BRD4抑制劑JQ1誘發(fā)舌鱗狀細胞癌發(fā)生免疫原性細胞死亡的初步探究
發(fā)布時間：2021-02-04 10:07
目的頭頸鱗狀細胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）對多種化療藥呈現(xiàn)出耐受性,免疫抑制是主要原因之一,研究發(fā)現(xiàn)通過解除免疫抑制可以改善化療效果甚至達到完全緩解,因此多種免疫療法應運而生,除免疫檢查點阻滯療法等以外,另一種比較感興趣的研究是通過促進腫瘤細胞釋放危險相關分子模式（danger-associated molecular patterns,DAMPs）,如細胞膜表面的鈣網(wǎng)蛋白（Calreticulin,CALR）和細胞外基質(zhì)中的ATP及高遷移蛋白l（High Mobility Group Box 1 protein,HMGB1）等,從而增強免疫細胞的成熟、遷移、吞噬及分泌等功能,使其殺傷和吞噬腫瘤細胞,這一過程被稱作免疫原性細胞死亡（immunogenic cell death,ICD）,且總是伴有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激信號分子真核翻譯起始因子 2a（eukaryotic translation initiation factor 2a,eIF2a）的磷酸化,因此P-eIF2a被視作ICD的生物標記。研究發(fā)現(xiàn)一些化療藥、放療及光動力療...
【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：55 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖３－１用ＣＣＫ－８法檢測Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７細胞的增殖情況，測得ＪＱｌ對Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７細胞的??適宜工濃是４?ｕ?Ｍ和２?ｙ?Ｍ，?０Ｄ以平均士ＳＥＭ表示
后?ＢＲＤ４??的相對ｍＲＮＡ水平明顯降低。??１８１?Ｃ？Ｉ２７??（Ａ）?ＪＱ１?（Ｂ）?Ｉ?——??ＤＭＳＯ?＾?８ｈ?２４ｈ￣?｜｜＇°?Ｈ?＿?—■ａ—??＿?＿?ｍ?＿４?］?ｉ?ｊＨ?Ｂｆ｜??麵ｉＭＭＰ?Ｐ＊?Ａｃｔ?ｉｎ?＾?■ｐ＇??（Ｃ）?１?＇１?－?ＳＣＣ７??ｍｒｎｍｍ?ｍｍｍｍ?ｂｒ〇４?．?＼ｆ?ｎ??ＳＣＣ７?ｒ�！�?＿?圍圍?ｆｌ??ｍｍ?ｍａｍ?ｍｍ?ｍｍ?Ｐ－ａｃｔｍ」?－Ｊ?＿?＿?丨＿?丨■??，＇＇，??圖３－３?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實驗測得ＪＱｌ作用于Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７后，ＢＲＤ４蛋白表??達水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義。??３．?２?ＪＱ１可誘發(fā)Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７細胞中ＣＡＬＲ／ＥＲｐ５７向細胞膜迀移??通過流式細胞術測得經(jīng)ＪＱ１刺激４ｈ后Ｃａｌ２７細胞膜表面的ＣＡＬＲ和ＥＲｐ５７的??陽性率分別為約８３．?１％和６３．９％，較對照組的１２．３％?（ＣＡＬＲ）和１８．９％?（ＥＲｐ５７）??明顯高。ＳＣＣ７細胞膜表面ＣＡＬＲ和ＥＲｐ５７陽性表達率分別為１９．?０％和２３．?６％，經(jīng)??ＪＱ１作用后其陽性表達率同樣明顯升高，ＣＡＬＲ約為５７．?６％，?ＥＲｐ５７約為５４．?０％?（圖??３．?２－１）；提取膜蛋白，用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ對細胞膜表面的ＣＡＬＲ及ＥＲｐ５７的表達情??況進行半定量分析，發(fā)現(xiàn)ＪＱ１作用４ｈ后細胞膜上ＣＡＬＲ及ＥＲｐ５７的相對蛋白表達??水平均增加（圖３．?２－２和圖３．?２－３），差異有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．?００１）；免疫熒光實??驗亦發(fā)現(xiàn)經(jīng)ＪＱ１處理后的Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７細胞膜表面的ＣＡＬＲ熒光強度
?山東大學碩士學位論文???Ｃａｌ２７?ＳＣＣ７??應＿■??■■■??ＣＴＲＬ?ＪＱｌ?４ｈ?ＣＴＲＬ?ＪＱ１４ｈ??圖３－７在共聚焦顯微鏡下觀察的ＣＡＬＲ在Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７細胞膜表面的表??達情況??然而此時并沒有明顯的細胞凋亡，直至約２４小時才測得Ａｎｎｅｘｉｎ?ｆ細胞比??例有統(tǒng)計學差異（圖３．２－５），且主要為Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ７７?ＡＡＤ細胞，即尚在早期凋??亡階段，這一現(xiàn)象說明ＪＱ１誘導的ＣＡＬＲ／ＥＲｐ５７在細胞膜上的暴露較為迅速，且??不是磷脂酰絲氨酸暴露的結果。??ＤＭＳＯ?ＪＱ１?８ｈ?ＪＱ１?２４ｈ?ＪＱ１?４８ｈ?＾１２７?＾??牟二?Ｇａｌｅ?Ｐ１?〇ａｔｅ?ｐｔ?＿ｃ，ａｔｅ?Ｐｉ???￣?Ｏａｉｅ?Ｐｉ?８０?？？？??＿龜？丨＃??Ｑ?＃?＾?＾?＾??＾?，ＧＡＴＥ?ｆ’?．‘ＧＡＴＥ?ｐ＿］??．?ｇａｔｅ?ｐｉ?－?６ａｔｅ?ｐｉ?２廣廣７?Ｅ３?ｅａｒｌｙ?ｓｔａｇｅ??卜，：丨?Ｗ＾＇?ｈ?＃？?１?Ｗ?５０ｌ?■?????ｊ?ｆ?�。�??＾！，ｉ?１〇．?＾?Ｓ?議Ｉ??ｊ?ｗ?ａ?，ｊｉ?ｊ?＾?，．？?ｊ．?ｙｔ，．：：』‘．．．ｉ?－ｍ?‘．ｎ?－ｉ?知?，ｕ?ｇｇｇｇｇ?ａＳＳＳ?ｇｇｇｇｇ??Ａｎｎｅｘｉｎｖ?。，，，，??圖３－８通過Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ及７－ＡＡＤ對細胞染色發(fā)現(xiàn)ＪＱｌ引起的磷脂酰絲氨酸的暴??露遠落后于ＣＡＬＲ／ＥＲｐ５７的暴露??２８??
本文編號：3018136
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【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖３－１用ＣＣＫ－８法檢測Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７細胞的增殖情況，測得ＪＱｌ對Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７細胞的??適宜工濃是４?ｕ?Ｍ和２?ｙ?Ｍ，?０Ｄ以平均士ＳＥＭ表示
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