發(fā)布時(shí)間：2021-07-31 09:20

　　變形鏈球菌是一種革蘭陽(yáng)性球菌,且為牙菌斑內(nèi)的常居菌,是齲病的主要致病菌。氟化物的應(yīng)用能大大降低齲病的發(fā)生率,它能抑制葡糖基轉(zhuǎn)移酶的活性,并且隨著濃度增加,此抑制作用逐漸增強(qiáng)。在防治齲病方面取得了顯著療效,但長(zhǎng)期的應(yīng)用可使變形鏈球菌發(fā)生突變,而產(chǎn)生變形鏈球菌的耐氟菌株。耐氟菌株的產(chǎn)酸和耐酸能力更強(qiáng),致齲能力也隨之增強(qiáng),但其毒力的增強(qiáng)是否與基因突變有關(guān)目前尚不清楚。變形鏈球菌耐氟菌株耐酸能力的提高,一直受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。目前在一些原核生物中已分離、測(cè)序并克隆了多個(gè)耐酸性相關(guān)的基因,本課題組前期已檢測(cè)出耐酸相關(guān)基因ffh、dgk、dltc等并登陸美國(guó)GenBank。本實(shí)驗(yàn)以耐酸相關(guān)基因gluA為目的基因。首先在體外人工誘導(dǎo)變形鏈球菌耐氟菌株（UA159-FR）,根據(jù)GenBank發(fā)表的變形鏈球菌gluA基因序列,依據(jù)耐酸相關(guān)基因gluA的同源性,從最保守區(qū)設(shè)計(jì)一對(duì)引物進(jìn)行PCR,獲得變形鏈球菌耐氟菌株耐酸基因gluA的基因序列,利用pMD18-T載體進(jìn)行T/A克隆,構(gòu)建重組質(zhì)粒,并進(jìn)行測(cè)序鑒定。結(jié)果變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因gluA未發(fā)生突變,為明晰變形鏈球菌耐酸性打下理論基礎(chǔ)。 

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【文章頁(yè)數(shù)】：43 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
內(nèi)容提要
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)菌與質(zhì)粒
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 試劑和培養(yǎng)基
    2.2 方法
        2.2.1 變形鏈球菌耐氟菌株的誘導(dǎo)
        2.2.2 變形鏈球菌耐氟菌株基因組的提取
        2.2.3 引物設(shè)計(jì)
        2.2.4 PCR反應(yīng)
        2.2.5 PCR產(chǎn)物的鑒定
        2.2.6 PCR產(chǎn)物的回收
        2.2.7 PCR產(chǎn)物連接入pMD18-T載體中
        2.2.8 制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.9 轉(zhuǎn)化
        2.2.10 重組質(zhì)粒的提取
        2.2.11 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.2.12 測(cè)序
        2.2.13 本實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 PCR 產(chǎn)物
        2.3.2 重組質(zhì)粒
        2.3.3 附圖
        2.3.4 測(cè)序結(jié)果分析
第3章 討論
    3.1 變形鏈球菌耐氟菌株的研究意義
    3.2 基因突變的研究意義
    3.3 變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因gluA的研究意義
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
中文摘要
Abstract


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一種簡(jiǎn)捷有效的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備方法[J]. 代紅星,張慶橋,樊寶良.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(29)
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[3]變形鏈球菌耐氟株質(zhì)子移位ATP酶活性的體外研究[J]. 于丹妮,陳錦英,殷曉萍,司進(jìn).  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2005(01)
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[5]變形鏈球菌的傳播研究方法及影響因素研究進(jìn)展[J]. 李頌.  國(guó)外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè). 2002(05)
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[8]變形鏈球菌和遠(yuǎn)緣鏈球菌耐氟菌株DNAG+C含量測(cè)定[J]. 盛江筠,劉正.  上�？谇会t(yī)學(xué). 2001(01)
[9]變形鏈球菌和遠(yuǎn)緣鏈球菌耐氟菌株粘附能力的體外研究[J]. 盛江筠,劉正.  上海口腔醫(yī)學(xué). 2000(03)
[10]變形鏈球菌耐氟菌株的誘導(dǎo)及產(chǎn)酸性的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 盛江筠,劉正.  中華口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2000(02)



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