目的:比較腺樣囊性癌細(xì)胞系與舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞分泌的外泌體的差異。探討人唾液腺腺樣囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoma,Sacc）不同細(xì)胞系分泌的外泌體（exosomes,EXO）對(duì)Sacc細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響。方法:使用ExoEasy Maxi Kit試劑盒提取外泌體,通過(guò)透射電鏡觀察外泌體形態(tài)及直徑,納米粒子跟蹤分析（NTA）鑒定外泌體的粒徑及檢測(cè)外泌體濃度,Western Blotting檢測(cè)外泌體標(biāo)志性蛋白的表達(dá)及半定量分析其在Sacc-83、Sacc-lm、Tscc-25、Tscca不同細(xì)胞系間的表達(dá)水平。采用CCK-8法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)外泌體對(duì)Sacc細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力。結(jié)果:透射電鏡及NTA檢測(cè)顯示:提取的外泌體直徑在30-210nm之間,且形態(tài)及粒徑大小略有差異;Western Blotting檢測(cè)到不同細(xì)胞系分泌的外泌體特異性標(biāo)志蛋白CD9,CD63及TSG101呈陽(yáng)性表達(dá),且具有明顯差異（P<0.01）。NTA濃度分析顯示腺樣囊性癌及舌鱗狀細(xì)胞癌四種細(xì)胞系外泌體分泌量具有明... 

【文章來(lái)源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：41 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

透射電鏡觀察到四種細(xì)胞系來(lái)源的外泌體形態(tài)及直徑(A-D;50000×，80kv)：圖A為Sacc-83

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文121.1.3WesternBlotting分析：四種細(xì)胞系培養(yǎng)上清中提取的外泌體中均可檢測(cè)到外泌體特異性標(biāo)志蛋白CD9,CD63及TSG101表達(dá)（圖2A）。圖2Westernblot法檢測(cè)四種細(xì)胞系來(lái)源外泌體中特異性蛋白CD9,CD63andTSG101的表達(dá):圖A為Sacc-83,Sacc-lm,Tscc-25,Tscca四種細(xì)胞系來(lái)源的外泌體特異性蛋白CD9,CD63,TSG101表達(dá)水平。圖B為不同腫瘤細(xì)胞Sacc-83與Tscca來(lái)源的外泌體特異性蛋白CD9,CD63,TSG101表達(dá)差異（CD9,CD63,p<0.01）。圖C為腺樣囊腺癌兩種不同細(xì)胞系Sacc-83與Sacc-lm來(lái)源的外泌體特異性蛋白CD9,CD63,TSG101表達(dá)差異(CD9,CD63,P<0.01;TSG101,P<005)。Fig.2WesternblotanalysiswasusedtodetecttheexpressionofspecificproteinsCD9,CD63andTSG101inexosomesderivedfromfourcelllines.1.2SACC及SCC來(lái)源的外泌體對(duì)比分析1.2.1WesternBlotting(WB)分析4種細(xì)胞系外泌體特異性蛋白表達(dá)情況顯示，舌鱗狀細(xì)胞癌Tscc-25細(xì)胞系外泌體特異性蛋白CD9,CD63表達(dá)明顯高于腺樣囊性癌Sacc-83細(xì)胞系表達(dá)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)(圖2B)。同時(shí)，腺樣囊性癌不同細(xì)胞系之間，高轉(zhuǎn)移株Sacc-lm細(xì)胞系外泌體中特異性蛋白CD9,CD63明顯高于Sacc-83細(xì)胞系外泌體特異性蛋白表達(dá)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)(圖2C)。1.2.2NTA分析儀檢測(cè)4種細(xì)胞系提取的外泌體濃度顯示,舌鱗狀細(xì)胞癌Tscc-25,Tscca細(xì)胞外泌體的分泌量明顯高于腺樣囊性癌Sacc-83細(xì)胞系，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。同時(shí)，腺樣囊性癌不同細(xì)胞系Sacc-lm(高轉(zhuǎn)移株)外泌體的分泌量明顯高于Sacc-83細(xì)胞系，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)(圖3)。圖3NTA分析4種細(xì)胞系分泌的外泌體濃度:腺樣囊腺癌兩種細(xì)胞系Sacc-83,Sacc-lm來(lái)源的外泌體濃度檢測(cè)具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;兩

Sacc-83細(xì)胞系表達(dá)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)(圖2B)。同時(shí)，腺樣囊性癌不同細(xì)胞系之間，高轉(zhuǎn)移株Sacc-lm細(xì)胞系外泌體中特異性蛋白CD9,CD63明顯高于Sacc-83細(xì)胞系外泌體特異性蛋白表達(dá)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)(圖2C)。1.2.2NTA分析儀檢測(cè)4種細(xì)胞系提取的外泌體濃度顯示,舌鱗狀細(xì)胞癌Tscc-25,Tscca細(xì)胞外泌體的分泌量明顯高于腺樣囊性癌Sacc-83細(xì)胞系，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。同時(shí)，腺樣囊性癌不同細(xì)胞系Sacc-lm(高轉(zhuǎn)移株)外泌體的分泌量明顯高于Sacc-83細(xì)胞系，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)(圖3)。圖3NTA分析4種細(xì)胞系分泌的外泌體濃度:腺樣囊腺癌兩種細(xì)胞系Sacc-83,Sacc-lm來(lái)源的外泌體濃度檢測(cè)具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;兩種不同腫瘤細(xì)胞Sacc-83與Tscc-25來(lái)源的外泌體濃度檢測(cè)同樣具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。Fig.3NTAanalyzedtheconcentrationsofexosomesecretedbythefourcelllines.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腫瘤外泌體的提取與鑒定[J]. 葉冬熳,于韜.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2018(20)
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本文編號(hào)：3612182