目的體外實驗探究骨形態(tài)蛋白1（Bone morphogenic protein 1,BMP1）在牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1促進比格犬骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化過程中發(fā)揮的作用,以及通過比格犬動物實驗?zāi)Ｐ蜋z測攜帶有牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1和骨形態(tài)蛋白1目的基因的比格犬骨髓間充質(zhì)干細胞復(fù)合骨替代材料在比格犬上頜竇區(qū)域的成骨效能。研究通過基因修飾手段,利用犬骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）過表達骨形態(tài)蛋白1（Bone morphogenic protein 1,BMP1）促進牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1（Dental matrix protein 1）水解,提高犬上頜竇底提升術(shù)中礦化成骨的可行性。方法選用12只10.15±3.5Kg比格犬,使用密度梯度離心法分離培養(yǎng)犬BMSCs,流式細胞儀鑒定干細胞屬性。通過檢測堿性磷酸酶（ALP）活性驗證不同比例牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1和骨形態(tài)蛋白1對BMSCs體外成骨的影響,使用kit-8細胞計數(shù)試劑盒檢測實驗對于細胞增殖的影響。構(gòu)建攜帶有牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1和骨形態(tài)蛋白1目的基因的腺病毒載體,分別攜帶有櫻桃紅色熒光基因片段和綠色熒光基因... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

原代犬骨髓間充質(zhì)干細胞傳代后培養(yǎng)鏡下形態(tài)

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文264.2流式細胞術(shù)檢測犬骨髓間充質(zhì)干細胞發(fā)現(xiàn)細胞表面標記物CD44、CD90表達呈陽性圖2流式細胞術(shù)鑒定犬骨髓間充質(zhì)干細胞犬骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)，收集P3代bMSCs經(jīng)抗體孵育后進行流式細胞術(shù)上機分析，結(jié)果分析可見CD44+細胞所占比例為99.83%、CD90+細胞為91.75%（圖2）。符合犬骨髓間充質(zhì)干細胞特性，實驗培養(yǎng)的細胞可用于后續(xù)實驗?zāi)Ｐ汀?.3檢測顯示兩種蛋白直接作用于BMSCs后的堿性磷酸酶活性升高，對細胞增殖無明顯影響探索兩種蛋白作用于犬骨髓間充質(zhì)干細胞后對細胞向成骨細胞分化的影響，用兩種不同濃度的蛋白質(zhì)單獨或組合刺激細胞。將蛋白質(zhì)與細胞共培養(yǎng)7天后，定量堿性磷酸酶檢測試劑盒檢測，分析ALP活性。（1）不同濃度的BMP1蛋白對BMSCs的成骨誘導(dǎo)作用。設(shè)置不同濃度梯度BMP1的蛋白共培養(yǎng)組，結(jié)果表明，最佳的BMP1濃度為5μg/ml，此時BMSCs的堿性磷酸酶活性值最高（圖3）。

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文27圖3不同濃度的BMP1蛋白對BMSCs的成骨誘導(dǎo)作用（**與對照組相比，P<0.01）（2）不同濃度的DMP1蛋白對骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨誘導(dǎo)作用。設(shè)置不同濃度梯度的DMP1蛋白共培養(yǎng)組，結(jié)果表明，最佳的DMP1濃度為4μg/ml，此時BMSCs的堿性磷酸酶活性值最高（圖4）。圖4不同濃度的DMP1蛋白對骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨誘導(dǎo)作用（**與對照組相比，P<0.01）（3）選用BMP1與DMP1的空白組、半量最佳濃度組和最佳濃度組進行組合，加入BMSCs的培養(yǎng)液中，使用堿性磷酸酶試劑盒檢測。當BMP1濃度為5μg/ml，DMP1濃度為4μg/ml時，堿性磷酸酶活性最高。一定濃度下堿性磷酸酶活性隨


本文編號：3570795