功能的研究較少。本研究旨在觀察吸煙對口腔黏膜上皮細胞防御功能的影響。[方法]通過免疫組化染色結合圖像分析比較吸煙者與非吸煙者的正常口腔黏膜、口腔白斑上皮組織中核苷酸結合寡聚化結構域1 (nucleotide-binding oligomerization domain 1, NODI)、人β防御素(human beta defensins, hBDs)和半胱氨酸-天冬氨酸特異性蛋白酶(cysteinyl aspartate-specific proteases, Caspase)-12表達水平的差異。聯(lián)合應用HE染色、真菌嗜銀染色和抗白色念珠菌抗體免疫組化染色,檢測正常口腔黏膜和口腔白斑組織的白色念珠菌,比較非吸煙組和吸煙組之間陽性率的差異。[結果] 吸煙組正常口腔黏膜和口腔白斑上皮組織中NOD1、hBD-1和hBD-3的表達水平均明顯低于相應的非吸煙組,而吸煙組正常口腔黏膜和口腔白斑上皮組織中hBD-2和Caspase-12的表達水平均明顯高于相應的非吸煙組。吸煙組正常口腔黏膜和口腔白斑白色念珠菌陽性率均明顯高于相應的非吸煙組。[結論] 吸煙可降低口腔黏膜上皮細胞的防御功能,增加白色念珠菌的感染。第二部分Caspase-12在香煙煙霧提取物影響口腔黏膜上皮細胞防御功能中的作用[目的]Caspase-12是炎癥相關性Caspase家族的重要成員,在固有免疫防御反應的調(diào)控中起關鍵作用,可削弱腸道黏膜防御功能。本研究旨在觀察香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract; CSE)對口腔黏膜上皮細胞Caspase-12表達的影響,探究Caspase-12在CSE影響口腔黏膜上皮細胞防御功能中的作用。[方法] 采用CSE對永生化口腔黏膜上皮細胞系Leuk-1進行處理,ELISA法檢測hBD-1、hBD-2和hBD-3分泌水平的變化,并將培養(yǎng)上清孵育白色念珠菌,通過平板接種菌落計數(shù)評價CSE處理后培養(yǎng)上清抗白色念珠菌活性的改變。同時采用免疫印記法檢測CSE對Caspase-12表達水平的影響。在此基礎上,通過RNA干擾誘導Caspase-12表達沉默。在CSE處理細胞后,采用熒光定量PCR法檢測hBD-1、 hBD-2和hBD-3的：uRNA表達水平；采用ELISA法檢鋇hBD-1、hBD-2和hBD-3的分泌水平；將培養(yǎng)上清孵育白色念珠菌,通過平板接種菌落計數(shù)評價培養(yǎng)上清抗白色念珠菌的活性,比較Caspase-12 siRNA組和對照siRNA組之間的差異。[結果] CSE明顯降低了hBD-1和hBD-3的分泌水平,升高了hBD-2的分泌水平。CSE處理后細胞培養(yǎng)上清抗白色念珠菌活性明顯降低。CSE明顯增強了Caspase-12的蛋白表達。Caspase-12表達沉默明顯逆轉(zhuǎn)了CSE對hBD-1和hBD-3mRNA表達和分泌水平的抑制作用,明顯增強了CSE對hBD-2 mRNA表達和分泌水平的誘導作用。Caspase-12表達沉默顯著提高了CSE處理后細胞培養(yǎng)上清的抗白色念珠菌活性。[結論] CSE可增強口腔黏膜上皮細胞Caspase-12的表達,Caspase-12在CSE抑制口腔黏膜上皮細胞防御功能和增加白色念珠菌感染中發(fā)揮重要作用。第三部分Caspase-12在香煙煙霧提取物影響口腔黏膜上皮細胞NOD1表達水平中的調(diào)控作用[目的] NOD1是重要的胞內(nèi)模式識別受體,在口腔黏膜防御功能和細胞穩(wěn)態(tài)維持中起重要作用。以往研究表明,CSE通過調(diào)控NOD1通路影響其下游hBDs的表達和分泌。本研究旨在觀察CSE對口腔黏膜上皮細胞NOD1表達的影響,探討Caspase-12在CSE影響口腔黏膜上皮細胞NOD1表達水平中的調(diào)控作用。[方法] 免疫印記法檢測CSE處理對NOD1表達水平的影響。觀察Caspase-12表達沉默對NOD1表達水平的影響。采用免疫共沉淀和免疫熒光雙染法研究Caspase-12與NOD1的相互作用關系。在CSE處理細胞后,采用免疫印記法檢測NOD1的表達水平,比較Caspase-12 siRNA組和對照siRNA組之間的差異。[結果] CSE明顯抑制了NOD1的蛋白表達。Caspase-12表達沉默明顯上調(diào)了NOD1的蛋白表達水平。Caspase-12與NOD共定位表達,存在蛋白相互作用。Caspase-12表達沉默部分逆轉(zhuǎn)了CSE對NOD1蛋白表達的抑制作用。[結論] CSE可抑制口腔黏膜上皮細胞NOD1的表達,Caspase-12對NOD1表達水平的調(diào)控可能與CSE對口腔黏膜上皮細胞防御功能的抑制作用有關。
【關鍵詞】：吸煙 口腔黏膜 NOD1 人β防御素 白色念珠菌 香煙煙霧提取物 口腔黏膜 Caspase-12 人β防御素 白色念珠菌 香煙煙霧提取物 口腔黏膜 Caspase-12 NOD1
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R781
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文縮略詞表11-13
• 緒論13-22
• 第一部分 吸煙對口腔黏膜上皮細胞防御功能的影響22-52
• 一、材料與方法23-27
• 二、結果27-47
• 三、討論47-52
• 第二部分 Caspase-12在香煙煙霧提取物影響口腔黏膜上皮細胞防御功能中的作用52-78
• 一、材料與方法53-64
• 二、結果64-75
• 三、討論75-78
• 第三部分 Caspase-12在香煙煙霧提取物影響口腔黏膜上皮細胞NOD1表達水平中的調(diào)控作用78-97
• 一、材料與方法79-90
• 二、結果90-94
• 三、討論94-97
• 參考文獻97-106
• 結論106-107
• 綜述107-116
• 參考文獻112-116
• 附錄 已發(fā)表文章目錄116-118
• 致謝118-119

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本文編號：688355