牙周病造成牙周附著結(jié)構(gòu)喪失,牙槽骨吸收,是成年人失牙的主要原因,嚴(yán)重影響患者身心健康。因此,牙周附著組織的再生是牙周病治療的主要目標(biāo)。目前引導(dǎo)牙周組織再生術(shù)（guide tissue regeneration, GTR）取得了較好的效果。它是將一種屏障性材料放于牙根和牙齦瓣之間,阻擋牙齦成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞長(zhǎng)入,從而使具有再生潛能的牙周韌帶細(xì)胞（periodontal ligament cells, PDLCs）優(yōu)先占據(jù)根面空間,依靠其分化形成牙周組織。這種技術(shù)從臨床上和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中均證實(shí)能夠形成牙周新附著。然而長(zhǎng)期的牙周病損使剩余的牙周韌帶細(xì)胞數(shù)量減少,不能滿足完全的修復(fù)再生。因此,我們需要補(bǔ)充一定量的種子細(xì)胞到牙周缺損區(qū)以彌補(bǔ)自身細(xì)胞數(shù)量的不足。在本課題中,我們將攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）基因的大鼠成骨細(xì)胞,接種至三維多孔支架殼聚糖/納米羥基磷灰石（chito san/hydroxyapatite, CS/nHA）膜上,植入大鼠顱頂骨缺損,觀察其是否既具有屏障膜功能又能提供細(xì)胞來(lái)源,為負(fù)載種子細(xì)胞的殼聚糖... 

【文章來(lái)源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：44 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

AIP染色觀察到成，丹細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)紅色的沉淀(I勺箭頭示)(x400)

山東大學(xué)碩十學(xué)位淪文組不植入任何材料。用無(wú)菌生理鹽水沖洗術(shù)區(qū)，縫合傷口(圖7a，7b)。圖7a人鼠顱胃，標(biāo)準(zhǔn)骨缺損模型的制備:圖7b骨缺損區(qū)植入細(xì)胞與CS/nHA復(fù)合膜)月慢速球鉆磨顱骨至直徑smm的臨界謂·缺損2.3取材與檢測(cè):2.3.1標(biāo)本處理:術(shù)后16周，將實(shí)驗(yàn)組大鼠麻醉，4%多聚甲醛溶液灌注完成內(nèi)固定。取初步固定的大鼠新鮮顱骨標(biāo)本，置于4%的多聚甲醛溶液固定24h。修整、切開(kāi)骨缺損。分別制作石蠟切片和冰凍切片。石蠟切片制作 :0.5MEDTA脫鈣液振蕩脫鈣6周(每2天更換一次脫鈣液)，直到脫鈣完成。流水充分沖洗后，標(biāo)本用各級(jí)酒精逐級(jí)脫水:50%乙醇脫水1小時(shí)~70%乙醇2小時(shí)一80%乙醇過(guò)夜一95%乙醇I脫水lh一95%乙醇111小時(shí)一 100%乙醇11小時(shí)一 100%乙醇 11lh，取出晾干一二甲苯透明11小時(shí)一二甲苯透明H50分鐘一浸蠟、包埋，用刀片修整標(biāo)本周?chē)嘤嗟氖炓员闱衅?

圖7a人鼠顱胃，標(biāo)準(zhǔn)骨缺損模型的制備:圖7b骨缺損區(qū)植入細(xì)胞與CS/nHA復(fù)合膜)月慢速球鉆磨顱骨至直徑smm的臨界謂·缺損2.3取材與檢測(cè):2.3.1標(biāo)本處理:術(shù)后16周，將實(shí)驗(yàn)組大鼠麻醉，4%多聚甲醛溶液灌注完成內(nèi)固定。取初固定的大鼠新鮮顱骨標(biāo)本，置于4%的多聚甲醛溶液固定24h。修整、切開(kāi)骨損。分別制作石蠟切片和冰凍切片。石蠟切片制作:0.5MEDTA脫鈣液振蕩鈣6周(每2天更換一次脫鈣液)，直到脫鈣完成。流水充分沖洗后，標(biāo)本用級(jí)酒精逐級(jí)脫水:50%乙醇脫水1小時(shí)~70%乙醇2小時(shí)一80%乙醇過(guò)夜一95乙醇I脫水lh一95%乙醇111小時(shí)一100%乙醇11小時(shí)一100%乙醇11lh，取晾干一二甲苯透明11小時(shí)一二甲苯透明H50分鐘一浸蠟、包埋，用刀片修整

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及示蹤優(yōu)化[J]. 何秀華,李東良,江軍,程變巧,楊才生.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2011(02)
[2]殼聚糖-納米羥基磷灰石復(fù)合材料修復(fù)兔骨缺損過(guò)程中BMP-2的表達(dá)[J]. 汪皖,徐培,吳海珍.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2010(04)
[3]大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞活體示蹤標(biāo)記方法的研究現(xiàn)狀[J]. 馬云霞,宋京翔,涂小煌.  醫(yī)學(xué)綜述. 2010(13)
[4]應(yīng)用GFP基因轉(zhuǎn)染示蹤BMSCs在組織工程下頜骨內(nèi)的分化[J]. 袁捷,韋敏,祁佐良,陳瑾君,崔磊,曹誼林.  中國(guó)口腔頜面外科雜志. 2010(02)
[5]骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合殼聚糖體外構(gòu)建組織工程軟骨的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 郭慶華,劉強(qiáng),李平,盧向東.  中國(guó)藥物與臨床. 2010(01)
[6]大鼠顱骨缺損模型在骨組織工程中的應(yīng)用[J]. 尹宏宇,崔磊,曹誼林.  中國(guó)美容醫(yī)學(xué). 2009(05)
[7]成骨細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)BMSCs誘導(dǎo)分化作用研究[J]. 周昆鵬,陳曉禾,常麗,李秀群,李馴虎,張玨,鄧力.  中國(guó)修復(fù)重建外科雜志. 2009(02)
[8]優(yōu)化酶消化法體外培養(yǎng)及鑒定SD大鼠的成骨細(xì)胞（英文）[J]. 王雙利,劉寧,楊淑野,吳昊,查振剛.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2008(15)
[9]仿生多層納米羥基磷灰石/殼聚糖復(fù)合支架對(duì)兔骨缺損的修復(fù)[J]. 孔麗君,敖強(qiáng),王愛(ài)軍,龔鍇,王曦,公衍道,趙南明,張秀芳.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2007(05)
[10]比較不同來(lái)源人成骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式及其生物學(xué)特性[J]. 郭宗科,章慶國(guó),李靜,張嬌.  中國(guó)臨床康復(fù). 2006(13)

碩士論文
[1]組織化學(xué)染色方法在生長(zhǎng)板組織學(xué)研究中的應(yīng)用[D]. 劉曉娟.河北醫(yī)科大學(xué) 2007
[2]大鼠脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞三維立體培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 單秀莉.山東大學(xué) 2006
[3]納米羥基磷灰石/殼聚糖復(fù)合BMP再血管化的初步實(shí)驗(yàn)研究[D]. 彭超.四川大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3291258