發(fā)布時間：2021-10-30 16:24

　　目的（1）克隆人癌胚抗原（carcinoembryonic antigen）基因片段,構建pcDNA3.1-CEA基因疫苗。（2）檢測其在人舌癌Tca8113細胞株（human tongue squamous cell carcinoma cell line8113,Tca8113）中的表達。方法（1）采用逆轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）技術,從人結腸癌組織中擴增出人CEA基因片段,通過DNA重組技術將該基因片段重組于pcDNA3.1真核表達載體上,構建成pcDNA3.1-CEA基因疫苗。（2）通過用酶切、PCR擴增電泳分析及DNA測序的方法對重組DNA進行鑒定。（3）轉染人舌癌Tca8113細胞,以轉染空載體組做實驗對照組,以未轉染的舌癌細胞作空白對照組,通過RT-PCR和免疫組化檢測其在人舌癌Tca8113細胞中的表達。結果（1）經(jīng)酶切、PCR擴增電泳分析和DNA測序證實,本實驗構建的重組質粒目的基因片段為人CEA-cDNA。（2）經(jīng)RT-PCR和免疫組化證實:與實驗對照組和空白對照組相比較,轉染pcDNA3.1-CEA后的人舌癌Tca8113細胞內(nèi)CEA mRNA的轉錄和蛋白... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

總RNA電泳

1 2 DL2000CEA 真核表達載體的鑒定pcDNA3.1-CEA的酶切電泳鑒定:粒經(jīng)EcoRI\XhoI雙酶切電泳后,出現(xiàn)了2.1kbpEAcDNA產(chǎn)物，5.4kbp為pcDNA3.1線狀質粒圖2 RT-PCR產(chǎn)物電泳質量 DL2000 Marker，1 為擴增的特異條帶(2.1kbp)，2 為陰

3.1 重組質粒pcDNA3.1-CEA的酶切電泳鑒定:重組質粒經(jīng)EcoRI\XhoI雙酶切電泳后,出現(xiàn)了2.1kbp和5.4kbp兩條帶（2.1kbp為CEAcDNA產(chǎn)物，5.4kbp為pcDNA3.1線狀質粒）(圖3)。1 2 3 4 5 6圖 3.1 重組質粒 pcDNA3.1-CEA 雙酶切電泳圖譜圖2 RT-PCR產(chǎn)物電泳M 為相對分子質量 DL2000 Marker，1 為擴增的特異條帶(2.1kbp)，2 為陰性對照圖3 重組質粒pcDNA3.1- CEA雙酶切電泳1 為相對分子質量 1kbp DNA Ladder Marker，2、3、4、5、6 為雙酶切產(chǎn)物5.4kb(pcDNA3.1)和 2.1kb（CEA）1000bp750bp500bp2.1kbp10000bp6000bp2000bp1500bp1000bp5

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3467050