目的:通過檢測轉(zhuǎn)基因番茄口服防齲疫苗免疫后BALB/c小鼠脾臟內(nèi)T、B淋巴細胞亞群占總T、B淋巴細胞的百分率,分析各組間T、B淋巴細胞亞群數(shù)量的差異,初步探索轉(zhuǎn)基因番茄防齲疫苗在小鼠體內(nèi)發(fā)揮免疫作用的作用機制。方法:1、制備PAcA蛋白抗原及兔多克隆抗體,培育T₂代轉(zhuǎn)基因番茄植株,應用PCR、Western blot、ELISA等技術對T₂代轉(zhuǎn)基因番茄果實進行鑒定,并檢測T₂代轉(zhuǎn)基因番茄中融合蛋白的表達含量。2、將18只雄性、6周齡BALB/c小鼠按隨機分組原則分成3組:空白組(正常飼養(yǎng))、陰性對照組(正常番茄汁)、實驗組(T₂代轉(zhuǎn)基因番茄汁),每組6只,經(jīng)灌胃免疫4周(每周1次)后,ELISA法檢測唾液中SIgA和血清中IgG抗體滴度;在首次免疫后5周時,取各組小鼠脾臟,制成單細胞懸液,流式細胞儀檢測各組小鼠脾臟內(nèi)T、B淋巴細胞亞群分別占總T、B淋巴細胞的百分率,分析比較各組間亞群數(shù)量的差異。結(jié)果:1、經(jīng)親和層析法純化得到純化的PAcA蛋白,并測得PAcA蛋白濃度為2.19 mg/mL。2、將T<...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1含pET30a-PAcA質(zhì)粒的菌液PCRM:BM2000DNAMarker；1-12：菌液1-12#pacA-擴增產(chǎn)物

碩士學位論文PCR及質(zhì)粒測序鑒定含重組質(zhì)粒pET30a-PAcA菌察到菌液1#-12#均在約1200bp處出現(xiàn)特異性條帶，與預計是含有目的基因的陽性菌落。（圖2-1）

圖2-2質(zhì)粒pET30a-PacA測序鑒定

確定是含有目的基因的陽性菌落。（圖2-1）圖2-1含pET30a-PAcA質(zhì)粒的菌液PCRM:BM2000DNAMarker；1-12：菌液1-12#pacA-擴增產(chǎn)物（2）質(zhì)粒測序結(jié)果經(jīng)NCBINucleotideBLAST比對，序列同源性為100....

圖2-3BL21/pET30a-PAcA蛋白純化

士學位論文蛋白純化產(chǎn)物經(jīng)純化柱過濾后，SDS-PAGE電泳顯示泳道3、4內(nèi)條帶，說明質(zhì)粒內(nèi)的his標記基因與Ni-瓊脂糖凝膠純化AcA蛋白為可溶性蛋白。此結(jié)果還表明，NTA-40緩沖液而基本不影響PAcA蛋白的特異性結(jié)合。PAcA蛋白可液中被有效洗脫，....

圖2-4PAcA蛋白的Westernblot鑒定結(jié)果

圖2-3BL21/pET30a-PAcA蛋白M：彩虹180廣譜蛋白Marker；1：2、NTA-80；3：NTA-100；4：N5、NTA-300；6、NTA-400；7、Nesternblot鑒定SDS-PAGE電泳后，濕轉(zhuǎn)至PVD抗體作為一抗，HRP....

本文編號：3930105