本文關(guān)鍵詞：未折疊蛋白反應(yīng)在增強(qiáng)口腔鱗癌藥物治療敏感性中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 1.探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78在口腔鱗癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后間的關(guān)系。 2.探討口腔鱗癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78表達(dá)的關(guān)系。 方法： 1.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析GRP78的表達(dá)與口腔鱗癌患者臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系； 2. MTT法探討奧沙利鉑、衣酶素以及二者合用24、48、72h后對(duì)人口腔鱗癌KB細(xì)胞存活率的影響，以明確其劑量-效應(yīng)關(guān)系； 3.集落克隆法探討奧沙利鉑、衣酶素單獨(dú)及聯(lián)合使用對(duì)人口腔鱗癌KB細(xì)胞集落克隆形成的抑制作用； 4. PI單染，檢測(cè)奧沙利鉑、衣酶素以及二者合處理人口腔鱗癌細(xì)胞KB24h后對(duì)誘導(dǎo)人口腔鱗癌細(xì)胞凋亡的影響； 5. Western blot法探討奧沙利鉑、衣酶素以及二者合用處理人口腔鱗癌細(xì)胞KB24h后對(duì)人口腔鱗癌細(xì)胞KB GRP78、Caspase-12表達(dá)的影響； 6. Caspase-3活性試劑盒檢測(cè)Caspae-3活性； 7. siRNA法下調(diào)GRP78后，Western blot法檢測(cè)口腔鱗癌細(xì)胞中GRP78蛋白的表達(dá)，PI單染檢測(cè)下調(diào)GRP78后奧沙利鉑對(duì)人口腔鱗癌細(xì)胞KB凋亡的影響。 結(jié)果： 一、GRP78在口腔鱗癌患者組織中的表達(dá)與臨床病理特征、預(yù)后關(guān)系的相關(guān)性 1. GRP78和口腔鱗癌患者臨床病理特征間的關(guān)系 GRP78的陽(yáng)性表達(dá)與患者的腫瘤直徑、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分化程度等因素有關(guān)且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。GRP78的表達(dá)與年齡、性別、抽煙、飲酒等因素?zé)o關(guān)。 2. GRP78陽(yáng)性表達(dá)的患者預(yù)后的存活率低于GRP78陰性表達(dá)的患者。 3. Cox模型分析年齡、遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移、GRP78陽(yáng)性表達(dá)是影響口腔鱗癌患者生存期的風(fēng)險(xiǎn)因子。 二、衣霉素聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)人口腔鱗癌KB細(xì)胞增殖及凋亡的影響 1.衣霉素增強(qiáng)奧沙利鉑對(duì)人口腔鱗癌KB細(xì)胞增殖的抑制作用 衣霉素單獨(dú)作用于人口腔鱗癌KB細(xì)胞24、48、72h后，口腔鱗癌KB細(xì)胞存活率為90.37%、89.44%、88.91%；奧沙利鉑單獨(dú)作用于人口腔鱗癌KB細(xì)胞24、48、72h后，口腔鱗癌KB細(xì)胞存活率分別為62.36%、47.54%、40.47%。衣霉素與奧沙利鉑聯(lián)合使用作用與人口腔鱗癌KB細(xì)胞24、48、72h后，，口腔鱗癌KB細(xì)胞的存活率為50.78%、37.77%、23.24%，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P 0.05，見圖1)。 2.衣霉素增強(qiáng)奧沙利鉑對(duì)人口腔鱗癌KB細(xì)胞集落克隆形成的抑制作用 0.25μmol/L衣霉素、0.125μmol/L奧沙利鉑單獨(dú)以及聯(lián)合使用作用于人口腔鱗癌KB細(xì)胞，結(jié)果表明，衣霉素在低濃度即可明顯抑制人口腔鱗癌KB細(xì)胞的集落克隆形成，聯(lián)合使用時(shí)可提高奧沙利鉑對(duì)人口腔鱗癌KB細(xì)胞集落克隆形成的抑制作用。 3.衣霉素增強(qiáng)奧沙利鉑誘導(dǎo)人口腔鱗癌KB細(xì)胞凋亡的作用 0.5μmol/L衣霉素作用于人口腔鱗癌KB細(xì)胞48h后，人口腔鱗癌KB細(xì)胞的凋亡率為8.3%。0.25μmol/L奧沙利鉑作用于人口腔鱗癌KB細(xì)胞48h后，人口腔鱗癌KB細(xì)胞凋亡率為12.2%。0.5μmol/L衣霉素與0.25μmol/L奧沙利鉑聯(lián)合作用于人口腔鱗癌KB細(xì)胞48h后，誘導(dǎo)人口腔鱗癌KB細(xì)胞的凋亡率為26.2%。 4.衣霉素增強(qiáng)奧沙利鉑誘導(dǎo)口腔鱗癌KB細(xì)胞的Caspase-3激活作用 低濃度衣霉素作用人口腔鱗癌KB細(xì)胞后，Caspase-3的活性并未出現(xiàn)明顯提高，但衣霉素與奧沙利鉑聯(lián)合使用時(shí)可明顯提高奧沙利鉑對(duì)人口腔鱗癌KB細(xì)胞Caspase-3的激活作用。 5.衣霉素可提高奧沙利鉑誘導(dǎo)的人口腔鱗癌KB細(xì)胞的GRP78、Caspase-12和Caspase-3蛋白的表達(dá) 衣霉素可誘導(dǎo)人口腔鱗癌KB細(xì)胞GRP-78的表達(dá)，衣霉素聯(lián)合奧沙利鉑作用于人口腔鱗癌KB細(xì)胞后，可誘導(dǎo)GRP-78更強(qiáng)烈的的表達(dá)。衣霉素、奧沙利鉑聯(lián)合使用使得Caspase-12、Caspase-3蛋白的表達(dá)高于單獨(dú)用藥組。 