目的:構建重組甲狀旁腺激素相關蛋白（parathyroid hormone related protein,PTHrP） 1-36并觀察其在促進牙槽骨骨形成中的作用。方法:構建pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表達載體,表達重組小鼠PTHrP1-36蛋白。通過處理小鼠原代骨髓間充質細胞和卵巢切除致頜骨疏松的小鼠,體外和體內觀察重組PTHrP1-36在促進牙槽骨骨形成中的作用。采用SPSS 10.0軟件包對數(shù)據進行統(tǒng)計學分析。結果:實驗結果顯示,pGEX-2TK/PTHrP1-36原核表達載體構建成功,IPTG可誘導新生蛋白表達。體外處理小鼠骨髓細胞,發(fā)現(xiàn)重組PTHrP1-36蛋白可以增加總成纖維細胞克隆形成單位（CFU-f）、堿性磷酸酶陽性的CFU-f和鈣化結節(jié)的數(shù)目。在卵巢切除致頜骨疏松的小鼠體內注射重組PTHrP1-36蛋白,發(fā)現(xiàn)小鼠牙槽骨骨密度增加。H-E染色以及骨膠原染色顯示,牙槽骨骨量明顯增加。結論:重組PTHrP1-36可促進骨髓間充質細胞的成骨分化,促進牙槽骨骨密度和骨量的增加,提示PTHrP1-36在促進牙槽骨形成中具有積極作用。 

【文章來源】：上�？谇会t(yī)學. 2020,29(06)北大核心CSCD

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重組表達質粒的鑒定。M:DL2000 DNA Marker;1-3:p GEX-2TK/PTHr P1-36以P1/P2為引物的PCR擴增產物)

圖1 重組表達質粒的鑒定。M:DL2000 DNA Marker;1-3:p GEX-2TK/PTHr P1-36以P1/P2為引物的PCR擴增產物)利用1mmol/L的IPTG誘導3 h，進行大量蛋白表達，GSTrap FF純化柱純化可溶性融合蛋白GST-PTHrP1-36，凝血酶切割去除GST，收取PTHrP1-36蛋白后，15%SDS-PAGE顯示純化的目的蛋白PTHrP1-36，約4 kD；洗脫液洗脫吸附的GST蛋白，大小為26 kD（圖4），均與預期相一致。

為了驗證重組PTHrP1-36蛋白對骨髓間充質細胞成骨分化的影響，通過重組蛋白處理小鼠原代骨髓間充質細胞，并誘導其向成骨細胞分化，利用ALP、鈣化結節(jié)和總克隆細胞化學染色，觀察重組蛋白對骨髓間充質細胞分化的影響。實驗結果顯示,ALP陽性的成纖維細胞克隆形成單位（CFU-f)(CFU-fALP）、鈣化結節(jié)陽性的CFU-f (CFU-fCa)和總CFU-f(Total CFU-f)數(shù)目在PTHrP1-36蛋白處理組均較對照組明顯增加，幅度達15%～30%（圖5A-F），說明重組PTHrP1-36蛋白具有促進骨髓間充質細胞向成骨細胞分化的作用。圖4 重組PTHrP1-36蛋白表達純化的SDS-PAGE分析。M：標準蛋白Marker;1、3：經凝血酶切除GST后，純化的PTHrP1-36蛋白；2、4：洗脫液洗脫的GST蛋白

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3486951