目的:研究涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)來源的外泌體(exosome,EXO)對(duì)成纖維細(xì)胞PD-L1分子表達(dá)的影響。方法:通過EXO分離試劑盒提取SACC-83細(xì)胞系來源的外泌體并以電鏡鑒定其顆粒大小、密度和表型;使用PKH67熒光標(biāo)記后將EXO與成纖維細(xì)胞HPLF共孵育,以共聚焦顯微鏡觀察EXO可否被HPLF細(xì)胞攝取;將EXO與HPLF細(xì)胞共孵育后,全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序檢測(cè)篩查該細(xì)胞中差異表達(dá)基因,GO分析結(jié)合KEGG富集分析闡明差異表達(dá)基因涉及的生物學(xué)功能和相關(guān)信號(hào)通路;使用qPCR、Western blotting和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腫瘤EXO對(duì)HPLF細(xì)胞中PD-L1、LAG3和IDO1在mRNA與蛋白水平表達(dá)的影響。結(jié)果:SACC-83細(xì)胞源EXO特異性表達(dá)CD63、CD81和TSG101分子,并可被HPLF細(xì)胞內(nèi)吞攝取;EXO處理HPLF細(xì)胞后,細(xì)胞中PD-L1分子顯著上調(diào)表達(dá)(Fold change=10.19),差異基因顯著富集于TNF、NF-κB、cGAS-String等免疫反應(yīng)信號(hào)通路;體外實(shí)驗(yàn)證明EXO可以從mR...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)與EXO分離和熒光標(biāo)記
    1.3 SACC-83來源EXO的電鏡鑒定
    1.4 共聚焦熒光顯微鏡觀察HPLF細(xì)胞對(duì)EXO攝取
    1.5 EXO處理后HPLF細(xì)胞的全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與數(shù)據(jù)分析
    1.6 qPCR檢測(cè)EXO處理后HPLF細(xì)胞中PD-L1mRNA和LAG3mRNA的表達(dá)水平
    1.7 Western blotting檢測(cè)EXO處理后HPLF細(xì)胞中相關(guān)蛋白的表達(dá)水平
    1.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EXO處理后HPLF細(xì)胞PD-L1表達(dá)水平
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 SACC-83來源的EXO能夠被成纖維細(xì)胞HPLF內(nèi)吞
    2.2 SACC-83來源的EXO對(duì)成纖維細(xì)胞HPLF生物學(xué)功能和相關(guān)信號(hào)通路的影響
    2.3 SACC-83來源的EXO上調(diào)HPLF細(xì)胞中PD-L1的表達(dá)
3 討論



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