三、下調(diào)GRP78具有增強(qiáng)奧沙利鉑誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡的敏感性 1.SiRNA轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè) 將不同序列的siRNA-GRP78和空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)入口腔鱗癌細(xì)胞KB中，用Western blot法檢測(cè)了口腔鱗癌細(xì)胞KB中GRP78的表達(dá)，與對(duì)照轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-GRP78組中GRP78表達(dá)明顯降低。 2.SiRNA轉(zhuǎn)染對(duì)奧沙利鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡增敏作用 將口腔鱗癌細(xì)胞KB進(jìn)行轉(zhuǎn)染下調(diào)GRP78后，奧沙利鉑對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞KB凋亡率明顯升高，與單用奧沙利鉑組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論： 1.口腔鱗癌組織中GRP78在蛋白水平上的表達(dá)量明顯高于其在正常組織中的表達(dá)量 2.口腔鱗癌組織中GRP78在蛋白水平上的表達(dá)量與臨床病理特征、預(yù)后情況存在相關(guān)性，可以作為一個(gè)潛在口腔鱗癌癥標(biāo)記物用以判斷口腔鱗癌的惡性程度以及預(yù)測(cè)其預(yù)后。 3.急性或過(guò)度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用大于保護(hù)作用。 4.下調(diào)GRP78后，化療藥物誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡率明顯上升，由此證明GRP78在口腔鱗癌中具有的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：口腔鱗癌 奧沙利鉑 衣酶素 siRNA 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 GRP78 Caspase-3 Caspase-12 凋亡 免疫組化 預(yù)后 干擾RNA
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.8
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 引言11-13
• 材料與方法13-23
• 1. 材料與儀器13-14
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法14-22
• 2.1 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè) GRP78 的表達(dá)14-15
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)15-16
• 2.3 MTT 法檢測(cè)細(xì)胞存活率16-17
• 2.4 集落克隆形成實(shí)驗(yàn)17
• 2.5 PI 染色檢測(cè)凋亡17-18
• 2.6 Capases-3 活性檢測(cè)18-19
• 2.7 siRNA 轉(zhuǎn)染19
• 2.8 免疫印跡法檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)19-22
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理22-23
• 結(jié)果23-31
• 1 GRP78 在口腔鱗癌患者中的表達(dá)與臨床病理特征、預(yù)后關(guān)系的相關(guān)性23-26
• 2 衣霉素聯(lián)合奧沙利鉑對(duì) KB 細(xì)胞增殖及凋亡26-29
• 3 下調(diào) GRP78 具有增強(qiáng)奧沙利鉑誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡的敏感性29-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 致謝39-40
• 附錄 A 英中文術(shù)語(yǔ)縮略語(yǔ)對(duì)照表40-41
• 附錄 B 主要試劑配制方法41-44
• 附錄 C 個(gè)人簡(jiǎn)歷及發(fā)表論文44-45
• 附錄 D 綜述45-53
• 參考文獻(xiàn)50-53

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 浦龍健;黃瑩瑩;李陽(yáng);徐錦程;蔣琛琛;劉浩;蔣志文;;siRNA沉默葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78可增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年01期

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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7 付榮;自分泌型GRP78對(duì)腸癌細(xì)胞增殖影響及機(jī)制研究[D];山西大學(xué);2013年

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  本文關(guān)鍵詞：未折疊蛋白反應(yīng)在增強(qiáng)口腔鱗癌藥物治療敏感性中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：320319