本文關(guān)鍵詞：益生性唾液乳桿菌的篩選及其抑菌物質(zhì)和粘附作用的初步探究

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【摘要】：目的:本研究旨在從健康人群口腔中篩選具有益生潛能的唾液乳酸桿菌,為益生菌用于口腔疾病的防治做出初步探究。方法:1.取身體健康且無(wú)口腔疾病的志愿者的非刺激性唾液并使用LBS固體培養(yǎng)基進(jìn)行選擇性培養(yǎng),篩選得到乳白色圓形菌落,分別挑取形狀大小不一的各菌落進(jìn)行單克隆培養(yǎng),經(jīng)革蘭染色鑒定、16srDNA測(cè)序、NCBI((National Center for Biotechnology Information)對(duì)比分析得到唾液乳桿菌菌株(Lactobacillus salivarius),將純化后的唾液乳酸桿菌菌株在液體MRS培養(yǎng)基中液體培養(yǎng),取其無(wú)菌發(fā)酵液上清對(duì)指示菌變形鏈球菌(streptococcus mutans,SM)UA159進(jìn)行抑制實(shí)驗(yàn),篩選出抑菌效果最顯著的菌株作為本實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)菌株并命名。2.取目標(biāo)菌株的無(wú)菌發(fā)酵液上清進(jìn)行抑菌物質(zhì)的有效抑菌濃度、對(duì)熱的穩(wěn)定性、對(duì)蛋白酶的敏感性以及抑菌物質(zhì)的廣譜性等多方面的分析。3.以變形鏈球菌UA159為指示菌,將其與目標(biāo)菌株以不同的濃度在蓋玻片上共培養(yǎng)48h,光學(xué)顯微鏡及掃描電鏡下觀察其粘附狀況,初步研究目標(biāo)菌株與變形鏈球菌UA159的體外粘附能力。結(jié)果:1.本實(shí)驗(yàn)成功篩選出4株具有不同基因型的唾液乳酸桿菌,其對(duì)變形鏈球菌UA159有著不同的抑制作用,將抑菌作用最強(qiáng)的唾液乳酸桿菌菌株作為目標(biāo)菌株并命名為w22a。2.(1)w22a無(wú)菌發(fā)酵液上清中的抑菌物質(zhì)被稀釋至原濃度的1/3時(shí)其抑菌作用不太明顯,抑菌圈直徑與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但隨著發(fā)酵上清液中抑菌物質(zhì)濃度的增加其抑菌作用開始增強(qiáng)。(2)將無(wú)菌發(fā)酵液上清進(jìn)行60℃-90℃梯度溫度處理后發(fā)現(xiàn)其對(duì)變形鏈球菌UA159的抑制作用未受影響,各組間無(wú)顯著性差異(P0.05)。(3)將無(wú)菌發(fā)酵上清液經(jīng)過(guò)氧化氫酶及多種廣譜蛋白酶處理后發(fā)現(xiàn)抑菌物質(zhì)的抑菌作用出現(xiàn)了不同程度的破壞,其中蛋白酶K的破壞作用最強(qiáng)。(4)無(wú)菌發(fā)酵液上清中的抑菌物質(zhì)對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌DH5α、白色念珠菌ATCC10231、嗜酸乳桿菌ATCC4356等口腔常見的致病菌有著程度不一的抑制作用(P0.01),其中抑菌物質(zhì)對(duì)大腸桿菌DH5α的抑制作用最為顯著。3與變形鏈球菌UA159相比,w22a在體外模擬實(shí)驗(yàn)中有著更高的粘附率,并在一定濃度時(shí)能夠抑制變形鏈球菌的生長(zhǎng)。結(jié)論:本研究從健康人群唾液中成功篩選出具有口腔益生潛能的唾液乳酸桿菌w22a。其產(chǎn)出的抑菌物質(zhì)對(duì)熱穩(wěn)定,對(duì)多種廣譜蛋白酶敏感并能夠?qū)Χ喾N口腔常見致病菌有著不同的抑制作用。另外,w22a來(lái)源于口腔,能夠?qū)谇画h(huán)境有著良好的適應(yīng)性。因此,其是一株有口腔益生潛能的唾液乳桿菌,具有一定的研究?jī)r(jià)值及應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：唾液 唾液乳酸桿菌 抑菌物質(zhì) 粘附 益生性
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 研究?jī)?nèi)容及目的12-13
• 2.1 研究目的12
• 2.2 研究?jī)?nèi)容12-13
• 第三章 材料和方法13-22
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 3.1.1 主要儀器和設(shè)備13-14
• 3.1.2 主要試劑：14-16
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法16-21
• 3.2.1 乳酸桿菌的篩選及培養(yǎng)16
• 3.2.2 唾液乳酸桿菌的篩選及鑒定16-18
• 3.2.3 唾液乳酸桿菌的對(duì)變形鏈球菌UA159的抑制實(shí)驗(yàn)18-19
• 3.2.4 目標(biāo)菌株生長(zhǎng)曲線及抑菌物質(zhì)有效抑菌抑菌濃度的測(cè)定19
• 3.2.5 目標(biāo)菌株發(fā)酵上清液中抑菌物質(zhì)特性的初步探究19-20
• 3.2.6 目標(biāo)菌株與變形鏈球菌體外粘附實(shí)驗(yàn)的研究20-21
• 3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法21-22
• 第四章 研究結(jié)果22-29
• 4.1 益生性唾液乳酸桿菌的篩選結(jié)果22-23
• 4.1.1 唾液乳酸桿菌的篩選結(jié)果22-23
• 4.1.2 唾液乳酸桿菌對(duì)變形鏈球菌UA159抑制能力的測(cè)定23
• 4.2 目標(biāo)菌株所產(chǎn)抑菌物質(zhì)的初步研究及分析23-27
• 4.2.1 目標(biāo)菌株生長(zhǎng)曲線及代謝產(chǎn)物有效抑菌濃度的測(cè)定23-24
• 4.2.2 目標(biāo)菌株所產(chǎn)抑菌物質(zhì)基本特性的初步研究24-27
• 4.3 W22A與UA159體外粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-29
• 第五章 討論29-35
• 5.1 益生性唾液乳酸桿菌的篩選29-30
• 5.2 抑菌物質(zhì)的初步研究30-32
• 5.3 W22A與UA159的體外粘附實(shí)驗(yàn)32-33
• 5.4 關(guān)于本實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)思考及展望33-35
• 第六章 結(jié)論35-36
• 參考 文獻(xiàn)36-41
• 中英文縮略詞對(duì)照表41-42
• 攻讀學(xué)位期間的學(xué)術(shù)研究成果42-43
• 一、在學(xué)期間發(fā)表論文42
• 二、參與課題的項(xiàng)目名稱42-43
• 致謝43

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本文編號(hào)：559439